缓解体力疲劳功能白酒的抗疲劳活性分析研究

施 鹏，吴 鑫，童国强，易 翔，管 莹，左可成，陈 才，罗高建，倪书干，乐细选，朱美玲

（劲牌有限公司，湖北大冶 435100）

近年来，国内白酒行业竞争日趋激烈，消费市场不断细分化与多元化，差异化和定制化的产品设计逐渐成为新品研发的主流趋势。一方面随着社会的发展，人们的消费观念发生了很大的改变，消费进入了“生感阶段”，即在满足物质生活需求的同时，追求精神生活的需要。消费者已不再是“饱腹”的需求，而是“科学地吃”“吃出健康”的高质量的追求，健康饮酒、理性饮酒的消费理念深入人心，健康成为人们最根本的需要。另一方面，在现代高效快节奏生活方式下越来越多的人出现慢性疲劳综合征(chronic fatigue syndrome,CFS)，慢性疲劳综合征是一组以严重疲劳为主要症状的症候群，其原因不明并持续存在或反复发作，且患者经充分休息后仍得不到缓解，持续时间在6 个月以上，部分患者还伴有低热、咽喉痛、头痛、肌肉或关节痛、淋巴结肿痛、注意力不集中、记忆力减退、失眠和抑郁等症状，进而使得患者日常活动能力下降，严重者甚至常年卧床，无法正常工作、生活，给患者的家庭和社会带来了巨大的心理压力和经济负担。随着社会经济的发展，我国慢性疲劳综合征的发病率正逐年上升，据统计，我国患病人数中，女性约为男性的4倍。慢性疲劳综合征的发病具有职业及年龄特点，白领阶层、高校教师、医护人员等为高发人群，慢性疲劳综合征已严重影响人们的生活质量。因此，抗疲劳功能成为众多消费者的强烈诉求。

中医学认为，人体的健康依赖于阴阳平衡，脏腑协调，气血充盈。疲劳与“虚劳”“虚证”有关。中医针对“虚劳”采取的措施主要为增强人体的正气，即《素问·刺法论篇》所言“正气内存，邪不可干”。人的正气主要由精气等物质构成，因此补气血类药物对于增强人体正气，缓解疲劳有显著作用。人参大补元气，补脾益肺；黄芪补气固表；淫羊藿补肾阳，强筋骨；枸杞子滋补肝肾，益精明目。通过查阅现代药理学的相关报道，发现人参、黄芪、淫羊藿、枸杞子在缓解体力疲劳方面有较为显著的作用。但以酒为载体使用人参、黄芪、淫羊藿、枸杞子来缓解体力疲劳的研究未见文献报道。因此本研究针对人参、黄芪、淫羊藿、枸杞子复方酒剂进行了小鼠实验，观察小鼠负重游泳时间、血清尿素氮、血乳酸以及肝糖原，以期研究开发的产品是否具备缓解体力疲劳的功效。

1 材料与方法

1.1 材料、试剂及仪器

1.1.1 试验动物

SPF 级BALBC/C 雄性成年小鼠300 只，体重18～22 g，北京维通利华实验动物技术有限公司提供，动物室环境条件：温度为20 ℃±2 ℃，相对湿度55%～75%。

1.1.2 样品制备

缓解体力疲劳功能白酒、38%vol 酒基：劲牌有限公司。成人推荐每天摄入100 mL。按成人60 kg体重计，推荐摄入量可折算为每日1.67 mL/kg·bw。试验时取10 倍浓缩液（缓解体力疲劳功能白酒经60 ℃减压浓缩，以蒸馏水及38%vol 酒基调配至乙醇浓度15%vol），冷藏备用。

1.1.3 仪器设备

BSA423-CW电子天平（德国Sartorious），DB080 小鼠恒温游泳池（北京智鼠多宝生物科技），SpectarMax M2 全能酶标仪（美国Molecular Devices)，BS-200 全自动生化分析仪（美国Mindray），PD866E-345K 计时器（湖南兴科达电气有限公司），HH 系列-8 水浴锅（青岛聚创环保集团有限公司），血清尿素氮、乳酸及肝糖原测定试剂盒（北京中生生物工程高技术公司）。

1.2 试验方法

1.2.1 分组与给药

雄性小鼠300 只，适应3 d 后随机分为4 大组，分别进行负重游泳实验，血浆尿素氮测定，肝糖原测定和血乳酸测定，每大组75 只。将每组75 只雄性小鼠随机分正常对照组、酒基对照组和3 个剂量组，每组15只。

对照组小鼠给予蒸馏水；酒基对照组给予15%vol 酒基（取38%vol 酒基39.5 mL，蒸馏水定容至100 mL）；各剂量组受试物配制如下：低剂量组（16.7 mL/kg·bw）、中剂量组（33.4 mL/kg·bw）、高剂量组（50.1 mL/kg·bw）分别取10 倍浓缩液8.35 mL加38 %vol 酒基36.2 mL、10 倍浓缩液16.7 mL 加38%vol酒基32.9 mL、10倍浓缩液25.1mL加38%vol酒基29.6 mL，再逐一以蒸馏水定容至100 mL。

对照物和受试物以经口灌胃的方式给予，灌胃量均为0.2 mL/10 g·bw，连续灌胃30 d。试验期间，各组小鼠自由进食和饮水，并于试验开始、试验中期及试验末期分别称取3次体重。

1.2.2 负重游泳实验

末次给小鼠灌胃样品30 min 后，将小鼠尾根部固定5%体重的铅丝，小鼠放置在游泳箱中进行游泳试验测定，游泳池水深约35 cm，水温控制在（25±1）℃。记录小鼠自游泳开始至死亡的时间，作为小鼠负重游泳时间。

1.2.3 血清尿素氮测定

末次给小鼠灌胃样品30 min 后，将小鼠放置在游泳箱中进行游泳，水温控制在（30±1）℃，游泳时间为20 min，游泳后将小鼠取出休息20 min 后立即取眼球采血。分离血清按试剂盒说明书用半自动生化分析仪测定BUN。

1.2.4 肝糖原测定

末次给小鼠灌胃样品30 min 后，立即处死，取肝脏经生理盐水漂洗后用滤纸吸干，准确称取肝脏75 mg，按试剂盒说明书采用蒽酮比色法测定其肝糖原含量。

1.2.5 血乳酸测定

先于末次灌胃30 min 后采眼眶血。采血后的小鼠于30 ℃±1 ℃水箱中游泳10 min，立即取出擦干采眼眶血，游泳后的小鼠置于安静状态下休息20 min 后，再次采眼眶血。按试剂盒说明书分别测定小鼠游泳前、游泳后和休息后的血乳酸水平。血乳酸曲线下面积用下式表示：

血乳酸曲线下面积＝1/2×（游泳前血乳酸值＋游泳后血乳酸值）×10＋1/2×（游泳后血乳酸值＋游泳后休息后血乳酸值）×20

1.2.6 试验数据统计

方差分析及Dunnett’s T3检验（SPSS软件包）。

2 结果与分析

2.1 小鼠负重游泳时间测定结果

小鼠体重及负重游泳时间测定结果如表1所示。

表1 负重游泳试验小鼠各期体重及受试物对负重游泳时间的影响(X±SD)

试验末期小鼠体重相对于初始体重均有所增加，但同期体重组间没有显著性差异，表明受试物对小鼠体重没有明显影响。

酒基对照组同对照组相比，无显著性差异，表明酒基对小鼠负重游泳无影响。中剂量组小鼠负重游泳时间与对照组、酒基对照组相比显著增加，差异均有显著性（P＜0.05)，表明受试物有显著延长小鼠负重游泳时间的作用。

2.2 血浆尿素氮水平测定结果

血浆尿素氮水平测定结果如表2 所示。

表2 血清尿素氮试验期间小鼠体重变化及恒温游泳20min后血清尿素氮水平(X±SD)

试验末期小鼠体重相对于初始体重均有所增加，三个剂量组中、晚期体重较空白对照下降，但与酒基对照组间没有显著差异，表明受试物对小鼠体重没有明显影响，该结果与2.1结论一致。

小鼠游泳后血清尿素氮测定结果表明，酒基对照组和3 个剂量组小鼠尿素氮水平低于对照组，中剂量组小鼠尿素氮水平低于酒基对照组，且差异显著（P＜0.05)。该结果表明受试物有降低小鼠运动后血清BUN水平的作用。

2.3 肝糖原测定结果

肝糖原测定结果如表3所示。

由表3 可见，试验期间各组小鼠体重均有所增加，但同期体重组间没有显著性差异，表明受试物对小鼠体重没有明显影响，该结果与前面的实验结果一致。

表3 受试物对小鼠体重及肝糖原含量的影响(X±s)

酒基对照组同对照组相比，无显著性差异，表明酒基对小鼠肝糖原水平无影响。各剂量组与对照组相比，差异均无显著性差异，中剂量与酒基对照组相比，肝糖原含量增加，差异有显著性（P＜0.05）。该结果表明，抗疲劳健康白酒具有升高小鼠肝糖原含量的作用。

2.4 血乳酸曲线下面积值测定结果

试验期间，小鼠3 次（初始、中期和末期）体重如表4所示。

表4 血乳酸试验期间小鼠体重的变化(X±SD)

试验末期小鼠体重相对于初始体重均有所增加，但同期体重组间没有显著性差异，表明受试物对小鼠体重没有明显影响，该结果与前面的实验结果一致。

小鼠在游泳前、游泳后及休息20 min 后血乳酸水平及其差值如表5所示。

表5 受试物对小鼠运动前后血乳酸水平的影响（X±SD，mmol/L）

酒基对照组同对照组相比，无显著性差异，表明酒基对小鼠血乳酸含量无影响。各组小鼠运动后血乳酸水平明显升高，经20 min的休息后迅速下降。各剂量组小鼠运动后血乳酸曲线下面积和对照组无显著性差异，高剂量组小鼠运动后血乳酸曲线下面积较酒基对照组降低，且差异显著（P＜0.05）。说明受试物有降低小鼠运动后血乳酸水平的作用。

3 讨论与结论

当疲劳发生时不仅机体的工作运动能力下降，身体也呈现亚健康状态或疾病前兆。长期处于疲劳状态身体会过早衰老，罹患器质性疾病的风险也将大幅增高。力竭游泳实验、血浆尿素氮、肝糖原及血乳酸是检测机体疲劳的重要指标。运动能力的下降是体力疲劳最为直观的外在表现，负重游泳实验可以反映出运动能力的下降程度，同时也是缓解体力疲劳能力的重要指标；血浆尿素氮随体内氨基酸分解代谢而增高，当运动负荷增加，氨基酸分解加剧，血浆尿素氮水平也呈正向增高，缓解体力疲劳样品抑制或清除血浆尿素氮的能力同其抗疲劳功效呈正相关；糖原是机体重要能量来源，肝糖原是贮存糖原的主要方式之一，糖原分解为葡萄糖以满足运动所需，糖原储存量同运动耐力有密切的关系，当糖原消耗过多会引起机体疲劳；乳酸是在剧烈运动的情况下，肌肉因缺氧发生糖酵解反应而产生的，乳酸大量积累导致肌肉酸胀，引起疲劳，因此血乳酸清除能力越强，抗疲劳作用越显著。

在实验中，缓解体力疲劳白酒中剂量组可以显著提高负重游泳时间，可显著降低小鼠血浆尿素氮水平，显著增加肝糖原含量；高剂量组可显著降低小鼠运动后血乳酸曲线下面积，说明缓解体力疲劳功能白酒具有缓解体力疲劳的功效。经常饮用缓解体力疲劳功能白酒能减少罹患慢性疲劳综合征的风险，有利于提高消费者的身体健康。