EBV抗体联合DNA检测诊断小儿呼吸道EB病毒感染的应用价值

郭晓辉

EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV）是一种双链DNA病毒，人群普遍易感，其潜伏期较长[1]。EBV具有传染性，为核细胞增多症的病原体的一种，感染后可在患者口咽部的上皮细胞内进行增殖，进而向呼吸道进行侵入，造成呼吸道感染，当患者免疫功能下降，可能会出现复发性感染[2-3]。婴幼儿为呼吸道感染性疾病多发群体，其感染病原包括肺炎衣原体、细菌、病毒等，其中病毒引发的儿童呼吸道感染性疾病占大多数[4]。儿童免疫力较成人更低，其感染EBV概率相应升高，且感染后治疗时间长，因此EBV的早期筛查对于患儿的临床治疗和用药考量有重要意义。鉴于此，本研究旨在对比EBV抗原检测、EBV-DNA检测和二者联合检测的诊断效能，详细报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

将2019年12月-2021年11月到临沂市第三人民医院就诊的360例呼吸道感染患儿纳入研究，（1）纳入标准：①符合文献[5]《儿童EB病毒感染相关疾病的诊断和治疗原则专家共识》诊断标准，经临床高度疑似为EB；②伴发热、喘息、咳嗽等呼吸道感染症状；③临床资料完整。（2）排除标准：①合并凝血功能障碍；②合并免疫系统疾病；③合并支气管哮喘等呼吸道疾病；④患儿神志不清无法配合治疗；⑤随访脱落。根据EB病毒诊断金标准分为EB组和非EB组。EB组为174例，男、女例数为93、81例；年龄0.5～14岁，平均（7.3±1.2）岁；病程2～20 d，平均（11.00±1.23）d。非EB组共186例，其中男、女例数97、89例；年龄0.9～13.5岁，平均（7.2±1.3）岁；病程3～20 d，平均（11.50±1.27）d。两组一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05），有可比性。家长签署知情同意书。本研究经本院伦理委员会批准。

1.2 方法

EBV抗体检测：于治疗前后取两组空腹清晨静脉血3 ml，另取3 ml制作抗凝血。以3 000 r/min速度进行10 min离心处理后取上清液待检，采用酶联免疫吸附法（ELISA）对IgG、IgM、IgA抗体进行检测，首先对样本进行温育，然后进行清洗后行底物温育，完成后进行比色，处理流程严格按照试剂盒说明书进行。

EBV-DNA检测：治疗前后用生理盐水为两组清洁口腔后，用无菌压舌板轻压患儿舌后部，使咽喉部暴露，以无菌咽拭子在患儿两腭弓、扁桃体和咽部擦拭并捻转3次，取分泌物后插入无菌试管待检。取样管装1.5 ml生理盐水，将咽拭子置于其中搅动振荡5 min，贴壁挤干后弃去，以12 000 r/min速度离心5 min后取上清液，经静置沉淀后与灭菌生理盐水1 ml混合，再次进行相同离心步骤，将其与处理后的抗凝全血样本分别放入荧光定量PCR仪（美国ABI公司）进行检测，所有流程严格按照说明书进行。

1.3 观察指标及评价标准

比较两种检测方式及其联合检测的阳性诊出率和诊断效能。（1）EBV抗体阳性标准：EBV-IgA≥ 40 U/ml、EBV-IgG≥ 25 U/ml、EBVIgM≥ 40 U/ml为阳性。三种抗体有一种及以上阳性则诊断为EBV抗体阳性。（2）EBV-DNA阳性标准：EBV-DNA>400拷贝数/ml定义为阳性。（3）联合检测标准：二者有一项提示为阳性，则联合检测结果为阳性。

1.4 统计学处理

以SPSS 22.0软件分析本研究数据，计数资料以率（%）表示，采用χ2检验，计量资料以（±s）表示，采用t检验，P<0.05有统计学意义。

2 结果

2.1 EBV抗体、EBV-DNA及其联合诊断的阳性诊出率对比

EBV抗体联合EBV-DNA检测对EB组的阳性诊出率高于单一检测，对非EB组的阳性诊出率低于单一检测，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

表1 三种方式阳性诊出率对比（%）

2.2 EBV抗体诊断效能对比

EBV-IgA的诊断敏感度和准确度低于EBV-IgG和EBV-IgM，差异有统计学意义（P<0.05），三种抗体诊断特异度比较差异无统计学意义（P>0.05），见表2。

表2 三种EBV抗体诊断效能对比（%）

2.3 三种方式的诊断效能对比

EBV抗体联合EBV-DNA检测的敏感度、特异度、准确度均高于单一检测，差异有统计学意义（P<0.05），见表3。

表3 三种方式诊断效能对比（%）

3 讨论

EBV是一种人类最容易感染的DNA病毒，也称人类疱疹病毒4型，在儿童口腔及咽部的上皮细胞着床后可进行增殖，并进入呼吸道引起感染[6]。EBV感染早期缺乏典型症状，临床表现具有多样性，呼吸道感染是儿童最为常见的一种临床表现，随病程发展可引起多种严重并发症，因此及时进行诊断和治疗对患儿的预后具有重要意义[7]。据张蓉等[8]报道，新生儿EBV感染无明显季节性，也非聚集性分布，除了呼吸道感染，还可能引发病毒性肠胃炎、心肌炎等，使患儿生长发育出现落后的情况。EBV感染早期诊断困难，EBV-DNA也仅在病毒活跃期才能检出，因此临床对于EBV的检查有较高的漏诊和误诊率。据研究，患儿感染EBV后其血清中会出现EBV抗体，但由于免疫过程的复杂性，其表达会出现不准确的情况[9]。因此，寻求一种高准确性的诊断方式对于EB病毒感染的儿童呼吸道感染疾病的诊治具有极高价值。

本研究中，EBV抗体检测联合EBV-DNA检测较任意单一检测阳性检出率和诊断效能更高，假阳性率更低，提示联合检测方式应用于儿童呼吸道感染性疾病诊断具有更高的诊断价值。EBV由于其嗜B淋巴细胞的特性，B淋巴细胞就成为该病毒最早也是最主要的宿主，但EBV仅可以在B淋巴细胞中进行病毒复制、转化和传代，当病毒存在超过一定数量，引发T淋巴细胞的强反应，使机体释放炎症介质，T淋巴细胞的分化过程出现异常，造成免疫应答的异常，其体现在临床上就是多样化的病症表现[10-11]。EBV感染后发生体液免疫，从而形成EBV特异性抗原，对抗体表达进行检测是判断是否感染的可靠指标。但抗体检测仅能反映EBV感染情况，对EBV的复制情况却难以呈现[12]。EBV-DNA载量可反映患儿受损害程度，若长期处于高表达状态，其机体健康状态越差，长此以往淋巴系统等并发恶性肿瘤的风险也随之上升[13]。由于当前EBV的治疗主要靠药物进行病毒抑制，或是干扰病毒DNA多聚酶，使病毒复制得到抑制，或是在DNA多聚酶的作用下，与EBV增长的DNA链进行结合，达到中断DNA链的效果，因此其表达水平和病情有直接相关，因此EBV-DNA不仅可以用来进行EBV感染的诊断，还可帮助医生判断患儿病情严重程度以斟酌用药，也可作为疗效和预后情况判定的标准之一[14-15]。但EBV-DNA仅在病毒复制活跃时才可被检出，在诊断中漏诊率较高，而EBV抗体则需机体已经产生较强的免疫反应，因此二者联合诊断可对单一检测方式的不足进行弥补[16]。本研究中，EBV抗体中，IgM和IgG的诊断效能较IgA更高，提示在EBV感染急性期IgM和IgG具有较高准确度。机体发生免疫反应后则会出现抗体，最先出现的抗体为IgM，接着是IgG，其高表达水平可持续4～8周，通常被应用于观察初期感染[17]。而IgA的血清半衰期更短，可用作监测病程发展情况[18]。但据吴振勇等[19]研究，3岁以下患儿IgM抗体检测效能较其他年龄段更低，可能由于低龄段患儿免疫系统未发育完善，EBV对机体的刺激不足以使其产生达到检测下限的抗体数量。但对IgM进行检测目前仍是儿童EBV筛查的主要指标，在临床筛查过程中可结合DNA检测等以提高检测准确性。受限于本次研究样本数量和研究时间，EB血清抗体和EBVDNA对儿童呼吸道感染性疾病诊断的联合检测方案仍待进一步探索和完善，其相关理论仍需继续分析与研究。

综上所述，EBV抗体与DNA联合应用于儿童呼吸道EBV感染性疾病诊断，其诊断价值高，值得进行临床推广。