不同厂家采血管对血栓前状态分子标志物及血凝检测结果的影响

陈俊瑶 江秀娟 黄金晶 张正华 苏海翔 王玉虹

甘肃省肿瘤医院，甘肃 兰州 730050

一次性真空采血管是检验前样本储存、转运、分析和保存的承载容器，品种繁多，因其中加入了促凝剂成分，缩短了血液凝固时间，加快了血液分离速度，且使用方便，减少了交叉污染和抽血时穿刺的次数，越来越受到医务工作者的青睐。但其质量和性能是采血标准化不可忽视的问题，这对保证检验结果的准确性具有重要的意义。因此选择高质量的采血容器是检验前质量控制的重要环节[1］。我科在开展血栓分子标志物项目时，选用三个不同生产厂家的一次性真空采血管比较其检测结果，现报道如下。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 研究对象。随机自愿加入的27~66岁肿瘤患者、医院工作人员及家属36例。

1.1.2 试管选择。试管1：国产试管；试管2：进口试管；试管3：与试管1不同厂家的另一家国产试管。

1.2 方法

1.2.1 检测项目。血栓分子标记物项目包括：凝血酶抗凝血酶复合物（TAT）；纤溶酶-α2纤溶酶抑制物（PIC）；血栓调节蛋白（TM）；组织纤溶酶原激活物抑制剂-1复合物（t-PAIC）。凝血系列项目包括：凝血酶原时间（PT）；活化部分凝血酶原时间（APTT）；纤维蛋白原（FIB）；D-二聚体（D-Dimer）；纤维蛋白原降解产物（FDP）；凝血酶原时间（TT）；抗凝血酶Ⅲ（AT3）。

1.2.2 仪器和试剂。血栓分子标志物检测为日本希森美康公司生产的HISCL-5000全自动免疫分析仪及配套试剂、校准品和质控品；凝血系列指标检测为日本希森美康公司生产的CS-5100全自动凝血分析仪及配套的试剂、校准品和质控品，其中FDP试剂和校准品购自日本积水医疗科技（中国）有限公司。L600低速自动平衡离心机为长沙湘仪离心机仪器有限公司生产。

1.2.3 标本采集。研究对象采血前3天内不允许饮酒，禁食过夜（8~18小时），次日上午8：00至10：00之间采集血液样本。按照试剂说明书分别用试管1、试管2和试管3同时抽取肘部静脉血各2mL，抽血由同一名护士完成，样本采集后每管均轻柔颠倒混匀5~8次，且所采集样本无溶血、脂血、黄疸等情况。采集的3管抗凝血样本立即同时离心（3000r/min，10min），进行血栓分子标志物及凝血系列检测。

1.3 统计学分析 使用Python SciPy（Version：1.8.1）统计软件包分析数据，所有数据描述采用均数±标准差（±s）表示，采用完全随机设计比较的方差分析，两两比较采用LSD法。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同试管血栓前分子标记物检测结果比较 结果显示，不同试管TAT检测结果差异有统计学意义（P<0.05）。见表1；且试管1及试管2、试管1及试管3检测结果两两比较差异有统计学意义（P<0.05），其他血栓分子标志物检测结果差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。

表1 不同试管血栓前分子标记物检测结果比较（±s）

表1 不同试管血栓前分子标记物检测结果比较（±s）

注：组间两两比较，*P<0.05

组别 n TAT（ng/mL）PIC（μg/mL）TM（TU/mL）t-PAIC（ng/mL）试管1 36 33.95±34.65 0.95±0.49 9.39±4.31 8.37±3.95试管2 36 1.87±1.58* 0.89±0.48 10.11±3.65 10.00±5.2试管3 36 2.23±1.57 0.92±0.51 10.01±3.85 10.3±5.56 F 10.132 0.033 0.116 0.530 P 0 0.968 0.891 0.593

2.2 不同试管凝血七项检测结果比较 结果显示，不同试管PT检测结果差异有统计学意义（P<0.05）。见表3；且试管1及试管2、试管1及试管3检测结果两两比较差异有统计学意义（P<0.05），其他凝血系列检测结果差异无统计学意义（P>0.05）。见表2。

表2 不同试管凝血七项检测结果比较（±s）

表2 不同试管凝血七项检测结果比较（±s）

注：组间两两比较，*P<0.05

PT（秒） APTT（秒） FIB（g/L） D-二聚体（mg/L） FDP（μg/mL） TT（秒） AT3（%）试管1 36 10.01±1.3 22.62±3.33 3.17±1.03 1.02±1.14 3.21±2.43 18.87±1.67 91.38±19.33试管2 36 11.72±1.23* 24.83±5.98 3.02±0.82 1.01±1.15 2.88±1.35 17.98±1.87 90.08±20.99试管3 36 11.7±1.33* 25.28±6.41 3.03±0.83 0.98±1.05 2.81±1.58 18.48±1.98 89.99±20.81 F 6.592 0.772 0.096 0.003 0.155 0.668 0.016 P 0.004 0.471 0.909 0.997 0.857 0.520 0.984组别 n

3 讨论

血栓前状态是指机体内纤溶系统和抗凝系统功能失调，容易引起血栓的多种因素改变，有血栓形成倾向但尚未形成血栓，或者形成少量血栓正处于溶解状态。它的分子标志物有AT-Ⅲ、v WF、D-二聚体、FIB、TAT、P-选择素、纤维蛋白降解产物（FDP）等[2］。这些分子标志物和凝血功能检测的标准化近年来得到了临床的重视。少数有经验的医生在诊治患者过程中意识到血栓存在的风险，提前给患者做抗凝治疗，但经常在抗凝和止血治疗的程度上难以把握，临床发现血栓或出血几乎已经是晚期。因此通过检测这些分子标志物的改变，早期识别血栓前状态的存在，采取相关适当的抗凝措施是非常有必要的。然而血栓前状态分子标志物和凝血功能检测的稳定性和准确性与一次性真空采血管的质量紧密相关，采血管质量和性能是采血标准化不可忽视的问题[3］，2018年国家卫生健康委员会发布的WS/T 224-2018《真空采血管的性能验证》行业标准（简称WS/T 224~2018），为一次性真空采血管质量的标准化评估提供了指南[4］。

一次性真空采血管多为普通玻璃管和塑料管，内含的各种添加剂（如抗凝剂、促凝剂、分离胶、表面活性剂）、试管材质等均会对部分检验项目的检测结果产生影响[5］，本研究选用的三家不同生产厂家的一次性真空采血管抗凝剂均为枸橼酸钠，其原理是通过与血液中钙离子形成不容易解离的枸橼酸钙螯合物而达到抗凝作用，适用于血栓分子标志物和凝血试验。且三家一次性真空采血管均符合美国临床实验室标准化委员会（national committee for clinical laboratory standards，NCCLS）推荐的血凝指标测定要求的抗凝剂为枸橼酸钠，浓度是3.2%，相当于109mmol/L，抗凝剂与血液的比例是1∶9[6］。理论上使用三个厂家生产的一次性真空采血管用同一台仪器进行同一项目检测，不同生产厂家试管采集的标本检测结果理应一致。但是，本研究结果表明，用不同生产厂家的一次性真空采血管（枸橼酸钠与血液比例均为1∶9）采集血液检测血栓分子标志物和凝血系列指标，三家不同生产厂家试管的TAT检测结果分别为：（33.95±34.65）ng/mL，（1.87±1.58）ng/mL，（2.23±1.57）ng/mL，差异有统计学意义（F=10.13，P<0.05），且试管1及试管2、试管1及试管3检测结果两两比较差异也有统计学意义（P<0.05）；三家不同生产厂家试管的PT检测结果分别为：（10.01±1.3）秒，（11.72±1.23）秒，（11.7±1.33）秒，差异有统计学意义（F=6.59，P<0.05），且试管1及试管2、试管1及试管3检测结果两两比较差异也有统计学意义（P<0.05）。其他血栓分子标志物和凝血系列检测结果差异无统计学意义（P>0.05）。这与王延群[7］用国内两家不同企业生产的一次性真空采血管（枸橼酸钠抗凝剂）检测64例血样，发现PT等4项指标均有显著性差异的结果相符。产生差异的原因可能与一次性真空采血管的材质、生产过程中对试管内壁的处理方式不同导致管壁不光滑或硅化不好[8］、试管本身的清洁度[9］以及试管的消毒方式有关，这些因素会激活血样中的凝血因子，使得部分凝血因子在检测前被消耗，改变了血样的原始状态和稳定性[10］，在检测过程中产生干扰，从而对检测结果造成了一定的影响。因此，更换不同品牌、不同材质或不同批号的一次性真空采血管时应严格检查采血管质量并做好批间对比实验，并记录存档[11］。

随着现代医学的进步和人们对于健康重视程度不断提高，医学检验的应用范围越来越广。尤其在当今精准医疗时代，临床实验室仪器设备有了极大的改变，从单台仪器的测定到自动化流水线系统，使得实验室管理模式也随之发生了根本性的变化[6］。医学检验贯穿于诊疗的全过程，在提高医疗水平的同时，加强检验质量管理是十分必要的。检验质量不仅仅局限于检验结果本身，从管理的角度来讲包括影响检验结果全过程的各个方面：检验前质量控制、检验中质量控制和检验后质量控制。《医疗机构临床实验室管理办法》要求实验室内采用不同方法或仪器检验同一项目时，应进行一致性的比较（仪器间比对）[6］，但是，临床检验的质量过于重视检验结果而忽视了检验标本的质量控制。有统计分析表明，检验前质量控制保证体系是保证临床检验结果准确的重要基础[6］，检验前标本的质量在整个检验质量控制程序中占比高达70%[12］，但其具有很大的不可控性，是检验仪器、试剂、质控品等无法解决的。从医生申请检验项目开始，包括选择采集样本容器、采集样本、运送样本以及样本运送到实验室后进行检验前的处理，这些都属于检验前阶段的质量控制过程，这些因素对减少实验误差、提高检验质量来说非常重要。认识和控制检验前质量控制，不仅需要检验科人员的努力，还有赖于医院临床医生和护理人员的配合[13］。

综上所述，一次性真空采血管质量直接影响临床检验结果，对其进行性能评估是保证其质量的重要措施[14］。所以在检测血栓前分子标志物和凝血系列项目时，应该注意不同生产厂家一次性真空采血管之间的比对，选择合适的采血管，提高检测结果的准确性，使选用的采血管对临床检测结果影响最小化，同时能最大程度提高检验结果的可靠度[15-16］，为临床诊疗工作提供有价值的参考依据。