贵州地区奶牛弓形虫病血清学调查与分析

张 海 ， 杨 源 ， 刘 艳 ， 徐春志 ， 袁翠霞 ， 蔺俐仲 ， 邓珊珊 ，景书灏 ， 李照伟 ， 杨 峰

(1.贵阳市动物疫病预防控制中心 ， 贵州 贵阳 550081 ； 2. 贵阳市乡村振兴服务中心 ， 贵州 贵阳 550081 ；3.清镇市养殖业发展服务中心 ， 贵州 贵阳 551400 ； 4.贵州省动物疫病预防控制中心 ， 贵州 贵阳 550081)

弓形虫病(Toxoplasmasis)是由刚地弓形虫(Toxoplasmagondii)引起的一种人兽共患寄生虫病[1]，猫、犬、牛、羊、猪等动物均可感染。据统计，弓形虫已经在全球范围内的200多种动物体内被发现。奶牛感染主要途径有弓形虫感染猫进入奶牛场排出卵囊污染饲料和饮水，奶牛感染弓形虫后的流产胎衣及羊水等污染圈舍、草料等[2]。最早在1908年首先从刚地梳趾鼠的单核细胞内发现并命名为刚地弓形体[3]。我国研究人员于恩庶1955年首次从兔和猫的体内分离到弓形虫，后来又从猪和豚鼠体内分离到虫体[4]。我国人的弓形虫感染率介于0.1%～34.0%，动物弓形虫感染率介于5%～15%[5]，严重危害人和动物健康，公共卫生学危害较大。近年来，贵州省大力发展生态畜牧养殖和奶业振兴，省内固有的自繁自养模式显然已远不能满足奶牛业发展的需求，需要从国外和省外大量引进奶牛。贵州省的奶牛养殖主要集中在贵阳市、遵义市、黔南州和黔东南州，其中贵阳市的奶牛养殖量占比为全省的90%左右。为了了解贵州省奶牛弓形虫病感染情况，本试验于2019—2020年采集贵州省贵阳、黔南、遵义和黔东南4个市(州)20个(次)奶牛场2 469份奶牛血清样本，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测奶牛血清弓形虫抗体，以期为贵州地区奶牛弓形虫病的防控提供数据参考。

1 材料与方法

1.1 血清样本 2019—2020年共采集贵州地区(贵阳、遵义、黔南、黔东南)20个(次)奶牛场2 469份奶牛血清样本(2019年1 439份，2020年1 030份)。通过尾根静脉采血约3 mL，静置30 min，4 ℃ 4 000 r/min离心5 min，吸取血清置于1.5 mL无菌离心管中，标记血清来源的地区、养殖场规模、奶牛年龄、生产阶段等信息，-20 ℃保存备用。

1.2 血清检测 取出血清，室温放置解冻，待血清恢复至常温后，按照弓形虫间接ELISA抗体检测试剂盒(美国爱德士生物科技公司)说明书操作，在450 nm的吸光值下测量OD值，参照试剂盒说明书公式计算结果。

2 结果

2.1 不同地区感染情况 对2019—2020年间采自贵阳、遵义、黔南、黔东南地区共20个(次)奶牛场的2 469份血清进行弓形虫抗体检测，结果如表1所示，贵州省贵阳、遵义、黔南、黔东南地区均存在不同程度的感染，总体阳性率为10.09%(249/2 469)，其中贵阳地区阳性率为13.38%(189/1 413)，遵义地区阳性率为9.00%(18/200)，黔南地区阳性率为2.88%(12/416)，黔东南地区阳性率为6.82%(30/440)。贵阳地区阳性率最高，黔南地区阳性率最低。

表1 贵州地区奶牛弓形虫血清学检测结果Table 1 Serological test results of Toxoplasma gondii in dairy cows in Guizhou area

2.2 不同年龄阶段感染情况 对20个(次)奶牛场采集的血清样本按照年龄进行分类统计，奶牛年龄从几月龄到6岁左右。奶牛弓形虫抗体检测结果如表2所示，1岁以内血清样本未检测到血清抗体阳性样本，5～6岁样本抗体阳性率最高，为19.32%(51/264)；其余年龄段阳性率分别为：1～2岁7.35%(20/272)，2～3岁8.72%(45/516)，3～4岁10.55%(73/692)，4～5岁10.77%(60/557)。结果表明奶牛弓形虫抗体阳性率与奶牛年龄成正比。

表2 奶牛不同年龄弓形虫血清学检测结果Table 2 Serological test results of Toxoplasma gondii in dairy cows of different ages

2.3 不同生产阶段感染情况 按照奶牛不同的生产阶段进行分类统计，结果如表3所示，奶牛的育成期没有检测到弓形虫血清抗体阳性样本，其余各生产阶段均呈现不同程度的感染，其中妊娠泌乳期的血清抗体阳性率最高，为22.84%(45/197)，妊娠干奶期次之，阳性率为17.70%(20/113)，其次是空怀泌乳期，阳性率为11.57%(73/631)。

表3 奶牛不同生产阶段弓形虫血清学检测结果Table 3 Serological test results of Toxoplasma gondii in dairy cows at different production stages

2.4 不同月份感染情况 按照样本采集时间进行分类统计，采样时间主要集中在5～12月份，结果如表4所示，11月份样本阳性率最高，为16.67%(30/180)，5月份样本阳性率最低，为6.44%(15/233)；其余月份分别为：6月份8.40%(21/250)，7月份6.67%(30/450)，9月份8.19%(56/684)，10月份14.00%(42/300)，12月份14.78%(55/372)。结果表明样本抗体阳性率呈现出冬季阳性率最高、秋季次之、夏季最低。

表4 不同月份弓形虫血清学检测结果Table 4 Serological test results of Toxoplasma gondii in different months

3 讨论

本试验对2019—2020年在贵州省贵阳、黔南、遵义和黔东南4个市(州)20个(次)奶牛场采集的2 469份奶牛血清样本，采用ELISA方法进行奶牛弓形虫血清学调查。共检测出弓形虫抗体阳性样本249份，弓形虫感染抗体阳性率为10.09%。按照不同地区、不同年龄阶段、不同生产阶段和不同样本采集月份统计，贵阳地区弓形虫抗体阳性率最高(13.38%)，5～6岁年龄阶段样本弓形虫抗体阳性率最高(19.32%)，妊娠泌乳期血清抗体阳性率最高(22.84%)，11月份采集的样本抗体阳性率最高(16.67%)。

弓形虫是人和多种动物易感的人兽共患传染病，对人和动物危害较大，我国农业农村部将其列为二类动物疫病。通过血清学调查或病原学分离发现，自然感染弓形虫的动物有猪、黄牛、水牛、马、山羊、兔、绵羊、猫、狗等[4]。蒋业慧等[6]于2013年5—11月对新疆北疆地区11个规模化奶牛场采用间接血凝试验(IHA)方法进行奶牛弓形虫抗体调查，阳性率为15.30%。曹文博等[7]对河北省部分地区规模化奶牛场采用间接血凝和ELISA方法进行奶牛弓形虫抗体调查，阳性率为3.5%。陈益等[8]对河南省部分地区奶牛场采用IHA方法进行奶牛弓形虫抗体调查，阳性率为12.05%。Zhou等[9]对广州奶牛场弓形虫抗体进行调查，阳性率为5.7%。Qiu等[10]采用IHA方法对黑龙江部分奶牛场进行弓形虫抗体调查，阳性率为2.3%。叶勇刚等[11]对四川地区部分奶牛养殖场进行弓形虫调查，总阳性率为4.59%。董保豫等[12]采用IHA方法进行的调查结果显示，贵州黔南奶牛弓形虫感染抗体阳性率为26.92%。上述调查结果表明各地的奶牛场都存在不同程度的弓形虫感染。

本试验对检测结果按不同地区分类统计，贵阳地区阳性率最高，为13.38%(189/1 413)，黔南地区阳性率最低，为2.88%(12/416)。贵阳市海拔高度在1 100 m左右，属于亚热带湿润温和型气候，年平均气温为15.3 ℃，年平均相对湿度为77%，全年湿度比较高，且近年来贵阳市部分奶牛场奶牛群存在频繁的调运，导致牛群弓形虫抗体阳性率较高。按照不同奶牛年龄统计，1岁以内未检测到阳性样本，5～6岁抗体阳性率最高，为19.32%(51/264)，可能与该年龄阶段奶牛处于高产阶段，抵抗力降低有关。按奶牛不同生产阶段统计，妊娠泌乳期血清抗体阳性率最高，为22.84%(45/197)，可能与泌乳期间奶牛泌乳负荷较大，牛只抵抗力下降有关。按不同采样月份统计，冬季奶牛弓形虫病感染最严重，可能与冬季温度下降造成牛群应激，抵抗力下降有关。因此，奶牛场需要加强饲养管理，冬春季节注意保暖，减少应激源，保持干净的饲养环境，及时开展消毒工作。做好口蹄疫等强制免疫疫病的基础免疫工作，根据牛病毒性腹泻、牛鼻气管炎等流行情况开展疫苗免疫。消灭奶牛场鼠类，禁止饲养猫。定期开展牛群检疫工作，及时发现病牛并进行隔离治疗，环境彻底消毒，对病死牛和流产胎盘等进行无害化处理。同时注意饲养人员弓形虫的感染情况。