AMH、IFN-γ、IL-2检测在卵巢早衰诊断和病情评估中的应用价值

熊 鹰，刘 丽，胡晓静，孟怀书，罗 霞

近年来卵巢早衰(premature ovarian failure, POF)发病率呈逐年上升趋势，相关研究显示，POF发病率为1.92%，发病人群集中于生育期女性，月经不规律、闭经、绝经是此类患者常有的临床表现，给患者心理、精神造成重大不良影响[1-2]。目前，临床上对POF并无有效便捷的诊断手段，多依靠患者的临床表现进行评估，无法准确诊断，从而影响治疗，导致患者预后情况差[3]。寻找合适的指标对POF的预后进行有效评估，具有重要临床意义。抗苗勒管激素(AMH)为评价卵巢储备功能的敏感性指标，可对卵泡生长发育起到调节控制作用[4]。近年来有报道显示，细胞免疫及免疫细胞分泌的细胞因子可参与POF发生发展[5]。已有报道表明，淋巴细胞亚群的改变可促进POF进展，但临床中对于相关细胞因子的研究并不全面[6]。本文通过对比POF患者与健康人群的AMH、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)水平差异，分析AMH、IFN-γ、IL-2检测在POF诊断以及病情评估中的应用价值，旨在为POF诊疗提供新思路，现报告如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择2015年2月—2020年3月重庆市江津区妇幼保健院收治的POF 109例为POF组，病程0.5～5.0(2.26±1.22)年；年龄24～38(30.95±2.26)岁。①纳入标准：符合POF诊断标准[7]：年龄≤40岁绝经者，血清雌二醇(E2)水平低下、卵泡刺激素(FSH)>40 U/L、泌乳素水平正常，内外生殖器第二性征明显退化，合并围绝经期综合征症状；临床资料完整；均知晓同意本次研究，并签署同意书。②排除标准：合并生殖器官肿瘤者；合并严重心血管疾病者；存在卵巢手术史者；合并子宫内膜增生、多囊卵巢综合征等疾病者。另选取同期在本院进行健康体检月经周期正常女性100例为对照组，年龄23～38(30.21±2.14)岁。2组一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法 所有入选者在月经周期前，抽取晨起外周静脉血液标本，使用离心机以3000 r/min离心10 min，获取上清液，保存待测。IFN-γ、IL-2均使用放射免疫法检测，试剂购自比利时M EDGEN IX公司，AMH使用酶联免疫吸附试验进行检测；黄体生成素(LH)、FSH、E2使用化学发光法进行检测，试剂盒均购自贝克曼库尔特商贸(中国)有限公司。窦状卵泡(AFC)数目检测：在月经周期第3天进行阴道超声检查，检测AFC直径，统计直径0.2～1.0 cm的AFC数目。

1.3观察指标 ①比较POF组与对照组AMH、IFN-γ、IL-2水平。②比较POF组与对照组性激素水平及AFC数目。③分析AMH、IFN-γ、IL-2与性激素及AFC的相关性。④分析AMH、IFN-γ联合IL-2检测对POF的诊断价值。

2 结果

2.1POF组与对照组AMH、IFN-γ、IL-2水平比较 POF组IFN-γ水平明显高于对照组，AMH、IL-2水平明显低于对照组，差异有统计学意义(P<0.01)。见表1。

表1 POF组与对照组AMH、IFN-γ、IL-2水平比较

2.2POF组与对照组性激素水平及AFC数目比较 POF组LH、FSH水平明显高于对照组，E2水平明显低于对照组，AFC数目明显少于对照组，差异有统计学意义(P<0.01)。见表2。

表2 POF组与对照组性激素水平及AFC数目比较

2.3POF患者AMH、IFN-γ、IL-2与性激素、AFC的相关性 POF患者AMH、IL-2与LH、FSH呈负相关，与E2、AFC呈正相关(P<0.05，P<0.01)；IFN-γ与LH、FSH呈正相关，与E2、AFC呈负相关(P<0.05，P<0.01)。见表3。

表3 POF患者AMH、IFN-γ、IL-2与性激素、AFC的相关性分析

2.4AMH、IFN-γ、IL-2检测对POF的诊断价值 依据ROC曲线分析可知，AMH、IFN-γ、IL-2联合检测诊断POF敏感度和特异度分别为96.32%、80.41%，曲线下面积为0.874(95%CI：0.785，0.963)，明显高于三者单独检测。见表4及图1。

表4 AMH、IFN-γ、IL-2检测对POF的诊断价值分析

图1 AMH、IFN-γ、IL-2检测诊断POF的ROC曲线

3 讨论

AMH是由胚胎中初级卵泡的颗粒细胞分泌，随着年龄增加，AMH水平逐渐下降，绝经后AMH消失[8]。有实验研究发现，建立POF大鼠模型后，对其进行激素治疗，在此过程中发现AMH的分泌水平并未改变，但大鼠的FSH、LH水平下调，E2水平升高[9]。提示外源性激素并不会对AMH的分泌造成影响，相比其他性激素而言，即使处于月经周期AMH的波动也极小，因此使用AMH评估卵巢功能的敏感度较高[10]。有学者研究发现，在POF患者中AMH、E2表达水平明显降低，而FSH、LH表达水平则呈明显上调的趋势，提示在常规性激素指标未能诊断POF时，AMH已提示卵巢功能衰退[11]。本研究结果也表明，在POF患者中AMH水平明显降低，与上述研究结果相符。

本研究中POF患者的IFN-γ水平明显高于对照组，而IL-2水平则明显低于对照组，与以往研究结果相符[12]。还有研究结果证明，自身免疫功能异常也可导致POF发生，Zp3致敏的特异性T淋巴细胞可导致卵巢损伤，而在受损卵巢中IFN-γ、肿瘤坏死因子-α、IL-1β等mRNA表达水平可明显升高[13]。有研究发现，IFN-γ、IL-2与抗卵巢抗体效价有高度相关性，IFN-γ与IL-2之间也存在高度相关性[14]。在正常情况下卵泡从基础卵泡发展成为成熟卵泡，再到排卵、闭锁，在此过程中细胞因子均完全参与，可利用内分泌、旁分泌或是自分泌来实现调控[15]。

LIU等[16]研究发现，IFN-γ导致某些细胞因子被激活，引发了卵泡闭锁的现象。如果机体免疫功能异常，CD4+ T淋巴细胞会被卵巢的抗原激活，随着其细胞数量不断地增加，可直接作用于B淋巴细胞导致免疫球蛋白分泌，以及细胞的生殖、分化从而诱导多种杀伤细胞激活，最终导致卵巢抗原靶细胞(颗粒细胞、黄体细胞、生产甾体激素细胞以及卵细胞)的凋亡、损伤[17-18]。卵巢过度损伤后，会引起卵泡过度闭锁进而出现排卵障碍，最终导致POF发生或引起不孕。AFC数目对POF卵巢功能的诊断也具有较高敏感度和特异度，在POF患者中AFC数目明显减少。通过相关性分析可知，POF患者AMH、IL-2与LH、FSH呈负相关，与E2、AFC呈正相关；IFN-γ与LH、FSH呈正相关，与E2、AFC呈负相关。提示AMH、IFN-γ、IL-2对卵巢功能评估具有一定参考价值。进一步行ROC曲线分析发现，AMH、IFN-γ、IL-2均可为POF临床诊断提供参考，三者联合检测诊断POF的敏感度和特异度分别为96.32%、80.41%，曲线下面积为0.874(95%CI：0.785，0.963)，提示三者联合能有效提高诊断效能。

综上所述，AMH、IFN-γ、IL-2可反映POF患者的卵巢储备功能，三者联合检测对POF的早期诊断及严重程度评估具有重要参考价值。