实验动物质量管理中的兽医监管

丁燕霞

(浙江大学实验动物中心，浙江 杭州 310058)

实验动物是生命科学研究不可或缺的“活体仪器”，发挥着重要且不可替代的作用。随着科学技术的迅猛发展，实验动物科学已发展成为1门支撑生命科学、医学和医药研究的综合性学科，成为衡量高校及科研院所科研水平的重要标志[1，2]。由于实验动物的来源、生理特征、饲养环境及是否感染疾病会影响实验结果，因此实验动物的质量直接影响着科研质量。实验动物质量的控制依赖于兽医的管理，兽医是屏障设施不可或缺的角色。整个过程包括：设施的设计、设施启用前消毒、运行管理中的微生物和环境控制、实验动物福利伦理审查、实验动物的引入、实验过程中动物的监护、试验结束后动物的安乐死，贯穿动物实验的始终。现将实验动物质量管理中的兽医监管工作介绍如下，供同行参考。

1 实验动物质量管理易出现的问题

1.1 实验动物来源实验科研对实验动物需求量大，实验动物来源广泛，大概有以下几种途径：(1)委托实验动物中心代购相应等级的实验动物；(2)通过相关公司采购常规动物或基因工程小鼠；(3)其他单位赠送；(4)从国外引进实验动物。实验动物在生产、包装、运输等过程中因为装运不当、外力、污染等因素导致达不到相关等级要求，无法使用。此外，购买或者其他单位赠送的实验动物没有严格把关，致使一些没有生产资质单位的实验动物进入设施造成污染。

1.2 实验动物使用管理不当学生对相关实验操作的熟悉程度不一样，有的甚至对小鼠等实验动物有恐惧心理，致使动物在使用过程中受到意外伤害，如抓取不当、用力过度造成动物死亡。另外，动物在剪趾、标号或基因型鉴定过程中出血过多，剪尾取血没有做好止血诱使动物之间撕咬，超量饲养，动物食仔等影响实验进程。除此之外，由于环境因素、实验因素、病原污染等情况会导致动物状态不好、生长发育不良、感染疾病等问题，甚至污染整个设施及其他动物。

1.3 实验动物饲养管理不规范高校屏障设施人流量大，实验人员在实验操作过程中未遵守相关屏障设施管理标准操作程序(以下简称“SOP”)，私自携带未消毒的物品进入屏障设施或在屏障设施内违规使用未彻底消毒的实验物品，致使屏障环境受到污染，影响实验动物的生存环境，进而影响实验动物质量[3]。饲养员专业化程度不高，没有掌握对实验动物的生长习性等相关信息，动物疫病防控观念淡薄，不主动学习相关的专业知识；有的饲养员甚至不按SOP规定饲养动物，不重视实验动物的饲养，对环境卫生的清洁消毒马虎，增加了屏障设施污染的风险。

2 实验动物质量管理中的兽医监管

良好的饲养管理是保证实验动物质量的前提，为保证实验动物的质量，浙江大学实验动物中心在借鉴同行管理经验的基础上，结合相关工作实际，制定了1套实验动物质量兽医监管方法。

2.1 实验动物现场接收实验动物质量控制的关键首先是对动物来源的控制，因此对实验动物供应商的考察以及动物运输到场后兽医现场审查显得尤为重要。在完成供应商考察，确定供应商符合相应条件和资质后，为保证实验动物在运输过程中的质量，兽医会在接收动物时进行现场审查，内容包括：实验动物来源、实验动物质量合格证、实验动物质量检测报告、实验动物运输盒有无破损漏气等情况、观察动物的状态等[4]。相关证件审核不符合要求或发现有运输盒破损、实验动物状态异常等情况，兽医应当场拒收此类动物并告知供应商。审核通过后，兽医通过本中心的实验动物接收系统录入相关信息，并打印出相对应的订单二维码，实验动物凭订单二维码进入屏障设施。这样不仅保证了每批外来动物都在我中心有饲养笼位且经过兽医严格审查后进入屏障设施，也保证了实验动物来源资料清晰可追溯。对于其他来源(如其他单位赠送或国外引进)的实验动物，根据是否来源于有相关资质的生产单位分为2种情况。(1)来源于有生产资质的单位：要现场检查实验动物生产合格证、第三方出具的实验动物质量检测报告以及实验动物状态。检查通过后置于隔离包隔离饲养1个月，随后抽取一定数量的实验动物送往官方认定的正规单位检测。根据检测结果判断动物是直接进入区域饲养还是通过净化的方式进入区域。生物净化的周期一般为1个月，实验人员可根据时间安排实验进度。(2)来源于没有生产资质的单位：实验动物到达后，按以上条款检查相关情况，并联系技术部门进行生物净化。具体流程见图1。

图1 实验动物进入屏障设施流程

2.2 实验动物使用监督兽医在设施内不定期巡查以规范实验动物的使用，并给实验操作者进行技术指导，规范实验操作，解决实验中遇到的问题，降低对实验动物的伤害。巡查内容主要包括以下几方面。(1)是否正确使用实验动物，根据实验方案选择合适的实验动物。(2)实验操作是否符合实验动物伦理规范。如：小鼠剪趾标记时最好在出生10天以内，这样出血少，可最大程度降低小鼠的疼痛，剪下的脚趾也可用于基因型鉴定；小鼠采血时用剪尾取血法，剪尾长度为5 mm，采血完成后及时止血；检查饲养笼盒内是否存在超出规定(5只/笼)的情况，不符合规定的通知实验者及时分笼饲养处理。(3)解决实验中常见的问题。如：发现有雌鼠食仔的情况，应及时告知实验者在雌鼠分娩前后避免换笼操作，使其处于熟悉的环境中，否则可使雌鼠受惊导致食仔；也可以在生产前4天换笼时适当添加一些棉棒等做窝材料，避免食仔情况发生；小鼠因打斗撕咬导致皮肤破损的，建议实验者分开饲养，待伤口愈合后再进行后续操作。(4)监督并查看动物设施的卫生条件，动物的饮水、饲料使用等是否满足动物福利要求[5]。

2.3 实验动物饲养监管

2.3.1 疾病预防及环境监督屏障环境是实验动物标准化的生长环境，屏障设施的好坏直接影响实验动物的质量。对于屏障设施的管理，我中心兽医制定了一系列切实可行的SOP以及反映实际操作的记录表。同时根据设施实际情况，制定科学、可实施的疾病预防计划，包括屏障设施内周期性消毒计划，消毒液定期更换，季度性清洗小鼠独立通风笼盒(IVC)和饲养笼架以预防滋生寄生虫，与相关公司合作制定蟑螂和野鼠消灭计划及其他疾病防治措施等。兽医联合设施设备组每天对设施内的温度、湿度、气压差等进行监控，发现异常及时处理。

2.3.2 生产物资管控实验动物的生产物资包括水、饲料和垫料。普通级动物饮用水按《生活饮用水卫生标准》(GB 5749—2006)检验。SPF级动物饮用水按《实验动物环境与设施》(GB 14925—2010)要求检测，应为无菌水。饲料和垫料均通过招标购自国内有资质的厂商，在使用过程中不定期抽查垫料的均匀性，是否混有杂质等情况，以及饲料的食用情况、适口性等，发现异常及时反馈和处理，确保实验动物生产生活物资的质量[6，7]。对饲养员的要求：屏障内实验动物饮水瓶和笼盒更换频率为1～2次/周；饲料按需添加，以更换垫料时饲料架上没有饲料存积为宜。生产物资消毒是否彻底与高压蒸气灭菌器的消毒效果和程序有关。为做到有效消毒，采用生物检测法，在消毒时定点放置生物指示剂，通过培养结果检查高压蒸气灭菌器的灭菌效果。

2.3.3 人员培训为了提高服务质量，加强饲养员的专业知识储备，兽医每年定期对饲养员进行培训。培训内容涉及实验动物饲养管理中的各个方面，包括：基础性的换笼操作手法，饲料添加量，饮用水瓶更换的频率，消毒剂的配制和规范使用，屏障区域内地面、墙壁的擦拭消毒和空间喷雾消毒频率；饲养管理过程中常见问题的分析及处理方式，如：常见的动物脱毛、食仔、难产、状态和行为异常；基础的试验操作技术，包括：腹腔注射、尾静脉注射、肌肉注射、灌胃、采血等；饲养管理过程中与课题组建立良好的沟通方式，根据课题组实验需要对实验动物进行特殊管理等。培训结束后对饲养员进行考核，考核成绩直接与绩效挂钩，并一起讨论工作中遇到的问题，饲养中操作及生产工具的优化，SOP和疾病控制方案根据每年的工作情况和讨论方案调整实施。兽医按季度检查饲养员的日常工作表记录情况，以此评估设施环境控制情况以及饲养员的工作情况[8]。

2.4 “哨兵鼠”及环境检测通过“哨兵鼠”监测小鼠种群的微生物感染状况是保障实验动物质量的基础。哨兵鼠是指将背景健康的外源小鼠引入重要的繁殖饲养群体，通过直接接触目的鼠或间接接触垫料的方式对饲养区域进行病原微生物检测，并替代重要饲养群体进行健康体检的1类小鼠。设置哨兵鼠的目的是为了监测环境对实验动物是否有影响、是否患有传染病，以及饮水、饲料对实验动物是否有影响[9]。兽医每年制订哨兵鼠年度检测计划，每年检测2次，检测项目有细菌、病毒、寄生虫、环境等，具体各项检测项目参照《实验动物 寄生虫学等级及监测》(GB 14922.1—2001)、《实验动物 微生物学等级及监测》(GB 14922.2—2011)。考虑到病原体对动物的致病特性及年龄依赖等问题，兼顾某些病原在感染动物后除了没有临床症状(或不明显)外，还可经人员流动带来病原传播的风险等制定设施微生物常规检测项目。通常检测方法有以下几种：通过取样分离细菌的细菌学检测；通过血清学检测病毒抗体；通过透明胶纸黏取法、拔毛镜检法等检测体外寄生虫；通过分泌物涂片法、组织剖面压印法等检测体内寄生虫。此外，发病和死亡的动物必须剖检，剖检结果用于指导是否要增加检测频率或者增加被检动物的数量。与哨兵鼠检测方案同时进行的是环境检测。兽医在屏障设施内选择气流扰动较小的位置，并在设施内实验人员进出量少的时间内放置直径为90 mm的培养皿，放置时间为30 min，之后置于37 ℃培养箱培养48 h，以此监测动态情况下屏障设施内落菌数[10]。落菌数结果可作为兽医制定设施内消毒方案的参考依据。

3 小结

在实际工作中，实验动物的兽医监管不但要承担动物质量控制的相关工作，还要涉及动物实验设施管理的各个方面，尤其在动物福利审查与监督、生物安全评价与管理中发挥着不可替代的作用。没有兽医监管就没有合格的实验动物和准确的实验结果[11]。随着我国实验动物科学的不断发展及对实验动物质量要求的不断提高，实验动物行业对实验动物的兽医监管要求也越来越高、越来越专业，为我国的生物医药研发和人类健康做出更大贡献。