驽药液的抗炎作用研究

刘 娇 梁 潇 胡 涛 阮婧华 钱海兵*

1.贵州中医药大学，贵州 贵阳 550025；2.贵州省中医药方证药理研究特色重点实验室，贵州 贵阳 5500253.贵州中医药大学第一附属医院，贵州 贵阳 550001

驽药液是贵州中医药大学第一附属医院药剂科实验室依据多年的临床实践经验，选用大血藤、飞龙掌血、透骨香、白屈菜、黑骨藤5味天然草药组成，在临床上尤其是苗族地区被广泛用于治疗膝骨性关节炎等疾病，效果良好，副作用较小[1]。现代研究[2-5]证明，驽药液中大血藤水提物、乙酸乙酯部位及多糖对胶原性炎症、痛风性关节炎等炎症有治疗作用，醇提物中绿原酸被认为是大血藤发挥抗炎作用的指标性成分。飞龙掌血中有14个生物碱类成分被认为是其发挥抗炎作用的关键活性成分，其中弗林德碱、白屈菜红碱被报道具有显著抗炎作用，对佐剂性关节炎、痛风性关节炎及心肌缺血性炎症有治疗作用[6-10]。透骨香醇提部位和水提部位及挥发油对急性痛风性关节炎、类风湿性关节炎和胶原型关节炎有抑制作用，其中水杨酸甲酯和儿茶素是其发挥作用的关键活性成分[11-14]。白屈菜中生物碱类成分有一定的抗炎作用，对软组织损伤、溃疡性肠炎有一定的治疗作用[15-17]；黑骨藤醇提物中咖啡酰基奎宁酸类化合物具有抑制人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞(MH7A细胞)增殖的作用，甾类、萜类、黄酮类，包含杠柳毒甙、萝藦苷元、熊果酸、胡萝卜甙等10种活性成分被预测为是治疗RA的活性成分[18-19]。

根据前期研究，实验旨在进一步运用二甲苯致小鼠耳肿胀和角叉菜胶致大鼠足肿胀方法验证由大血藤、透骨香、白屈菜、飞龙掌血和黑骨藤组成的驽药液的抗炎作用，以期为开发运用于临床治疗炎症提供理论依据。

1 材料

1.1 动物 Wistar大鼠30只，雌雄各半，体质量为180～220 g；KM小鼠40只，雌雄各半，体质量为18～22 g，购于长沙市天勤生物技术有限公司，动物合格证号为 SCXK(湘)2019-0014，许可证号为 No.430726210100136331。所有动物均适应性饲养1周。

1.2 药物及试剂 驽药液(贵州中医药大学第一附属医院实验室自制，批号： 20210525)；二甲苯(重庆川东化工有限公司 AR)；角叉菜胶(阿拉丁)；肿瘤坏死因子- α (TNF- α)、前列腺素E2(PGE2)、白细胞介素- 6(IL- 6)酶联免疫吸附试验(ELISA)检测试剂盒均购自武汉伊莱瑞特科技股份有限公司。

1.3 仪器 游标卡尺；酶标仪；精密分析天平(常熟市双杰测试仪器厂 JJ224BF)；XK-400高速离心机(江苏新康医疗器械有限公司)；8mm打孔器；烘箱(上海博讯实业有限公司医疗设备厂 GZX-9240MBE)。

2 方法

2.1 驽药液的制备 由贵州中医药大学第一附属医院实验室自制。以原药液作为高剂量，加0.9%生理盐水稀释2倍和4倍分别作为中剂量组和低剂量组。

2.2 动物模型建立、分组及给药

2.2.1 二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验 选取实验室饲养1周的KM小鼠40只，雌雄各半，随机分为4组，每组各10只，分别为模型组、对照组和驽药液高、中、低剂量组。实验前对小鼠腹部进行备皮，备皮区域为2 cm×2 cm，每日涂抹药液2次(早晚各1次)，连续给药7 d，模型组涂抹等体积蒸馏水。末次给药1 h后，于小鼠右耳两面均匀涂二甲苯 0.05 mL/只致炎，左耳不涂为正常耳。致炎1 h后颈椎脱臼处死小鼠，沿耳廓基线剪下两耳，用8 mm打孔器在两耳对称取耳片，于分析天平上称重，以左右耳片质量差值表示炎症肿胀度，计算抑制率。

肿胀度(mg)=右耳片重量-左耳片重量

抑制率(%)=(模型组肿胀度-给药组肿胀度)/模型组肿胀度×100%

2.2.2 角叉菜胶致大鼠足肿胀实验 选取实验室饲养1周的Wistar大鼠30只， 雌雄各半，随机分为5组，每组各6只，分别为空白组、模型对照组和驽药液高、中、低剂量组。实验前对大鼠腹部进行备皮，备皮区域为2 cm×2 cm，每日涂抹药2次(早晚各1次)，连续给药7 d，空白组和模型组涂抹等体积蒸馏水。末次给药后1 h，游标卡尺测量小鼠正常足掌厚度，作为实验前足肿胀度，每只小鼠右后肢足爪皮下注射0.1%角叉菜胶0.1 mL/只致炎。并于注射后第1小时、2小时、4小时、6小时分别测量1次，记录结果，计算肿胀度。

肿胀度(mm)=致炎后足肿胀度-致炎前足肿胀度

2.3 大鼠血清中TNF- α、PGE2、IL- 6水平测定 肿胀度测量结束后，大鼠腹腔注射3%戊巴比妥钠(45 mg/kg)进行麻醉。实验大鼠在麻醉状态下进行腹主动脉取血，室温静置 30 min 使血液分层。6000 r/min 下离心 10 min，分装血清，按试剂盒说明书操作检测血清中炎症因子 TNF-α、PGE2、IL-6 含量。在 550 nm 的波长下测量各孔 OD 值即吸光度，绘制酶标曲线，计算样本浓度。

3 结果

3.1 驽药液对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响 二甲苯致炎后各组小鼠右耳随即出现高度红肿现象。与模型组比较，驽药液高剂量组、驽药液中剂量组和驽药液低剂量组对二甲苯致小鼠耳廓肿胀均有抑制作用，抑制率分别为33.00%、29.00%、23.00%(P<0.05)。肿胀抑制率随驽药液给药剂量的增加逐渐升高(见表1)，说明驽药液的抗炎作用具有一定的量效关系。

表1 驽药液对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响

3.2 驽药液对角叉菜胶致大鼠足肿胀的影响 与空白组相比，模型组大鼠在注射角叉菜胶1 h、2 h、4 h、6 h后，1～6 h内足肿胀度明显，在4 h时到达最大值，有显著性差异(P<0.05)，模型建立成功；与模型组相比，在0～1 h、2～6 h 内，驽药液高、中、低剂量组对均能显著的抑制大鼠足肿胀(P<0.05)，效果不持续(见表2)。

表2 驽药液对脚叉菜胶致大鼠足肿胀的影响

3.3 驽药液对角叉菜胶致大鼠足肿胀血清TNF- α、PGE2、IL- 6水平的影响 与空白组相比，模型组大鼠血清中TNF-α、PGE2、IL-6水平含量明显升高，有显著性差异(P<0.05)；与模型组比较，驽药液高剂量、驽药液中剂量及驽药液低剂量对大鼠血清中IL-6水平有明显的抑制作用，有显著性差异(P<0.05)；驽药液高剂量和驽药液低剂量对大鼠血清中PGE2水平有明显的抑制作用，有显著性差异(P<0.05)，驽药液中剂量对大鼠血清中PGE2水平无影响。驽药液高剂量、驽药液中剂量和驽药液低剂量对大鼠血清中TNF-α水平无影响，差异无统计学意义。见表3。

表3 驽药液对角叉菜胶致足肿胀大鼠血清中IL-6、TNF-α、PGE2 含量的影响

4 讨论

苗医药讲究将药物分为： 领头药(主药： 针对主要症状发挥主要作用)、铺底药(配药： 针对次要病症和次要症状，加强主药作用)、监护药(引药： 促进领头药和监护药的药性，到达病变部位)，与中药组方配伍中“ 君、臣、佐、使”有异曲同工之妙。驽药液由大血藤、飞龙掌血、透骨香、白屈菜、黑骨藤五味苗药组成，临床上常用于治疗膝骨性关节炎和类风湿性关节炎，驽药液中领头药当数黑骨藤，以舒筋活血，祛风除湿；其中铺底药为大血藤、黑骨藤、透骨香等，加强领头药的祛风除湿的功效，兼备活血[20]。现代研究显示，驽药液中大血藤醇提物，飞龙掌血、白屈菜的生物碱，透骨香、黑骨藤醇提物等具有良好的抗炎作用[5-6,21-23]。本实验主要从驽药液的抗炎作用方面进行探究，采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀和角叉菜胶致大鼠足肿胀实验模型来初步探讨驽药液的抗炎作用。

二甲苯致小鼠耳廓肿胀和角叉菜胶致大鼠足肿胀实验结果表明，与模型组比较，驽药液能降低小鼠耳廓肿胀程度与大鼠足肿胀的程度。PGE2属于花生四烯酸代谢产物，由炎症反应刺激后产生，可导致发热、疼痛、血管扩张、通透性升高等炎症反应；细胞因子IL-6可引起急性炎症的发热，实验结果表明，驽药液对大鼠血清中IL-6和PGE2产生有抑制作用，对TNF-α无影响。二甲苯和角叉菜胶能通过化学刺激，引起局部血管扩张、通透性增加，进而引起局部渗出、水肿，属急性和亚急性炎症反应，驽药液发挥抗炎作用的机制可能与抑制促炎因子IL-6和PGE2表达有关。

综上，驽药液对急性或亚急性炎症有良好的作用，为其临床主要应用于膝骨性关节炎和类风湿性关节炎的治疗提供了一定的药理学研究基础。