温阳振衰颗粒对慢性心力衰竭大鼠血清Hcy及cTnT的影响

湖南中医药大学中西医结合学院，湖南 长沙 410208

慢性心力衰竭(congestive heart failure,CHF)简称慢性心衰，为各种心脏疾病的终末阶段，是导致心血管疾病患者死亡的重要原因之一，给患者家庭带来巨大的经济负担[1]。因此对CHF发生和发展机制的研究一直是心血管病防治的重点。本课题采取动物实验，观察温阳振衰颗粒对CHF大鼠血清同型半胱氨酸(Hcy)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)的影响，进而探讨温阳振衰颗粒治疗CHF的作用机制，为临床CHF的综合治疗提供理论和实验依据。

1 仪器与材料

1.1 实验动物 健康雄性SD大鼠60只，体重(200±20)g，由湖南中医药大学实验室动物中心提供，动物合格证编号为：SCXK(湘)2016-0002。

1.2 药物与试剂 温阳振衰颗粒(批准文号：201709，规格8 g/包，湖南中医药大学第一附属医院药剂科)；马来酸依那普利片(批准文号：H32026567，规格：10 mg/片，扬子江药业集团江苏制药股份有限公司)；盐酸阿霉素(批准文号：H44024359，规格 10 mg/瓶，深圳万乐药业有限公司)。大鼠Hcy 酶联免疫分析试剂盒(批号：YZR965611，上海研尊生物科技有限公司)；大鼠cTnT 酶联免疫分析试剂盒(批号：YS-H5461，上海研生实业有限公司)。

1.3 仪器 GE LOGIQ-3彩色多普勒超声诊断仪(美国)；MB-530多功能酶标分析仪(深圳市汇松科技发展公司)；TGL-16台式高速冷冻离心机(湘仪离心机仪器有限公司)。

2 实验方法

2.1 造模 将注射用的盐酸阿霉素，用0.9%NaCl注射液稀释成1.0 mg/mL溶液，进行腹腔注射，每次2 mg/kg，每周注射1次，连续注射6周，总累计药量12 mg/kg。每次注射前均应重新测量体重，并作为该次用药剂量的计算标准。6周后对大鼠进行心功能测定以确定心衰模型是否复制成功[2]。

2.2 分组与给药 SD大鼠60只，随机选取10只为正常组，其余的SD大鼠按照“2.1造模”方法进行CHF模型复制。造模成功后对存活的SD大鼠做心脏彩超检查进行心功能测定，根据心功能分层随机分成5组：模型组、阳性对照组、温阳振衰颗粒低剂量组(温阳低剂组)、温阳振衰颗粒中剂量组(温阳中剂组)和温阳振衰颗粒高剂量组(温阳高剂组)。

第7周开始灌胃给药，剂量参照人鼠体表面积法进行换算[3]，温阳低、中、高剂量组分别给予温阳振衰颗粒0.72 g/kg、1.44 g/kg、2.88 g/kg用蒸馏水稀释后灌胃，阳性对照组给予依那普利 1.8 mg/kg 用蒸馏水配成混悬液灌胃，正常组和模型组给予等量蒸馏水灌胃，每天2次，各组均连续灌胃4周[2]。

2.3 心脏彩超检查 将大鼠麻醉满意后，行心脏彩超检查。计算左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率 (LVFS)、左心室舒张末期内径(LVDD)、左室收缩末期内径(LVSD)。取5个心动周期求平均值[4]。

2.4 血清Hcy、cTnT的测定 处死大鼠前对各组大鼠进行腹主动脉采血，经肝素钠抗凝，全血静置30 min后，离心(3000 r/min，15 min)，分离血清置-80 ℃冰箱保存。Hcy、cTnT的测定均采用ELISA检测，操作步骤严格按试剂盒说明进行。

3 结果

3.1 一般情况 正常组大鼠反应灵敏，活动良好，进食活跃、体质量明显增长；模型组大鼠在造模初期体质量略有上升，造模后期，与正常组比较，模型组大鼠饮食、活动明显减少，出现腹泻、体质量降低、肢体浮肿等心功能不全症状；各治疗组大鼠饮食活动较正常组减少，体质量略有下降，与模型组比较，各治疗组大鼠的心功能不全症状明显较轻。在实验结束前，模型组，阳性对照组，温阳低、中、高剂量组因腹泻各死亡1只，因麻醉意外模型组死亡2只，温阳低剂组死亡1只。

3.2 大鼠心功能指标的变化 模型组大鼠的LVEF、LVFS均显著降低，LVDD、LVSD均显著升高，与正常组比较，差异均有统计学意义(P<0.01)；各治疗组大鼠的LVEF、LVFS均明显升高，LVDD、LVSD均显著降低，与模型组比较，其差异具有统计学意义(P<0.01，P<0.05)。结果见表1。

3.3 各组大鼠血清Hcy、cTnT的变化 实验后各组大鼠血清Hcy、cTnT的变化情况见表1。与正常组比较，模型组大鼠血清中Hcy和cTnT的含量均显著增高，差异具有统计学意义(P<0.01)；与模型组相比较，阳性对照组和温阳各剂量组大鼠血清中Hcy和cTnT的含量均明显减少，差异具有统计学意义(P<0.01)。结果见表2。

表1 温阳振衰颗粒对各组大鼠心功能指标的影响

组别nLVEF/%LVFS/%LVDD/mmLVSD/mm正常组1071.81±3.5643.92±2.985.89±0.222.92±0.25模型组740.55±4.13∗26.59±2.84∗7.20±0.29∗4.97±0.19∗阳性对照组961.68±3.23∗△39.98±2.0∗△6.29±0.14∗△3.89±0.26∗△温阳低剂组848.49±3.31∗△□32.84±1.21∗△□6.88±0.14∗▲□4.58±0.17∗△□温阳中剂组954.99±2.37∗△□☆36.13±1.05∗△□★6.62±0.10∗△■★4.23±0.17∗△■★温阳高剂组960.76±3.59∗△☆◆39.56±1.57∗△☆◆6.30±0.20∗△☆◆3.89±0.23∗△☆◆

表2 实验后各组大鼠血清Hcy和cTnT的变化

组别nHcy/pmoL/mLcTnT/pg/mL正常组1016.54±2.46596.98±26.56模型组767.49±9.81∗1236.18±39.06∗阳性对照组927.42±5.21∗△878.12±28.63∗△温阳低剂组845.81±4.21∗△□1100.29±31.35∗△□温阳中剂组935.83±2.59∗△■☆986.09±33.15∗△□☆温阳高剂组926.36±3.92∗△☆◆885.76±15.79∗△☆◇

4 讨论

CHF属于中医“心悸”“喘证”“水肿”“痰饮”等范畴。其病机主要是心气(阳)亏虚，阴阳失调，瘀血水饮痰浊互结所致，治宜益气温阳、利水消肿为主[4]。温阳振衰颗粒秉承扶阳宗旨，化裁于仲景经方[5]，具有温阳益气、利水消肿之功，主要由附子、红参、干姜、甘草等中药组成。前期实验发现温阳振衰颗粒能有效改善CHF动物的症状，调控心室重构，延缓CHF的病程。

同型半胱氨酸是蛋氨酸与半胱氨酸在代谢过程中产生的一个重要的中间产物。正常情况下，Hcy在血清内呈低表达，一旦其水平表达升高，将损害机体血管基质及内皮细胞，对动脉血管壁造成不利影响[6]。Hcy主要通过致炎症因子、氧化应激和内质网应激、DNA低甲基化、免疫应答等多种细胞机制激活炎症细胞因子、细胞分化介质，从而损伤内皮细胞功能，进而导致动脉粥样硬化的发生与发展[7]。大量研究发现血浆HCY水平在CHF患者中明显增加，高同型半胱氨酸血症(HHCY)与心力衰竭的严重程度呈现出明显的相关性，Hcy水平能够反应左室功能受损和慢性心功能不全的程度[8-9]。在心力衰竭严重的患者中，HCY还可以作为心力衰竭死亡率的预测指标。HHCY伴心衰患者的3年死亡率是HCY正常的心衰患者的2倍[10]。实验研究[11]表明，HHcy可促使心室肌细胞胶原纤维过度增加，导致心室肥厚。心脏结构改变最终转变为功能障碍，并同时损害心脏的左室收缩和(或)舒张功能[12]。

cTnT是一种30-35kDa的蛋白质，主要存在于心肌细胞中，其作用主要是调节心肌收缩，通过抑制肌动蛋白中ATP酶活性松弛心肌，是一种高灵敏度、高特异度的心肌损伤的监测指标[13]。正常人在无心肌损伤时血清中cTnT含量极低，当心衰发生后，心肌组织受到损伤或生化刺激时，心肌缺血缺氧导致肌纤维溶解、坏死，细胞膜损伤破坏均可导致cTnT大量释放进入血液[14]。因此，血清中检测到的cTnT浓度可用来评价心力衰竭的发生和严重程度，也是评估心衰预后的重要指标[15]。有研究[16]指出，心衰患者可能有持续性的心肌损伤坏死，在大多数心衰患者血清中检测到cTnT水平升高可证实这个推测。动物实验表明，急性心衰大鼠的血清中cTnT水平显著升高[17]，也有临床报道心衰患者接受β受体阻断剂治疗后，血清中cTnT水平明显下降[18]。

实验结果显示，模型组大鼠血清Hcy和cTnT的水平与正常组比较明显升高。当给予温阳振衰颗粒和依那普利灌胃给药后，大鼠血清Hcy和cTnT的水平明显降低，且温阳高剂组疗效优于中、低剂组，与依那普利疗效相当。由此可见，温阳振衰颗粒改善心功能的作用机制可能与抑制炎症因子Hcy和心肌生化标志物cTnT有关。