羌藿蒲蓝胶囊质量标准的建立*

彭艺飞，李佳霖，周 蔚

（四川省乐山市中医医院，四川 乐山 614000）

羌藿蒲蓝胶囊主要由羌活、广藿香、蒲公英、板蓝根等药材组方，方中羌活辛温解表［1］，祛风除湿止痛，常用于治疗外感风寒湿邪；蒲公英味苦，可消肿散结［2］；板蓝根清热解毒，常用于抗病毒及抗菌［3］；广藿香化湿和胃［4］、祛暑解表，适用于感冒引起的消化不良、食欲不振。感冒可表现出恶寒发热、头痛身痛、食欲不振等，羌活发散解表以治其标，蒲公英、板蓝根清热解毒以治其本，广藿香调节水湿运化，治疗各种感冒的头痛、身痛、恶寒发热等症状临床疗效较好。本研究中采用薄层色谱（TLC）法对制剂中的板蓝根、蒲公英、羌活、广藿香进行定性鉴别，采用高效液相色谱（HPLC）法对板蓝根的主要有效成分（R，S）-告依春进行定量分析，以期进一步提升质量标准，为后续制剂的深度开发提供依据。现报道如下。

1 仪器与试药

仪器：Agilent 1100型高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；MD-300GDV型超声波清洗机（苏州美达超声仪器厂）；EX1035-A型电子天平（厦门莱斯德科学仪器有限公司，精度为十万分之一）；HW-601A型智能恒温水浴锅（北京易净科学仪器设备有限公司）；KQ12DT型真空干燥箱（合肥斯莱干燥设备有限公司）；EK-400D-20ZK型超纯水制造设备（深圳中科赛斯科技有限公司）；硅胶GF254薄层板（青岛海洋化工厂）。

试药：羌藿蒲蓝胶囊（医院制剂室，批号分别为20211101，20211102，20211103）；百秋李醇对照品（批号为PS0932-0030）、（R，S）-告依春对照品（批号为PS0664-0025）、咖啡酸对照品（批号为PS1331-0050）、紫花前胡苷对照品（批号为PS0385-0025），均购于成都普思生物科技股份有限公司，供含量测定用；板蓝根对照药材（批号为121177-201608）、广藿香对照药材（批号为121136-202007）、蒲公英对照药材（批号为121195-202004）、羌活对照药材（批号为120935-201809），均购于中国食品药品检定研究院；甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 TLC鉴别

板蓝根：称取样品内容物1 g，精密称定，置锥形瓶中，加水4 mL，浸泡1 h，加甲醇16 mL，室温下超声（功率300 W，频率40 kHz，下同）处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液［5］。取（R，S）-告依春对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的对照品溶液［6］。取板蓝根对照药材适量，粉碎处理，称取1 g，精密称定，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。按样品处方及工艺制备缺板蓝根的阴性样品（胶囊内容物，下同）1 g，同供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。吸取上述溶液各10 μL，点样于同一硅胶G板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（1∶1，V/V）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光（波长254 nm）灯下检视［7］。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液和对照药材溶液色谱相应位置显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。详见图1A。

蒲公英：称取样品内容物1 g，精密称定，置锥形瓶中，精密称定，加5%甲酸-甲醇溶液20 mL，室温下超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，剩余残渣加水10 mL使溶解，然后加入20 mL乙酸乙酯萃取2次，合并萃取液，水浴蒸干，残渣加1 mL甲醇使溶解，作为供试品溶液［8］。取咖啡酸对照品适量，加80%甲醇制成每1 mL含0.5 mg的对照品溶液［9］。取蒲公英对照药材适量，粉碎处理，称取1 g，精密称定，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。按样品处方及工艺制备缺蒲公英的阴性样品1 g，同供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。吸取上述溶液各10 μL，点样于同一硅胶G板上，以乙酸丁酯-甲酸-水（7∶2.5∶2.5，V/V/V）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光（波长365 nm）灯下检视［10］。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液和对照药材溶液色谱相应位置显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。详见图1 B。

图1 薄层色谱图1.Reference solution 2.Reference material solution 3-5.Test solution 6.Negative reference solution A.Isatidis Radix B.Taraxaci Herba C.Notopterygii Rhizoma et Radix D.Pogostemonis HerbaFig.1 TLC chromatograms

羌活：称取样品内容物1 g，精密称定，置锥形瓶中，加甲醇10 mL，室温下超声处理30 min，静置30 min，吸取上清液，作为供试品溶液［11］。取紫花前胡苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的对照品溶液［12］。取羌活对照药材适量，粉碎处理，称取1 g，精密称定，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。按样品处方及工艺制备缺羌活的阴性样品1 g，同供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。吸取上述溶液各10 μL，点样于同一硅胶G板（喷适量3%醋酸钠溶液）上，以三氯甲烷-甲醇（8∶2，V/V）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光（波长365 nm）灯下检视［13］。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液和对照药材溶液色谱相应位置显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。详见图1 C。

广藿香：称取样品内容物5 g，精密称定，置500 mL圆底烧瓶中，加入沸石数粒，加水100 mL，并加入乙酸乙酯1 mL，连接挥发油测定器，上端加水定容，连接回流冷凝管，电热套加热提取3 h，分离乙酸乙酯层，即得供试品溶液［14］。取百秋李醇对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含1 mg的对照品溶液［15］。取广藿香对照药材适量，粉碎处理，称取5 g，精密称定，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。按样品处方及工艺制备缺广藿香的阴性样品1 g，同供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。吸取上述溶液各2 μL，点样于同一硅胶G板上，以石油醚（30～60℃）-乙酸乙酯-冰醋酸（95∶5∶0.2，V/V/V）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，105℃烘箱加热直至斑点显色清晰，随后置日光灯下检视［16］。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液和对照药材溶液色谱相应位置显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。详见图1 D。

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件

色谱柱：Waters Symmetry Shield C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水（15∶85，V/V）；流速：1.0 mL/min；检测波长：250 nm；柱温：30℃；进样量：10 μL。

2.2.2 溶液制备

取（R，S）-告依春对照品适量，精密称定，加甲醇溶解，制成质量浓度为32 μg/mL的对照品溶液。取样品内容物适量，精密称定，加水50 mL后称定质量，超声处理30 min，放冷后再次称定质量，用水补足减失的质量，经0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液。按羌藿蒲蓝胶囊处方及工艺制备不含板蓝根的阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2.2.3 方法学考察

系统适用性试验：取2.2.2项下3种溶液各10 μL，按2.2.1项下色谱条件进样测定，记录色谱图。结果供试品溶液在与对照品溶液相同保留时间处有相应色谱峰，阴性对照无干扰。理论板数按（R，S）-告依春峰计应不低于3 000，分离度＞1.5。详见图2。

线性关系考察：精密吸取对照品溶液0.2，0.5，1.0，1.5，2.0，4.0 mL，分别置10 mL容量瓶中，加甲醇稀释并定容，摇匀，按2.2.1项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以（R，S）-告依春质量浓度（X，μg/mL）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程Y=47 050X+3 785（r=0.999 5，n=6）。结果表明，（R，S）-告依春质量浓度在0.64～12.8 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：取对照品溶液适量，按2.2.1项下色谱条件连续进样测定6次，记录峰面积。结果（R，S）-告依春峰面积的RSD为1.29%（n=6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：精密吸取供试品溶液（批号20211102）适量，分别于室温下放置0，2，4，6，8，12 h时按2.2.1项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果（R，S）-告依春峰面积的RSD为1.87%（n=6），表明供试品溶液室温下放置12 h内稳定性良好。

重复性试验：取样品（批号20211103）适量，精密称定，共6份，按2.2.2项下方法制备供试品溶液，再按

图2 高效液相色谱图1.（R，S）-goitrin A.Reference solution B.Test solution C.Negative reference solutionFig.2 HPLC chromatograms

2.2.1项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算含量。结果（R，S）-告依春含量平均值为10.23 μg/g，RSD为0.93%（n=6），表明方法重复性良好。

加样回收试验：取已知含量的样品（批号20211103）6份，精密称定，置锥形瓶中，精密量取（R，S）-告依春对照品溶液，按2.2.2项下方法制备供试品溶液，按2.2.1项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算加样回收率。结果见表1。

表1 加样回收试验结果（n=6）Tab.1 Results of the recovery test（n=6）

2.2.4 样品含量测定

取3批样品各适量，按2.2.2项下方法制备供试品溶液，再按2.2.1项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算含量。结果批号为20211101，20211102，20211103的样品中（R，S）-告依春含量分别为10.45，10.19，10.32 μg/g，平均10.32 μg/g。

3 讨论

羌藿蒲蓝胶囊为我院中药复方制剂验方，可用于各种感冒引起的头痛、身痛、恶寒、发热、流鼻涕、轻微咳嗽、食欲不振或呕吐等症状，临床疗效较好。预试验中，采用2020年版《中国药典（一部）》板蓝根鉴别方法（3）进行TLC鉴别［17］214-215，但发现对照药材TLC图斑点不明显，后检索相关文献［6］，按文献方法进行鉴别，结果显示，TLC图显色清晰，表明该方法效果良好；由于广藿香的主要有效成分为挥发油，参考2020年版《中国药典（一部）》［17］46-47和文献［18］，最终选用挥发油提取法来处理样品并进行TLC鉴别，效果较好；2020年版《中国药典（一部）》板蓝根含量测定项提示用甲醇-0.02%磷酸溶液作为流动相，但多次试验结果显示，供试品以甲醇-水（15∶85，V/V）为流动相时，测定的（R，S）-告依春提取率最高，且色谱峰形较好，其原因可能为制剂辅料均为水溶性材料（蔗糖和糊精）。在对蒲公英对照药材进行TLC鉴别过程中，曾比较超声法和冷浸法提取有效成分，结果超声提取效果较好。在对羌活进行TLC鉴别时，曾对展开剂为三氯甲烷-甲醇（8∶2，V/V）和正己烷-乙酸乙酯（8∶2，V/V）两种溶剂系统进行比较，结果显示以前者为展开剂时效果较好。

综上所述，本研究中建立了羌藿蒲蓝胶囊中4种药材的定性鉴别方法和主药板蓝根的有效成分（R，S）-告依春的含量测定方法。所建方法稳定可靠，准确度高，可用于羌藿蒲蓝胶囊的质量控制，为其进一步开发和应用提供参考。后期将进一步研究羌藿蒲蓝胶囊中其余3种中药材有效成分的HPLC含量检测法。