趋化因子受体4对结直肠癌患者术后复发转移的评估价值

伍远浩， 黄 平， 李来春

(海南省人民医院， 海南 海口 570311)

结直肠癌是我国常见的消化道恶性肿瘤,近年来发病率和死亡率迅速上升，5年生存率为 60% 左右，并且其治疗效果30年来无显著改善[1]。目前手术切除仍是结直肠癌的主要治疗方法，但术后有较高复发转移率，因此关于结直肠癌患者术后预后的判断一直是临床关注的热点问题[2]。趋化因子受体 4(CCR4)是一种含7次跨膜G蛋白偶联的趋化因子受体，与其相应的趋化因子配体结合能促进白细胞浸润、细胞增生以及恶性肿瘤新生血管形成[3]。相关研究证实，CCR4在结直肠癌组织中高表达，并且其高表达与结直肠癌的恶性生物学行为具有一定的相关性，可用于判断患者是否出现远处转移[4]。本研究通过免疫组化检测结直肠癌患者中CCR4的表达情况，拟探讨其与结直肠癌患者临床病理特征的关系以及对结直肠癌患者术后复发转移的评估价值，并建立相关Cox生存风险得分模型，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料:纳入2015年1月至2017年1月在我院接受根治性切除术的结直肠癌患者101例作为研究对象，纳入标准：所有患者均经术后病理组织学确诊为结直肠癌；均为首次诊断结直肠癌，并在我院接受根治性切除术；预计生存期大于6个月。排除标准：接受姑息性手术；合并严重心、肺、肝、肾疾病；妊娠和哺乳期妇女；有严重精神障碍者；合并其它系统恶性肿瘤；不配合手术治疗和随访者。

1.2方法:CCR4免疫组化检测：采用免疫组化二步法进行免疫组化染色。石蜡包埋组织切片，二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化，高压修复，室温孵育2h。依次滴加增强剂及二抗，DAB显色，苏木精复染，常规脱水、透明、封片。选取400倍镜下4个互不重叠的视野，每个视野计数100个细胞，并数出染色的细胞数量，计算染色细胞所占比例。CCR4主要在细胞质中表达，为黄色或棕黄色颗粒。根据细胞染色比例，将结果分为:阴性(-):<50%；阳性(+):≥50%。资料收集与随访：收集患者年龄、性别、病灶部位、分化程度、TNM/T分期、淋巴结转移、病灶直径、CCR4、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原19-9(CA19-9)以及辅助性治疗等临床病理资料，所有患者术后均随访5年，随访终点事件为肿瘤复发转移，记录患者从手术之日起至随访5年内肿瘤复发转移的时间为无病生存期。

2 结 果

2.1两组患者的一般情况:101例患者均接受结直肠癌根治手术，根据术后免疫组化检测CCR4表达状态分为CCR4阳性组34例(33.66%)和CCR4阴性组67例(66.34%)，男性61例(60.40%)，女性40例(39.60%)，年龄为31～69岁，平均年龄为(54.68±12.63)岁。

2.2两组患者一般临床病理资料比较:CCR4阳性组患者低、未分化、TNM/T3～4分期以及淋巴结转移所占比例明显高于CCR4阴性组(P<0.05)，其他临床资料如年龄、性别、病灶部位等两组间比较无明显差异(P>0.05)，提示CCR4表达状态与患者肿瘤分化程度、TNM/T分期以及淋巴结转移密切相关，见表1。

表1 两组患者一般临床病理资料比较

2.3影响结直肠癌患者术后5年肿瘤复发转移的单因素Cox回归分析:以患者术后肿瘤复发转移为因变量，以表2中所有临床病理指标为自变量(具体自变量说明与赋值见表2)，单因素Cox回归分析结果显示，分化程度、TNM/T分期、淋巴结转移、病灶直径、CCR4以及CEA6个指标与结直肠癌患者术后5年肿瘤复发转移存在一定相关性(P<0.05)，而其他指标与直肠癌患者术后5年肿瘤复发转移无明显相关性(P>0.05)，见表3。

表2 自变量说明与赋值

表3 影响结直肠癌患者术后5年肿瘤复发转移的单因素Cox回归分析

2.4影响结直肠癌患者术后5年肿瘤复发转移的多因素Cox回归分析:以患者术后肿瘤复发转移为因变量，将单因素分析中有统计学意义的指标自变量进行多因素Cox回归分析，结果显示，分化程度、TNM/T分期、淋巴结转移以及CCR4为影响结直肠癌患者术后5年肿瘤复发转移的独立预测指标(P<0.05)，见表4。

表4 影响结直肠癌患者术后5年肿瘤复发转移的多因素Cox回归分析

2.5CCR4阳性和CCR4阴性两组患者术后5年无病生存率比较:CCR4阳性和CCR4阴性两组患者术后5年无病生存率比较具有明显差异，CCR4阴性组患者术后1年、3年、5年无病生存率明显高于CCR4阳性组患者(72.3%、54.2%、38.6%vs54.5%、31.9%、24.5%,P<0.05)，见图1。

图1 CCR4阳性和CCR4阴性两组患者术后5年无病生存率比较

2.6预测结直肠癌患者术后5年肿瘤复发转移的Cox生存风险得分模型的建立:基于分化程度、TNM/T分期、淋巴结转移和CCR4这4个独立预测指标构建预测结直肠癌患者术后5年肿瘤复发转移风险的Cox生存风险得分模型，风险得分的最佳诊断截点(cutoff)值为-0.08，以cutoff值为界值点将患者分为高危组和低危组，结合图A、图B、图C可以看出Cox生存风险得分越高，患者术后肿瘤复发转移的风险越高，见图2。

图2 预测结直肠癌患者术后5年肿瘤复发转移的Cox生存风险得分图

3 讨 论

趋化因子受体及其配体网络调控受诸多因素的影响，肿瘤的形成和发展中趋化因子网络的参与是复杂而精细的，而趋化因子受体在恶性肿瘤侵袭转移中的网络调控机制目前也尚存争议[5,6]。趋化因子受体与其特异性的配体结合后具有趋化各种炎症细胞向炎症定向迁移的能力，两者的相互作用控制着各种免疫细胞在循环系统及组织之间的定向迁移[7]。相关研究[8]也证实CCR4在多种恶性肿瘤如乳腺癌、肺癌、肝癌组织中呈现高表达，与其相应的配体CCL17发生特异性结合后，促进恶性肿瘤细胞循配体浓度梯度定向转移，由此形成了肿瘤转移机制。Zhang Y等[9]的研究发现，CCR4与CCL22发生特异性的结合后激活一系列细胞传导通路可刺激肿瘤细胞增殖生长，趋化大量炎症细胞向肿瘤组织侵润从而促进恶性肿瘤细胞发生免疫逃逸，促进恶性肿瘤血管增殖从而达到促进恶性肿瘤细胞远处侵袭转移的效应。而Marshall LA等[10]研究发现CCR4与其配体结合后能通过趋化、活化免疫细胞后抑制血管增殖而起到抗肿瘤的作用，由此可见，CCR4及配体系统与肿瘤的关系具有双向性。而本研究多因素分析结果显示，CCR4为影响结直肠癌患者术后5年肿瘤复发转移的独立预测指标，提示结直肠癌患者癌组织中CCR4表达情况可用于预测结直肠癌患者术后肿瘤复发转移的风险，CCR4阳性患者术后肿瘤复发转移的风险较高，预后较差,其可能原因与CCR4阳性的结直肠癌患者肿瘤恶性程度高、侵袭转移能力强、临床分期较晚有关。

此外，为了提高预测的准确性，本研究结合多因素分析得到的4个独立预测指标：分化程度、TNM/T分期、淋巴结转移和CCR4，建立了用于预测结直肠癌患者术后5年肿瘤复发转移风险的Cox生存风险得分模型，可以看出，风险得分较高的高危组其CCR4的阳性表达率较高，而风险得分较低的低危组正好相反，其CCR4的阴性表达率较高，也再次证实了之前研究结论。