麸炒天麻质量标准研究

佘永红 杨德泉 向 君

湘西土家族苗族自治州食品药品检验所，湖南 吉首 416000

天麻为兰科植物天麻GastrodiaelataBI.的干燥块茎，具有息风止痉、平抑肝阳、祛风通络的功能。用于治疗小儿惊风、癫痫抽搐、破伤风、头痛眩晕、手足不遂、肢体麻木、风湿痹痛。明代《普济方》[1]提出 “ 炙黄”“ 麸炒黄”和 “ 酒炙”等炮制方法。在临床应用中，炒天麻与人参、炒白术、炒白僵蚕等同用，如醒脾散用于治疗小儿慢惊风，吐泻不止，脾困昏沉，默默不食；与石决明(醋煅)、炒白蒺藜、蝉蜕等同用，如天麻退翳散用于治疗垂帘障，昏暗失明。天麻的现代炮制方法主要为润制和蒸制。《中国药典》[2]2020 年版一部： “ 洗净，润透或蒸软，切薄片，干燥。”收载了天麻饮片的质量标准，麸炒天麻未收载。各省、市、自治区仍沿用历代方法，主要有酒天麻、姜天麻、麸炒天麻、煨制天麻等，麸炒天麻是《湖南省中药饮片炮制规范》[3]2010年版收载品种，但是质量标准亟待提升。为了使麸炒天麻饮片质量得到更有效地控制，本标准研究修订了麸炒天麻的成品性状、鉴别及含量测定，增订了水分、总灰分、二氧化硫残留量的检查及浸出物测定，为保障临床疗效提供有效依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent 1260 高效液相色谱仪(含VWD 检测器、YMC HPLC Column C18色谱柱、Rev.B.04.03色谱工作站)、AUW220D电子天平(岛津)、ZOOMWO Water Environmental超纯水机、KM5200D中文液晶超声波清洗器(功率200W,40KHz)；DZTW电子调温电热套；XMTD-4000电热恒温水浴锅；TDZ5-WS医用离心机。

1.2 试药 天麻素对照品(批号： 110807-202010，含量以95.5%计)、对羟基苯甲醇对照品(批号： 111970-201702，含量以99.4%计)、天麻对照药材(批号： 120944-201611)均购自中国食品药品检定研究院。硅胶G板(德国默克公司)，甲醇、乙腈为色谱纯；水为纯净水；其他试药均为分析纯。15批麸炒天麻由湖南省5家饮片生产企业，产地分别为四川、安徽、湖南、云南。

2 方法与结果

2.1 性状 通过考察15批麸炒天麻的性状特征，标准规定： 本品呈不规则的薄片。外表皮黄色至黄棕色，有时可见点状排成的横环纹。切面黄色至黄棕色。角质样，半透明，略有焦斑。有特异气，味甘。如图1所示。

天麻 麸炒天麻

2.2 薄层鉴别 照《中国药典》2020年版一部升麻鉴别(2)方法，取本品粉末1 g，加甲醇 10 mL，超声处理30 min，滤过，滤液浓缩至干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取天麻对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。再取天麻素对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法《中国药典》2020年版四部通则0502试验，吸取供试品溶液和对照药材溶液各10 μL，对照品溶液5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(2∶4∶2.5∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以对羟基苯甲醛溶液(取对羟基苯甲醛0.2 g，溶于乙醇 10 mL 中，加50%硫酸溶液 1 mL，混匀)，在120 ℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。结果如图2所示。

1 2 3 4 5 S1 S2

2.3 检查

2.3.1 水分 照《中国药典》2020年版四部通则0832第二法，测定15批麸炒天麻样品的水分。结果见表1。

2.3.2 总灰分 照《中国药典》2020年版四部通则2302，测定15批麸炒天麻样品的总灰分。结果见表1。

2.3.3 二氧化硫残留量 照《中国药典》2020年版四部二氧化硫残留量测定法通则2331测定。15批麸炒天麻的二氧化硫残留量结果见表1。

2.4 浸出物 照《中国药典》2020年版四部通则2201水溶性浸出物测定法项下的热浸法，测定15批麸炒天麻饮片的浸出物。结果见表1。

表1 麸炒天麻水分、总灰分、二氧化硫残留量、浸出物测定结果

2.5 含量测定

2.5.1 对照品溶液 取天麻素对照品，精密称定①22.14 mg、②11.02 mg，分置50 mL、25 mL量瓶中，加乙腈-水(3∶97)混合溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得天麻素对照品储备液(422.8740 μg/mL、420.9640 μg/mL)。另精密称取对羟基苯甲醇对照品①22.98 mg、 ②11.42 mg分置50 mL、25 mL量瓶中，加乙腈-水(3∶97)混合溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对羟基苯甲醇对照品储备液(456.8424 μg/mL、454.0592 μg/mL)。精密吸取天麻素对照品储备液及对羟基苯甲醇对照品储备液各2 mL及1 mL，加乙腈-水(3∶97)混合溶液依次稀释成含天麻素42.28740 μg/mL、对羟基苯甲醇22.84212 μg/mL的混合对照品溶液Ⅰ及含天麻素42.09640 μg/mL、对羟基苯甲醇22.70296 μg/mL混合对照品溶液Π。

2.5.2 供试品溶液 取本品粉末(过三号筛)约2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50 mL，称定重量，超声处理(功率120W，40KHz)30 min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，滤过，精密量取滤液10 mL，浓缩至近干无醇味，残渣加乙腈-水(3∶97)混合溶液溶解，转移至25 mL量瓶中，用乙腈-水(3∶97)混合溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

A.天麻素、对羟基苯甲醇混合对照品；B.麸炒天麻样品图3 样品的HPLC色谱图

2.5.3 色谱条件 色谱柱： YMC HPLC Column C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相乙腈-0.05%磷酸溶液(3∶97)；流速1.0 mL/min；检测波长为220 nm；柱温30 ℃。理论板数按天麻素峰计算，不低于5000。

取混合对照品溶液Ⅰ、供试品溶液按上述色谱条件进样，记录色谱图(图3)。结果表明，样品中其他成分对天麻素、对羟基苯甲醇的测定无干扰。

2.5.4 线性关系考察 精密吸取浓度为422.8740 μg/mL的天麻素对照品储备液10 mL及浓度为456.8424 μg/mL的对羟基苯甲醇对照品储备液5 mL，置20 mL量瓶中，加乙腈-水(3∶97)混合溶液稀释成含天麻素211.4370 μg/mL、对羟基苯甲醇114.2106 μg/mL的混合对照品储备液，吸取上述混合对照品储备液适量，依次稀释成天麻素浓度为2.6430 μg/mL、10.5718 μg/mL、21.1437 μg/mL、42.2874 μg/mL、63.4311 μg/mL、105.7185 μg/mL、211.4370 μg/mL及对羟基苯甲醇浓度为1.4276 μg/mL、5.7105 μg/mL、11.4211 μg/mL、22.8421 μg/mL、34.2632 μg/mL、57.1053 μg/mL、114.2106 μg/mL的混合对照品溶液，精密吸取上述混合对照品溶液各5 μL， 注入液相色谱仪，测定，以峰面积积分值为纵坐标，浓度(μg/mL )为横坐标，绘制标准曲线。天麻素回归方程为：y=9.9956x-11.245，r=0.9999；对羟基苯甲醇回归方程为：y=20.75x-11.314，r=0.9999。结果表明： 天麻素和对羟基苯甲醇对照品分别在2.6430～211.4370 μg/mL和1.4276～114.2106 μg/mL范围内线性关系良好。

2.5.5 精密度试验 取同一麸炒天麻供试品溶液(批号2019102206)，连续进样6次，每次5μL，记录色谱峰面积，天麻素峰面积RSD为0.32%(n=6)，对羟基苯甲醇RSD为1.8%(n=6)，表明仪器精密度良好。

2.5.6 稳定性试验 取同一麸炒天麻供试品溶液(批号2019102206)，分别于配制后的0 h、6 h、9 h、12 h、24 h，精密吸取5 μL，注入液相色谱仪，测定，天麻素峰面积RSD为0.20%，对羟基苯甲醇峰面积RSD为0.81%，表明供试品溶液在配制后24 h内稳定。

2.5.7 重复性试验 取同一麸炒天麻供试品溶液(批号2019102206)，依法制备6份供试品溶液，按干燥品计算，含天麻素和对羟基苯甲醇的总量分别为3.064、2.963、2.959、2.964、2.960、3.027，RSD为1.6%，天麻素的平均含量为2.034 mg·g-1，对羟基苯甲醇的平均含量为0.956 mg/g。

2.5.8 回收率试验 取已测定含量(含天麻素2.034mg/g、对羟基苯甲醇0.956mg/g)的同一麸炒天麻供试品(批号2019102206)供试品6份，精密称定，置具塞锥形瓶中，按干燥品计算(水分9.10%)，按100%的水平精密加入浓度为422.8740 μg/mL的天麻素对照品储备液及浓度为456.8424 μg/mL对羟基苯甲醇对照品储备液各适量(见表2、3)，依法制备供试品溶液，测定并计算，结果天麻素及对羟基苯甲醇平均加样回收率分别为101.4%、96.6%。

表2 天麻素加标回收率试验

表3 对羟基苯甲醇加标回收率试验

2.5.9 样品含量测定结果 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各5 μL，注入液相色谱仪，测定，以外标法计算含量。结果见表4。

表4 样品含量测定结果

表4(续)

表5 麸炒天麻与天麻饮片含量变化情况

3 讨论

3.1 检查项目和浸出物限度的拟定 根据实验结果，水分最低值为7.13%，最高值为11.27%，平均值为9.29%，中位数为9.72%，水分定为“ 不得过12.0%”；总灰分最低值为2.29%，最高值为3.00%，平均值为2.58%，中位数为2.42%，总灰分限度定为“ 不得过4.0%”；二氧化硫残留量同《中国药典》2020年版天麻药材及饮片标准不得过400 mg/kg；浸出物中最低值为42.35%，最高值为66.32%，平均值为52.58%，中位数为51.02%，麸炒天麻的浸出物限度定为“ 不得少于40.0%”。

3.2 含量测定限度的拟定 15批次麸炒天麻含量测定结果显示，含量在0.26%～0.58%之间，平均值为0.36%。在天麻炮制加工过程中，使用硫磺熏蒸，饮片整洁美观且具保鲜、防霉、防虫效果，尹珉等[4]采用 RP-HPLC对不同产地经过硫磺熏蒸与未经过硫磺熏蒸的天麻进行天麻素测定，得出结论，经过硫磺熏蒸后天麻中天麻素的含量普遍低于现行的质量标准。本实验含量最低值为0.26%，为硫磺熏蒸品种，但未超过规定的二氧化硫残留量400 mg/kg，综合考虑，麸炒天麻中天麻素及对羟基苯甲醇含量总量限度同《中国药典》2020年版天麻药材及饮片标准，即“ 本品按干燥品计算，含天麻素(C13H18O7)和对羟基苯甲醇(C7H8O2)的总量不得少于0.25%。

3.3 天麻麸炒的作用 天麻临床多用生品，味甘，质润，善治一切风证，以平肝息风止痉见长，通过对1批天麻饮片和用其加工成的3批麸炒天麻的含量测定变化情况比较，天麻饮片麸炒后的含量有所降低，可能天麻饮片经过麸炒后使天麻的药性缓和，利于儿童、老年患者用药治疗，同时可以矫正天麻的特异气味，减少黏腻之性，便于服用。

综上，本研究从麸炒天麻的性状、薄层色谱鉴别、水分、总灰分、二氧化硫残留量、浸出物及含量测定方面对麸炒天麻的质量进行了评价，为临床用药安全提供了有效的控制手段。