H 型高血压患者乙醛脱氢酶2 基因多态性与发生急性心肌梗死发病的相关性分析

杜子军，王少津，阳慧（海口市人民医院心内科，海南 海口570208）

高血压是心肌梗死发生的高危因素之一，其中H 型高血压患者与非H 型高血压相比，动脉粥样硬化程度更为严重，心肌梗死发生几率更高［1］。 乙醛脱氢酶2（ALDH）是乙醛脱氢酶主要的同工酶，广泛存在于人体肝脏、心脏、脑等器官内，其中活性最强的是乙醛有最有关联ALDH2，其存在于肝脏线粒体内［2-3］。ALDH2 酶活性下降可致内源性一氧化氮合成减少，增强氧化应激反应，致使内皮功能发生改变，并可经通过影响高血压、动脉粥样硬化的发生率，对心肌梗死产生了间接的影响［4］。 同时ALDH2 是不依赖乙醇的心血管疾病的独立影响因素，可经减少活性氧簇(ROS)或解毒4-HNE 途径对心肌细胞凋亡发挥抑制作用［5］。 目前ALDH 与心血管疾病的关系已成为研究热点，然而国内文献对尚未见到H 型高血压患者的心肌梗死的风险与ALDH2 基因多态性的研究，国外文献该方向的研究也较少。本研究选取2018 年1 月至2019 年12 月就诊于本院的98 例H型高血压患者，分析H 型高血压患者ALDH2 基因多态性与AMI 发病的相关性，为临床诊治提供参考。 报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2018 年1 月至2019 年12 月就诊于本院的H 型高血压患者98 例，按是否为出现AMI 分为AMI 组56 例和非AMI 组42 例。AMI 组中男30 例、女26 例；年龄57～78（65.32±3.46）岁；合并糖尿病12 例，有心血管病家族史9 例。 非AMI 组中男22 例、女20 例；年龄56～76（65.19±3.32）岁；合并糖尿病9 例， 有心血管病家族史6 例。 两组患者性别、年龄、合并症等一般资料比较，无显著差异（P＞0.05），具有可比性。本研究经我院医学伦理委员会审核批准。

1.2 纳入排除标准 纳入标准：（1）签署知情同意书；（2）高血压患者均符合《中国高血压防治指南2010》［6］中相关诊断标准，血浆HCY 水平＞10 μmol/L；（3）AMI患者符合《急性心肌梗死中西医结合诊疗专家共识》［7］中诊断标准，并经冠脉造影诊断有明确心肌梗死形成；（4）凝血功能正常。 排除标准：（1）肿瘤；（2）并发感染；（3）合并出血性疾病；（4）全身免疫性疾病；（5）严重心功能不全；（6）严重心脑血管疾病；（7）严重肝肾疾病；（8）血液系统疾病。

1.3 仪器 试剂TIANGEN 公司的血液基因组DNA提取试剂盒，试剂盒由缓冲液GA、洗脱缓冲液TE、附柱CB3、缓冲液GB、蛋白酶K、缓冲液GD、吸收集管、漂洗液PW 组成；HS-6 电热恒温水浴箱由太仓华利达公司生产；Biofuge tresco 离心机由德国贺利氏公司生产；上海洪纪仪器设备有限公司的PCR 扩增仪；恒温金属浴购自杭州瑞诚仪器有限公司；上海百傲科技有限公司生产的BaiO Re-Hyb 全自动杂交仪、BaiO R BE-2.0 生物芯片识读仪。

1.4 方法

1.4.1 DNA 制备 取清晨空腹静脉血2 ml 实施DNA 提取和纯化，按血液基因组DNA 提取试剂盒说明书操作。 在离心管内加入蛋白酶K 溶液20 μl，将EDTA 抗凝血混匀后，吸取200 μl，加入离心管内，加入细胞裂解提取液（BL），涡旋混匀。50℃环境下放置10 min。在样品处理液中加入无水乙醇200 μl，充分颠倒混匀，低速离心。在已活化的吸附柱加入获取的溶液，离心1 min，转速为12 000 r/min。 在吸附柱内加入BW1 液500 μl，离心1 min，加入BW2 液500 μl，离心1 min，随后空转1 min。 完成后于室温下放置3 min，加入洗脱液（BE），56℃金属浴放置5 min，离心1 min，转速为12 000r/min，完成后留取DNA 溶液。

1.4.2 PCR 扩增 准备无菌吸头和0.5 ml 薄壁管。取出试剂，解冻后低速离心，分装ALDH2 扩张液体至0.2 ml 薄壁管内，每管内22 μl，做好标记。扩增管内分别加入反应液A 1 μl，各加入2 μl 提取好的样品DNA 溶液，混匀后即可离心，完成后放入PCR 仪内实施扩增。 扩增条件：预处理5 min（50℃），94℃下行5 min 预变性，94℃下行25 s 变性，60℃下退火25 s，延伸30 s（72℃），循环35 次，延伸5 min（72℃）。取出扩增物，2℃～8℃保存。

1.4.3 杂交显色 将各试剂按要求分装至2 ml 离心管内，置于相应的试剂架中，吸取190 μl 缓冲液，加入PCR 扩增产物10μl，混匀，制作成杂交反应液，放在试管内，置于试管架B 位置，随后将其置于杂交仪内杂交。 待反应结束后，将芯片取出，置于生物芯片识读仪内，实施图像扫描与数据分析，利用BaiO基因芯片图像分析软件操作，自动输出检测结果。

1.5 临床观察指标 （1）比较两组ALDH2 基因分布情况，包括基因型（GG、AA、GA）和等位基因（G、A）；（2）分析ALDH2 基因多态性与H 型高血压患者AMI 发病的相关性。

1.6 统计学处理 数据采用SPSS 21.0 统计学软件进行处理。 计量资料采用（±s）表示，行t 检验；计数资料采用例（百分率）表示，行χ2检验；多因素使用Logistic 回归分析。 P＜0.05 示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组ALDH2 基因分布情况比较 两组GG、AA、G 检出率比较，差异无统计学意义（P＞0.05），AMI 组GA、A 检出率高于非AMI 组，差异有统计学意义（P＜0.05）。 见表1。

表1 两组ALDH2 基因分布情况比较［n(%)］

2.2 ALDH2 基因多态性与AMI 发病的相关性分析以是否合并AMI 作为应变量，以2.1 中有统计学差异项目作为自变量，变量赋值：GA（有=1；无=0）、A（有=1；无=0），Logistic 回归分析，基因型GA、等位基因A是H 型高血压患者AMI 发病的独立危险因素（P＜0.05）。 见表2。

表2 Logistic 回归分析ALDH2 基因多态性与AMI 发病的相关性

3 讨论

Hcy 是甲硫氨酸代谢产物，代谢过程中会产生氧自由基、过氧化氢等物质，对血管内皮细胞有较大毒性，会损伤血管内皮细胞，增加血小板粘附性；能促使血管平滑肌细胞增殖，造成动脉管腔狭窄、动脉壁增厚；参与脂质代谢过程，促使斑块破裂，上述作用可促进动脉粥样硬化形成。 Hcy 与高血压协同作用，两者同时出现会增加AMI 发生风险［8-9］。 另外，H型高血压患者与健康人相比心血管事件发生率约高出25～30 倍，与非H 型高血压相比，高出约5 倍，可能与促进血管平滑肌细胞增殖、 破坏机体纤溶与凝血平衡、损伤血管内皮细胞等有关［10-11］。

高血压是AMI 发生的高危因素，长期处于高血压状态会增加血管内膜厚度，使其硬化，降低动脉血管壁顺应性，增加其僵硬硬度，促进动脉粥样硬化形成，而诱发AMI 等疾病发生ALDH2 与动脉粥样硬化密切相关，对心肌梗死有间接影响。杨美艳等［12］分析显示，ALDH2 突变杂合子型61 例，野生型130 例，突变纯合子型13 例，野生型组与非野生型组患者相比，置入支架数量更少，Gensini 积分更低，提示ALDH2基因型多态性与冠心病患者冠状动脉狭窄程度关系密切，冠状动脉狭窄程度更重的ALDH2 基因突变型患者。 ALDH2 是ALDH 中活性最强一种类型，可转化身体多种物质代谢过程，如内氨基酸、维生素、生物胺、类固醇、乙醇等产生的有害性醛类物质，故ALDH2 在细胞解毒的研究中备受关注。 ALDH2 具有酯酶和脱氢酶活性，能够以四聚体心室存在，其第12 位外显内的鸟嘌呤（G）发生点突变先嘌呤（A），改变整个分子的空间结构，翻译产物谷氨酸（Glu）被赖氨酸（Lys）调换，降低催化活性或活性丧失［13］。ALDH2可分为三种基因型，包括AL2DH2*1/ALDH2*1(GG型、野生型)、ALDH2*1/ALDH2*2(AG 型、突变型)和ALDH2*2/ALDH2*2(AA 型、突变型)，其中GG 型具有ALDH2 的正常活力，AG 型存在6%的酶活力，而AA 型则完全丧失该酶活力，约有50%的亚洲人携带ALDH2 的突变基因［14-15］。 故，分析ALDH2 基因与疾病的相关性具有积极意义。 本研究结果显示，两组GG、AA、G 检出率比较无明显差异（P＞0.05），AMI 组GA、A 检出率高于非AMI 组（P＜0.05），且Logistic 回归分析，基因型GA、等位基因A 是H 型高血压患者AMI 发病的独立危险因素（P＜0.05），提示基因型GA、等位基因A 可能与AMI 发生密切相关。 当机体ALDH2 酶活性下降时，可使体内儿茶酚胺的释放增加，导致患者出现血压升高、脸红、呕吐等不适，并会减少一氧化氮生成，降低其改善缺血区血供能力，并可使体内氧化应激反应增强，改变血管内皮功能，增加高血压发生可能性，最终可经细胞凋亡、坏死等途径诱发神经细胞损伤、死亡，增加AMI 发生风险。

综上所述，H 型高血压患者发生AMI 与ALDH2基因多态性密切相关，ALDH2 的基因型GA、等位基因A 会增加AMI 发生风险。