消肿止痛合剂药效学及急性毒性试验研究*

何志军，何元旭，刘 涛，李盛华，马岁录，何 波

1 甘肃省中医院，甘肃 兰州 730050；2 甘肃中医药大学

消肿止痛合剂由川芎、桃仁、红花、生地黄、赤芍、青皮、三七、木香、当归、泽兰等组成，临床应用多年，不良反应少，疗效确切。本研究考察消肿止痛合剂的急、慢性抗炎作用与急性毒性情况，为其临床应用和进一步开发研究提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物SPF级SD成年大鼠180只，雌雄各半，体质量（200±20）g，由甘肃中医药大学实验动物中心提供，实验动物生产许可证号：SYXK（甘）2016-0012。大鼠自由饮水，饲养于恒湿、恒温（22～25℃）、屏障环境中。

1.2 仪器721型分光光度计（上海第三分析仪器厂）；DGG9123AD烘箱（杭州卓驰仪器有限公司）；BS210S型电子天平（北京赛多利斯天平厂）；不锈钢直尺（河北鼎盛隆华实验仪器有限公司）；4～0慕丝线；剪刀、镊子、灌胃针、注射器（1、5 mL）等。

1.3 试药消肿止痛合剂（甘肃省中医院院内制剂；批号：20051122）；吲哚美辛肠溶片（山西云鹏制药有限公司；国药准字H14020771；规格：25 mg/片）；阿司匹林肠溶片（拜耳医药保健有限公司；国药准字J20171021；规格：100 mg/片）；角叉菜胶（辽宁省药物研究所；批号：BJ56007）；冰醋酸为分析纯，水为去离子水。

1.4 方法[1-3]

1.4.1 急性毒性预实验 取SD大鼠40只，适应7天后随机分为空白组及消肿止痛合剂高、中、低剂量组，每组10只，雌、雄各半；消肿止痛合剂高中、低、剂量组分别灌胃消肿止痛合剂25、12.5、6.25 mL/kg（体质量）1次，空白组给予去离子水，连续观察14天，观察动物中毒或死亡、外观、饮食、行为活动、排泄等情况。14天观察期间除部分大鼠体质量降低、稀便软便外，其余大鼠无死亡，大鼠外观、饮食、行为活动未见异常，无急性毒性反应，无法测出其LD50，因此进行最大给药剂量实验。

1.4.2 最大给药剂量试验 取SPF级SD大鼠40只，适应1周后随机分为空白组和给药组，每组20只，雌雄各10只。给药前禁食不禁水12 h后，给药组灌胃25 mL/kg（体质量）消肿止痛合剂1次，空白组灌胃等体积去离子水1次，用药后最初8 h内每1 h观察1次，之后每天观察3次，持续2周，记录各组大鼠体质量，观察大鼠一般活动及存活情况。见表1。

表1 最大给药剂量实验观察项目

1.4.3 角叉菜胶致大鼠足趾肿胀实验［7-8］取SD大鼠50只，随机分为5组，每组10只，雌雄各半。模型组大鼠灌胃去离子水25 mL/kg（体质量），阿司匹林组、阳性对照组大鼠自实验第3天开始灌胃阿司匹林0.2 g/kg（体质量），每日1次，共3天；消肿止痛合剂高、中、低剂量组大鼠分别灌胃25、12.5、6.25 mL/kg（分别为人用量的30、15、7.5倍），每日1次，连续4天。第5天给予角叉菜胶前先测大鼠左后足跖围（用手术线在左后足跖同部位缠绕2周，剪下，量手术线的长度作为足跖围）。末次给药的同时，大鼠左后足皮下注射1%角叉菜胶0.05 mL，然后每隔1 h测左后足跖围1次，共4次，作为肿胀值，肿胀值减去致炎前足跖围即为肿胀度。

1.4.4 冰醋酸致大鼠疼痛实验［2，9］取SD大鼠50只，随机分为5组，每组10只，雌雄各半。分别为模型组、吲哚美辛组（阳性对照组）及消肿止痛合剂高、中、低剂量组。模型组大鼠灌胃去离子水20 mL/kg（体质量），吲哚美辛组大鼠在实验第5天灌胃吲哚美辛肠溶片1次［15 mg/kg（体质量）］，消肿止痛合剂高、中、低剂量组大鼠分别灌胃消肿止痛合剂25、12.5、6.25 mL/kg（体质量）；连续5天，末次给药后30 min，腹腔注射0.8%冰醋酸0.2 mL，5 min后开始统计大鼠10 min内的扭体次数（腹部收缩内凹、伸展后肢、臀部抬高、蠕行），计算扭体反应抑制率：

抑制率（%）=（模型组平均扭体次数-给药组平均扭体次数）/模型组平均扭体次数×100%

1.4.5 棉球肉芽肿实验［10］选取体质量合格的SD大鼠50只，随机分成5组，每组10只。分别为模型组、地塞米松组（阳性对照组）及消肿止痛合剂低、中、高剂量组。大鼠腹腔注射10%水合氯醛［0.35 mL/kg（体质量）］麻醉后左腹股沟处剃毛并用碘伏消毒，各切开皮肤1 cm小口并用眼科镊植入同等大小的高温高压灭菌棉球（5 mg/个，用10 g/L的注射用青霉素钠浸泡，烘干），缝合皮肤，建立慢性炎症模型。给药方式：模型组大鼠灌胃去离子水25 mL，每日1次，连续给药10天；消肿止痛合剂高、中、低剂量组大鼠分别灌胃消肿止痛合剂25、12.5、6.25 mL，每日1次，先连续给药3天，于第3天给药后造模，造模后再连续给药7天；地塞米松组于造模后第4天开始灌胃地塞米松1 mL/kg（体质量），每日1次，共给药4天。造模后第8天，打开原切口，将棉球连同周围结缔组织取出，剔除脂肪组织，放烘箱中60℃烘干20 h至恒重，精密称取质量，计算肉芽肿抑制率。

肉芽肿质量（mg）=棉球肉芽干重-棉球原重量

肉芽肿胀抑制率（%）=（模型组肉芽肿平均质量-给药组肉芽肿平均质量）/模型组肉芽肿平均质量×100%

1.5 统计学方法采用SPSS 22.0软件分析数据，计量资料以±s表示，采用单因素方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 大鼠急性毒性实验给药后观察14天，除部分大鼠体质量降低、稀便软便外，其余大鼠无死亡，小鼠外观、饮食、行为活动未见异常，无急性毒性反应，最终存活大鼠给药14天后逐只处死、解剖，并肉眼观察肝、心、肺、脾、肾、子宫、卵巢、前列腺、精囊、睾丸、肠胃等重要脏器，未见颜色、形态异常，无出血点或其他病理改变，胃黏膜颜色红润，无出血点或溃疡，尸检无异常。各组大鼠体质量变化情况见表2。

表2 各组大鼠体质量变化情况（±s）

表2 各组大鼠体质量变化情况（±s）

注：与空白组比较，*表示P＜0.05

组别空白组消肿止痛合剂组鼠数20 20剂量（mL/kg）38 25第1天体质量（g）200±2 200±2第3天体质量（g）213±3 203±5*第7天体质量（g）218±4 210±3*第11天体质量（g）223±3 216±4*第14天体质量（g）229±5 221±3*增重（g）29±3 21±2

2.2 大鼠足趾肿胀情况与模型组比较，阿司匹林组及消肿止痛合剂高、中、低剂量组大鼠足趾肿胀度降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。与阿司匹林组相比较，消肿止痛合剂高剂量组差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表3 各组大鼠足趾肿胀度比较（±s）

表3 各组大鼠足趾肿胀度比较（±s）

注：与模型组比较，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01；与阿司匹林组比较，#表示P＜0.05

组别模型组阿司匹林组消肿止痛合剂低剂量组消肿止痛合剂中剂量组消肿止痛合剂高剂量组鼠数10 10 10 10 10剂量（mL/kg）10 0.20 6.25 12.50 25.00致炎后不同时间足肿胀度（mm）1 h 3.95±0.11 3.37±0.10**3.55±0.11**3.25±0.12**2.95±0.11**#2 h 4.75±0.17 4.05±0.18**4.25±0.17**3.95±0.19**3.75±0.18**#3 h 5.25±0.18 4.45±0.17**4.65±0.19**4.15±0.18**3.85±0.19**#4 h 4.55±0.17 4.30±0.20**4.45±0.19*4.05±0.18**3.80±0.21**#

2.3 大鼠扭体反应情况与模型组比较，吲哚美辛组及消肿止痛合剂各剂量组大鼠扭体反应降低，差异有统计学意义（P＜0.01）。表明消肿止痛合剂能抑制冰醋酸引起的大鼠扭体反应，但抑制率低于吲哚美辛组。见表4。

表4 各组大鼠扭体反应情况（±s）

表4 各组大鼠扭体反应情况（±s）

注：与模型组比较，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01；“-”表示无数据

组别模型组吲哚美辛组消肿止痛合剂低剂量组消肿止痛合剂中剂量组消肿止痛合剂高剂量组鼠数10 10 10 10 10剂量（mL/kg）10 12.50 6.25 12.50 25.00 10 min扭体次数（次）31.23±10.02 15.27±6.47**20.83±9.11**19.33±8.47**17.61±5.93**抑制率（%）-51.1 33.3 38.1 43.6

2.4 大鼠棉球肉芽肿情况与模型组比较，地塞米松组及消肿止痛合剂高、中、低剂量组大鼠棉球肉芽肿质量降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。表明消肿止痛合剂能抑制大鼠棉球肉芽肿形成，但抑制率低于地塞米松组。见表5。

表5 各组大鼠棉球肉芽肿形成情况（±s）

表5 各组大鼠棉球肉芽肿形成情况（±s）

注：与模型组比较，*表示P＜0．05，**表示P＜0.01“-”表示无数据

组别模型组地塞米松组消肿止痛合剂低剂量组消肿止痛合剂中剂量组消肿止痛合剂高剂量组鼠数10 10 10 10 10剂量（mL/kg）10 1 6.25 12.5 25肉芽肿质量（mg）25.95±2.51 18.27±1.47**22.62±2.24*21.76±2.87**20.07±2.02**抑制率（%）-29.6 12.8 16.1 22.7

3 讨论

消肿止痛合剂由临床经验方加工制成。方中当归、川芎为君药，活血祛瘀，消肿止痛；桃仁、红花生新血、破瘀血，共为臣药；三七消肿、镇痛、化瘀；青皮、木香行气散结止痛；生地黄、赤芍凉血消瘀。损伤早期组织处痉挛疼痛，有渗出、水肿等病理变化，故配泽兰消散痈肿，减少渗出，促使肿胀消退，诸药合用，共奏消肿止痛、活血化瘀之功［9-11］。

本研究通过大鼠经口急性毒性实验观察消肿止痛合剂的用药安全性。结果除部分大鼠体质量降低及排泄软便稀便外，其余无异常急性毒性反应，无法测出其LD50。采用角叉菜胶致大鼠足肿胀和大鼠棉球肉芽肿实验及冰醋酸致疼痛法考察消肿止痛合剂的急、慢性抗炎、镇痛作用［12］。消肿止痛合剂高、中、低剂量组可降低模型大鼠足跖肿胀度和棉球肉芽肿质量，降低大鼠扭体反应次数，说明该药有急、慢性抗炎及镇痛作用，前期相关实验研究表明，消肿止痛合剂能促进皮瓣血管再生，减轻皮瓣缺血再灌注损伤，具有促进血管内皮细胞再生的作用［13］，但对其深入的药效学研究，长期毒性实验及其抗炎、镇痛机制有待进一步研究。