p16/Ki-67检查在宫颈不典型鳞状上皮细胞及低级别鳞状上皮内病变中的诊断价值＊

吴飞荣 冯书梅 陈婉仪

子宫颈癌属于女性生殖器高发恶性肿瘤，且多数患者发病早期临床症状缺乏典型性，导致临床诊疗难度较大[1]。液基细胞学检查、人乳头瘤病毒（HPV）DNA检查是子宫颈癌常用的筛查方法，而对于宫颈不典型鳞状上皮细胞（ASCUS）及低级别鳞状上皮内病变（LSIL）临床上可选择HPV DNA分流方法进行评估及筛查。尽管上述方法能提高子宫颈癌早期检出率，但是不同方法存在一定局限性，临床漏诊率较高[2]。国内学者研究表明：宫颈细胞学筛查和HPV检查的普遍展开，可提高早期子宫颈癌检出率，降低临床死亡率。但是，上述方法敏感度、特异度较低，对仪器及设备要求较高，难以在基层医院推广应用。检索大量文献发现，p16/Ki-67细胞学双染色检查用于宫颈高级别上皮内瘤变中敏感度较高，但是该结论尚未得到证实。p16/Ki-67细胞学双染色技术是一种新型的诊断方法，在子宫颈癌筛查中应用较为广泛，是指子宫颈癌病灶组织中能同时筛查出p16、Ki-67两种抗体，能反映细胞周期失调，可动态了解高级别病变情况，但是该方法的诊断效能研究较少。因此，本研究以ASCUS和LSIL患者为对象，探讨p16/Ki-67在ASCUS及LSIL中的应用，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性选择2020年9月-2021年11月东莞市东部中心医院疑似ASCUS患者56例作为观察组。选择同期诊疗的疑似LSIL患者52例为对照组。纳入标准：（1）参考ASCUS和LSIL有关标准进行评估[3]；（2）均完成p16/Ki67检测，且患者均可耐受；（3）具有完整的报告结果，且检测前未接受放化疗、生物免疫治疗。排除标准：（1）精神异常、认知功能异常或处于妊娠期哺乳期女性；（2）伴有其他宫颈疾病、宫颈尖锐湿疣或宫颈息肉；（3）严重肝肾功能异常或伴有自身免疫系统疾病。观察组年龄28～67岁，平均（45.29±5.63）岁；体重指数（BMI）18～29 kg/m2，平均（23.53±2.69）kg/m2。对照组年龄29～68岁，平均（45.61±5.66）岁；BMI 17～30 kg/m2，平均（23.61±2.73）kg/m2。两组临床资料比较差异无统计学意义（P>0.05）。本研究在医院伦理批准下完成，患者签署同意书。

1.2 方法

（1）阴道镜活检。所有患者均完成阴道镜检查，并由本院5年经验以上医生完成病灶定位，对于单一阴道镜检查取材不满意者，可选择宫颈管搔刮术，由医院病理医生对其结果进行判读，完成ASCUS和LSIL疾病的判定和鉴别。（2）p16/Ki-67检查。①检测方法。检查前常规选择宫颈细胞标本，借助免疫细胞化学法，利用新柏氏2000系统完成p16/Ki-67测定，上述所有操作均根据试剂盒说明书完成；待上述操作完毕后采用p16/Ki-67双染色细胞学试剂盒（购自于广州安必平医药科技股份有限公司）及全自动染色仪对细胞涂片进行检查，常规染色后清洗、晾干及封固，上述所有操作均严格遵循仪器、试剂盒说明书完成。②判读方法。p16/Ki-67检查时阳性满足同一个细胞同时表达p16/Ki-67，整张玻片有一个双染色细胞（胞核红色、胞浆棕色）[4]。

1.3 观察指标

以阴道镜活检检查结果为“金标准”，分析p16/Ki-67在ASCUS及LSIL中的诊断价值。敏感度=真阳/（真阳+假阴）×100%；特异度=真阴/（真阴+假阳）×100%；阳性预测值=真阳/（真阳+假阳）×100%；阴性预测值=真阴/（真阴+假阴）×100%。

1.4 统计学处理

本研究数据采用SPSS 24.0统计学软件进行分析和处理，计量资料以（±s）表示，采用t检验，计数资料以率（%）表示，采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 p16/Ki-67在ASCUS中的诊断价值

56例疑似ASCUS患者经阴道镜活检检查确诊45例，确诊率为80.36%。p16/Ki-67在ASCUS中检查确诊42例，与“金标准”检查准确度为80.36%；p16/Ki-67诊断敏感度为84.44%，特异度为63.64%，阳性预测值为90.48%，阴性预测值为50.00%，见表1。

2.2 p16/Ki-67在LSIL中的诊断价值

52例疑似LSIL患者经阴道镜活检检查确诊41例，确诊率为78.85%。p16/Ki-67在LSIL中检查确诊37例，与“金标准”检查准确度为80.77%；p16/Ki-67诊断敏感度为82.93%，特异度为72.73%，阳性预测值为91.89%，阴性预测值为53.33%，见表2。

2.3 p16/Ki-67在不同疾病中的诊断价值比较

p16/Ki-67在ASCUS和LSIL两种疾病中均具有较高的检查准确度，且p16/Ki-67诊断两种疾病敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值比较差异均无统计学意义（P>0.05），见表3。

表3 p16/Ki-67在不同疾病中的诊断价值比较（%）

3 讨论

子宫颈癌是威胁女性健康的公共健康卫生问题，且全世界各地均在探索适合本国国情的子宫颈癌筛查方法[5]。目前，我国对于子宫颈癌的筛查多以TCT和高危型HPV检测为主，对于发达国家医疗水平较高，常采用HPV联合液基细胞学检查，能获得较高的筛查准确性，但是该方法对医生专业技能要求较高，价格亦昂贵，导致上述筛查方法难以在基层医院推广应用。而细胞学检查能提高宫颈异常细胞检出率，但是其敏感度较低，导致临床诊断误诊、漏诊率较高[6]。TCT结果中ASCUS和LSIL检查多数已经超过炎性反应范畴，但是难以进一步筛选出高级别鳞状上皮病变，容易漏诊。因此，积极探讨价格低廉、无创及准确的宫颈疾病筛查方法，成为当前研究的热点[7]。

近年来，p16/Ki-67逐步在ASCUS和LSIL患者中得到应用，且效果理想[8]。本研究中，56例疑似ASCUS患者经阴道镜活检检查确诊阳性结果45例，p16/Ki-67检查确诊42例，检查准确度为80.36%；诊断敏感度为84.44%，特异度为63.64%；52例疑似LSIL患者经阴道镜活检检查确诊41例，p16/Ki-67检查确诊37例，与“金标准”检查准确度为80.77%；诊断敏感度为82.93%，特异度为72.73%，从本研究结果看出，p16/Ki-67用于ASCUS和LSIL患者中筛出阳性结果诊断敏感度均较高。p16属于是一种细胞周期依赖性的激酶抑制蛋白，能直接抑制细胞周期紊乱，介导细胞的无限制增殖，广泛用于ASCUS和LSIL级别的鉴别和评估中。国内学者研究表明：p16在ASCUS和LSIL的发生、发展中发挥了重要的作用，能参与细胞周期的调控，属于是一种抑癌基因[9]。持续的p16高表达能影响肿瘤细胞周期及细胞活性，部分患者中同时伴有Ki-67和p16高表达。由此看出，p16/Ki-67共同表达用于ASCUS和LSIL中能获得较高的筛查效能。Ki67属于是一种增殖性细胞核抗原，仅在G0期表达缺失，广泛用于恶性肿瘤的辅助诊断及预后评估中[10]。对于ASCUS和LSIL患者而言，宫颈组织是良性或恶性，其增殖情况不同，正常细胞增殖率低于3%，属于正常细胞需更新换代。对于良性肿瘤其增殖在5%～10%，而恶性肿瘤一般情况下增殖率>10.0%，对于部分低度恶性肿瘤，Ki-67的表达率<5%。但是，多数情况下Ki-67的增殖会随着肿瘤细胞的恶性程度增高而增加。国内学者研究表明：在生理功能正常的细胞中，p16、Ki67相互拮抗，在同一细胞中如均有表达，代表细胞周期失调，患者高级别鳞状上皮内病变可能性大[11]。因此，p16、Ki67细胞双染色检查能实现对病变细胞的进一步诊断，且该方法不依赖于细胞形态学测定，能指导临床诊疗。检索大量文献可以发现，HPV筛查用于ASCUS和LSIL患者中存在诸多局限性，该方法并不适合我国子宫颈癌的筛查，而p16/Ki-67双染检测检测，对于仪器及设备要求较低，检查时不需要依赖细胞形态学，学习周期较短，能减轻检验人员工作压力及强度。同时，p16/Ki-67双染的实施诊断敏感度及特异度较高，能动态了解病情变化情况，预测子宫颈癌的发展方向，能提高子宫颈癌筛查效能，节约医疗资源，提高病灶早期检出率[12]。本研究中，p16/Ki-67在ASCUS和LSIL两种疾病中均具有较高的检查准确度，且p16/Ki-67诊断两种疾病敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值比较差异均无统计意义（P>0.05），从本研究结果看出，p16/Ki-67用于ASCUS和LSIL患者中均可以获得较高的诊断价值。因此，临床上对于疑似ASCUS和LSIL患者中，应加强p16/Ki-67检查，帮助患者早期确诊，必要时可联合其他方法检查，发挥不同检查方法优势，帮助患者早期确诊[13]。

综上所述，p16/Ki-67用于ASCUS和LSIL患者中，能获得较高的筛查效能，诊断敏感度高，且该方法对医生专业技能要求较低，能弥补传统筛查方法存在的弊端，可为临床诊疗提供参考依据。