CD47单抗与CD38单抗对输血前检查的影响对比分析

王晓宁，刘 冰，王 恒，张冬霞，卢伟伟*

(1.吉林大学第一医院 输血科，吉林 长春130021;2.吉林省肿瘤医院 输血科)

CD47是一种广泛表达的跨膜糖蛋白，也称为整联蛋白相关蛋白(IAP)，分子量52kDa[1]。该蛋白具有免疫球蛋白可变的N端结构域、5个跨膜结构域和一个短的C端胞内尾，胞内尾部有四种可变不同剪接异构体，从而形成4个亚型。CD47亚型2主要在造血细胞、血管内皮细胞和上皮细胞中表达，1亚型在角质形成细胞中表达，3和4亚型在神经元细胞、肠黏膜细胞和睾丸细胞中均有表达[2]。CD47在体内多种正常细胞和组织上表达，包括红细胞和血小板。2012年,Willingham等发现CD47在实体肿瘤细胞上过表达，在卵巢癌、乳腺癌、结肠癌、膀胱癌、胶质母细胞瘤、肝细胞癌和前列腺肿瘤细胞中的表达均显著高于正常细胞[3]。CD47与血液肿瘤关系更为密切，在急性髓系白血病、非霍奇金淋巴瘤和急性淋巴细胞白血病中检测到CD47的高表达[4]。但是应用此类药物后，会对患者输血检验产生一定的影响，包括抗筛阳性、直抗阳性等。分析用药后对患者输血前的影响，可以加快输血检验时间，提高输血效率。

1 材料与方法

1.1 样本来源应用药物TJ011133前后的患者标本10例。

1.2 试剂与仪器单克隆抗-A、抗-B、抗-D及反定型用试剂红细胞(长春博德)，抗球蛋白检测卡、Rh血型抗原检测卡及低离子盐溶液(长春博迅)，抗人球蛋白试剂(上海血液生物)，抗体筛查细胞(长春博迅)，凝聚胺试剂盒(珠海贝索)，pH7.4磷酸盐PBS缓冲液，二硫苏糖醇(DTT)，血型血清学离心机(日本久保田，型号KA2200)，卡式离心机(长春博研，型号TD-A)。

1.3 给药方法剂量递增研究将采用改良的“3+3”方案，直至确定MTD或RP2D。TJ011133暂定每周给药1次，每28天为1个治疗周期。Ⅰ期剂量递增阶段预设五个递增剂量水平，分别为：1 mg/kg、3 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg和30 mg/kg，每周给药1次。治疗每28天为1个治疗周期，首次给药起28天为DLT观察期。

1.4 方法

1.4.1样本采集 采集被检对象静脉血，加入含EDTA或枸橼酸钠抗凝剂的试管中。将采集的标本配制成0.5%-0.8%红细胞生理盐水悬液。将Rh血型抗原检测卡(单克隆抗体)做标记，将待检者0.5%-0.8%红细胞悬液分别加入第1- 6支微管中(第1-5支微管分别含有IgM单克隆抗-D、抗-C、抗-c、抗-E、抗-e抗体，第6支微管为中性胶做阴性对照)，每管50 μl。使用专用离心机离心5 min，900 rpm 2 min，1500 rpm 3 min，取出，根据试剂说明书，判定结果。

1.4.2血浆鉴定及抗体筛查 ABO血型、直接抗人球试验、Rh血型、抗体筛查，参照第18版《AABB技术手册》[5]进行检测。

2 结果

2.1 血型应用CD47前后血型结果对比，见表1。

表1 应用CD47前后ABO血型和Rh五分型结果对比

2.2 抗筛及直抗应用CD47前后抗筛结果对比，检测用药前患者自身、直抗、盐水抗筛、凝聚胺抗筛、经典抗人球抗筛、微柱凝胶抗筛均呈阴性结果，无不规则抗体产生，患者用药后复查，直抗、自身一般呈“2+”，四种方法检测的抗筛均呈强阳性结果。结果见表2。

表2 应用CD47抗筛前后抗筛结果对比

2.3 交叉配血应用CD47后普通交叉配血出现明显困难，应用厂家提供的中和试剂(中和试剂:高特异性中和试剂通过与血浆中的TJ011133药物结合,阻止药物与红细胞结合带来的输血前实验干扰)和ImmucorAHG(anti-IgG)两种方法去除CD47的用药对配血、直抗、自身的干扰，应用效果见表3。

表3 去干扰处理前后结果对比

2.4 应用CD47(TJ011133)与CD38(达雷妥尤单抗Daratumumab，DARA)效果对比通过对比CD47和CD38的输血后效果，发现CD47明显强于CD38，CD38一般不对血型造成影响，CD47对反定型造成影响。CD38仅对抗人球法造成影响[6]，CD47对所有方法均造成影响[7]。见表4。

表4 CD47与CD38单抗效果比较

3 讨论

CD47作为新一代肿瘤免疫治疗的靶点可以引起先天性和适应性免疫应答的作用机制，这已经反复在临床试验上得到证实[8-9]。近年来，CD47单克隆抗体的临床研究在美国迅速开展。截至2021年8月28日，在临床试验中登记了CD47靶向治疗的46项临床试验。这些临床试验中研究了不同类型的癌症患者，包括29项实体瘤试验和14项血液系统恶性肿瘤试验和3项混合试验[10]。在我国，抗CD47治疗方面也取得了很大进展。根据NMPA的信息，至少有17种CD47靶向药物已被批准用于临床研究，占全球CD47靶向药物的一半以上。本次实验是针对应用TJ011133的患者，TJ011133(lemzoparlimab)是一种高度差异化的红细胞保护CD47抗体，具有独特的表位。它具有很强的抗肿瘤活性，并尽量减少与正常红细胞的结合，从而减少某些CD47单抗可能引起的HA[11]。

本次试验的五名患者，均为曾经有过输血史的患者，为避免患者在用药前产生不规则抗体或其他药物性抗体，均使用4种方法测定了抗筛、DAT和患者自身。均为阴性，确定患者未产生同种抗体、自身抗体及干扰配血结果的药物性抗体。其中有一例患者对ABO血型和Rh五分型均造成了一定的影响，且影响不明显(凝集强度为±)，其他患者均未对血型检测造成影响，这与应用CD38单抗的患者用药后基本一致[12]。应用CD47后，配血、抗筛均发生凝集，且凝集强度强，可以证明CD47是一个高亲和力抗体，不同于CD38抗体的去除方式[13]，DTT无法去除CD47抗体的干扰，这是由于CD47是Rh抗原膜复合物的组成部分，大部分与底层细胞骨架相连[14]，因此应用DTT无法去除CD47的干扰，应用ImmucorAHG和中和试剂则可以有效去除干扰，完成配血工作。

随着CD47临床药物研究的开展，包括IBI188、SRF231等的应用，这种因药物导致的干扰将越来越多的在临床出现[15]。积极配合临床，在用药前完善基础检验，积累更多的患者信息，将对用药后的去干扰提供更多的判断依据。