12种中草药提取物对杀鲑气单胞菌的抑制效果

张振国，尤宏争，郝 爽，罗 璋，钱 红，冯守明

( 1.天津市动物疫病预防控制中心，天津 300400；2.天津市水产研究所，天津 300221)

虹鳟鱼细菌病主要有弧菌病、细菌性肠炎、疖疮病、柱状病以及细菌性肾病。疖疮病的病原是杀鲑气单胞菌，其宿主较为广泛，鲑科鱼类是疖疮病的易感鱼类，感染后一周左右发病，病原经皮肤入侵，在躯干内形成小的感染病灶，肌肉组织坏死，出血、浆液渗出，患部皮肤软化，形成疖疮，也可经过鳃和口感染，进而侵入内脏，形成病灶。目前，治疗疖疮病主要以使用抗生素为主，长期使用抗生素会导致细菌耐药性、环境污染等问题，不适宜目前的绿色健康养殖的理念。中草药在水产养殖疾病预防和治疗中得到广泛应用，如预防水霉病、维氏气单胞菌、链球菌有较好的效果。

1 材料与方法

1.1 菌株及药品

杀鲑气单胞菌()分离于发病虹鳟鱼体内，黄柏、黄芩、金银花、板蓝根、苦参、大黄、鱼腥草、穿心莲、黄芪、大青叶、黄柏、连翘购自同仁堂药店。

1.2 方法

称取10 g所选药物, 加入超纯水100 mL浸泡0.5 h, 煎煮0.5 h, 不时进行搅拌, 药液用纱布过滤, 滤渣再次煎煮、过滤, 合并药液后,水浴浓缩至50 mL,药液浓度即为200 mg/mL, 5 000 r/min离心，取上清，0.22 μm滤膜过滤除菌。配制好的药物分装于1.5 mL灭菌离心管中, -20 ℃保存备用。

1.3 药物的初筛

采用纸片扩散法，杀鲑气单胞菌(1.0×10CFU/mL)均匀涂布于脑心浸液培养基平板上, 将空白药敏纸片平贴于平板上(4片/平板),每个空白纸滴加5 μL药液， 28 ℃培养24 h,用精度1 mm尺子测量抑菌环的直径, 并记录结果。

1.4 最小抑菌浓度测定

根据初筛结果，选取抑菌效果较好的药物进行最小抑菌浓度测定。在1.5 mL离心管进行，第1管中加入900 μL液体培养基，第2管至第12管分别加入500 μL培养基，第1管加入100 μL药液，混匀后吸出500 μL加入第2管，依次2倍稀释，直至最后1管。每个管加入10 μL菌液，28 ℃振荡培养24 h，观察有无细菌生长。另外，做1个阳性对照(加菌不加药)和1个阴性对照(不加药不加菌)。

2 试验结果

2.1 初筛药敏结果

用12种中草药药液对杀鲑气单胞菌进行药物敏感性测试，参照常用抗生素药物敏感性试验判断标准分析,杀鲑气单胞菌对黄芩和连翘2种药物敏感，其余药物不敏感(见表1)。

表1 12种中草药对杀鲑气单胞菌的抑菌效果

2.2 最小抑菌浓度

依据2.1药敏初步筛选试验结果，按照1.4中的方法测定黄芩和连翘对杀鲑气单胞菌的最小抑菌浓度，结果显示黄芩的最小抑菌浓度为10 mg/mL，连翘的最小抑菌浓度为20 mg/mL。

3 结论

本试验选取了黄柏、黄芩、金银花、板蓝根、苦参、大黄、鱼腥草、穿心莲、黄芪、大青叶、黄柏、连翘12种常见中草药对杀鲑气单胞进行了体外抑制试验，结果显示10种中草药无任何效果，黄芩和连翘抑菌效果较好，可以在试剂生产中应用，而且黄芩和连翘市场价格便宜，可操作性强，具有一定的实用价值。