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泛素特异性蛋白酶调控骨重建的研究进展

2022-08-04张国锐伍颖颖熊毅

口腔疾病防治 2022年11期
关键词:骨细胞成骨细胞分化

骨是人体内最重要的器官之一,具有保护器官、支持肌肉运动等功能。骨需要经过不断地重建以维持其结构和功能的完整性。骨重建包括骨吸收与骨形成,分别由破骨细胞和成骨细胞协同完成。骨重建的过程受到多种因素共同调节,以维持成骨细胞与破骨细胞之间的耦联平衡,实现骨稳态

。越来越多的研究证明,泛素特异性蛋白酶(ubiquitin-specific proteases,USPs)在调节成骨细胞和破骨细胞的发育和功能方面起重要作用

。本文就USPs 对骨重建的影响及其作用机制的研究进展作一综述。

1 泛素依赖的蛋白质水解系统

泛素化修饰是蛋白质降解的主要途径之一。蛋白质的泛素化过程是泛素激活酶E1、泛素结合酶E2、泛素连接酶E3 协同作用的级联催化反应。在ATP 的参与下,泛素被E1 激活并转运至E2,E3与载有泛素的E2 以及靶蛋白相互作用,介导泛素连接到靶蛋白,引导蛋白质进入蛋白酶体被降解。级联反应中的任意一个环节都会影响到蛋白的泛素化过程。其中,E3 是该级联反应的关键酶,决定了反应速率及底物的特异性

,在调节骨稳态方面,也起到重要作用

泛素化修饰的可逆性是由去泛素化酶实现的。去泛素化酶通过去除靶蛋白上的泛素分子,调节蛋白质的功能和稳定性

。迄今为止,人类基因组可编码100 余种去泛素化酶,根据其催化结构域的不同,可分为两大类共七个亚家族,其中USPs、泛素羧基末端水解酶(ubiquitin C-terminal hydrolases,UCHs)、卵巢肿瘤相关蛋白酶(ovarian tumor proteases,OTUs)、MJD 结构域蛋白酶家族(Machado-Joseph disease protein domain proteases,MJDs/Josephins)、单核细胞趋化蛋白诱导的蛋白酶家族(mococyte chemotactic protein induced protein,MCPIPs)和锌指含泛素肽酶1(zinc finger containing ubiquitin peptidase 1, ZUP1)属于半胱氨酸蛋白酶;含JAB1/PAB1/MPN 结构域的金属蛋白酶家族(JAB1/PAB1/MPN domain - containing metallo - enzymes,JAMMs)属于金属蛋白酶

2 USPs 与骨重建

2.1 USPs 对成骨作用的影响

研究表明,USP4 可通过多种机制影响成骨分化过程

。Wnt/β-catenin 经典信号通路在成骨细胞分化的早期阶段具有重要意义。Dishevelled(Dvl)蛋白是Wnt 通路中的重要成分,泛素化的Dvl蛋白可激活下游信号分子,稳定β-catenin 蛋白

。Zhou 等

发现,USP4 通过水解Dvl 蛋白上多泛素链,抑制Wnt 经典信号通路,降低成骨分化能力。此外,转化生长因子β(transforming growth factor β,TGF-β)信号通路在调节成骨分化以及骨的形成中也发挥重要作用

。TGF-β 在与细胞膜表面受体结合后,使受体调节的SMAD 蛋白(R-SMAD)磷酸化,活化的R-SMAD 与通用型的SMAD4 蛋白形成异多聚体,该复合物被转运至细胞核中调控靶基因表达

。研究表明,USP4 可作为SMAD4 蛋白的去泛素化酶,在TGF-β 信号通路中发挥正调控作用,促进间充质干细胞的增殖与分化过程

USP15 可抑制β-catenin 蛋白的泛素化降解,加强Wnt 信号通路,对成骨细胞的发育过程起正向调控作用

。此外,Herhaus 等

研究发现,小鼠成肌细胞中USP15 的缺失会降低其骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)诱导的成骨分化能力。USP15 可作为BMP 受体和SMAD 等蛋白的去泛素化酶,促进BMP 诱导的SMAD 蛋白的磷酸化过程。因此USP15 基因的缺失会抑制BMP 诱导的SMAD 磷酸化和BMP 靶基因的转录,降低成肌细胞中BMP 诱导的成骨分化能力。

USP15 和USP34 不仅影响成骨细胞分化和发育,还可通过调节NF-κB 信号通路影响骨吸收作用。USP15 和USP34 可作为IκBα 蛋白的去泛素化酶,提高IκBα 蛋白的稳定性,抑制NF-κB 信号通路和破骨分化过程

。此外,Li 等

指出,USP34 和USP15 在功能上并不完全重叠,USP15 并不足以弥补USP34 缺失时带来的失衡。USP15 与USP34 在骨形成和骨吸收中都有调节作用,由此推测,二者可能成为骨重建过程的重要调节因子。

与USP7 类似,USP34 也可通过控制Axin 蛋白的含量来调节Wnt 信号通路,但其对成骨作用的影响还有待进一步的研究

。Guo 等

通过敲除小鼠USP34 基因后发现,小鼠MSC 的成骨分化能力下降,出现骨量减少的结果,USP34 可作为去泛素化酶稳定SMAD1 和RUNX2 蛋白,调控成骨分化和骨形成过程。

综上,USPs 主要通过作用于Wnt 信号通路中的关键因子影响成骨作用。除了Wnt 信号通路,TGF-β/BMP 等信号通路在调节成骨分化以及骨的形成中也发挥着重要作用,但USPs 通过这些机制影响骨重建的研究相对较少。研究显示,USP9x 与USP11 都可参与调控TGF/BMP 信号通路,这两种USPs 可能通过该途径影响成骨作用

在Wnt/β-catenin 经典信号通路中,SCF(Skp1-Cullin1-F-box)复合体作为一种E3 泛素连接酶,参与β-catenin 蛋白泛素化降解过程

。Baek 等

研究证明,USP53 可与SCF 复合体连接,抑制βcatenin 蛋白的泛素化过程,促进Wnt 信号通路。当提高USP53 的表达时,间充质干细胞的成骨分化能力也随之增强。

要说白丽筠对我的诱惑,可真不小。首先她的漂亮就令我倾倒,其次她的财富使我一旦选择了她,就可免除半辈子的奋斗,可以说是提前进入了小康。这两条对我都有很强的魅力。可是,所谓“成也萧何败也萧何”,正是这两条优势,成了白丽筠嫁人的负面得分。因为美丽,众人关注,便对她的恶闻广为传播;而一个年轻未嫁的女子,竟有房子车子,这件事更容易使人联想到烟花女子的暧昧与不干净。

4)与社交网络的互动不够密切,不够关注分享的强大功能,让个人的AR有趣体验只是成为个人的体验,而无法进行广泛的传播,与当前强大的互联网及其相关思维格格不入。

研究证明,USP18(UBP43)可降低小鼠的破骨分化能力。干扰素刺激因子(IFN-stimulated gene,ISG)是一种类泛素蛋白,蛋白质的ISG 化与泛素化类似,通过酶级联反应进行共价修饰

。USP18 可作为ISG 修饰系统的解聚酶,负向调节IFN 信号通路,从而影响细胞内的ISG 化过程

。在敲除USP18 蛋白基因的小鼠体内,IFN 信号增强,破骨相关的细胞因子增加,导致RANKL 介导的破骨分化能力增强,骨量减少

从图9中可以看出,n相 同的情况下,σ随着的增大近似呈线性增长。n 分别为3、4、6、8时,-=55W/cm2时的最大热应力分别为=5W/cm2时最大热应力的5.72倍、5.66倍、5.52倍和5.51倍,分别增大了0.331、0.291、0.251和0.23Gpa。即当热流密度增大11倍时,各热沉的最大热应力增大5.5倍以上,增大显著。

2.2 USP 对破骨作用的影响

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甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)在激活成骨细胞与促进成骨方面具有积极作用

。研究表明,PTH 诱导成骨细胞增殖的机制与USP2(UBP41)表达量上调有关

。USP2 作为PTH 受体PTH1R 的去泛素化酶,可抑制PTH1R 的泛素化降解过程。PTH1-34 诱导的小鼠成骨细胞的增殖与USP2 密不可分。

USPs 除了对成骨细胞起作用,还可影响破骨细胞的分化和功能从而调节骨重建。破骨细胞分化过程主要受到核因子κB 受体活化因子配体(receptor activator of nuclear kappa B ligand, RANKL)的调控。在RANKL 参与的信号通路中,RANKL 通过激活NF-κB 信号通路引发下游级联反应,促进破骨细胞特异基因表达。在静息状态下的NF-κB 经典信号通路中,NF-κB 与抑制性IκBα 蛋白形成复合物,阻碍NF-κB 转移至细胞核发挥功能。IκB 激酶(IκB-kinases,IKK)可使IκBα 蛋白磷酸化并从NF-κB 上脱落,激活NF-κB 通路。肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6)上的多聚泛素链可促进其与IKK 的相互作用,激活IKK 蛋白,进而激活NF-κB信号通路

。圆柱瘤基因(cylindromatosis,CYLD)作为USPs,可降低TRAF6 蛋白的泛素化水平,抑制RANK 介导的信号通路,抑制破骨细胞分化过程[23]。

USP7 又称疱疹病毒相关性泛素特异性蛋白酶(herpes virus-associated ubiquitin specific protease,HAUSP),在人脂肪干细胞(human adipose-derived stem cells,hASCs)成骨分化能力方面具有促进作用。Tang 等

研究发现,USP7 的表达与hASCs 和骨髓间充质干细胞的成骨分化水平成正相关,敲除USP7 基因会抑制小鼠体内的骨生成过程。此外,USP7 还 参 与 调 节Wnt/β-catenin 经 典 信 号 通路

。在缺乏Wnt 信号激活时,β-catenin 蛋白连接到由轴蛋白(Axin)、结直肠腺瘤息肉蛋白与糖原合成酶激酶(glycogen synthetase kinase3,GSK3)形成的复合体,在酪氨酸蛋白激酶1 和GSK3 的作用下磷酸化,进而泛素化被蛋白酶体降解

。 USP7 作为Axin 蛋白去泛素化酶,可提高Axin 蛋白含量,抑制Wnt 通路诱导的MSC 成骨分化过程

。Runt 相关转录因子(runt-related transcription factor 2,RUNX2)是成骨分化以及骨生成过程中必不可少的转录因子

。Kim 等

研究发现,被酪氨酸蛋白激酶2 磷酸化后的RUNX2 会募集USP7,避免RUNX2 蛋白被泛素依赖的蛋白酶体降解,进而促进成骨作用。

综上,USPs 影响破骨作用与RANKL 参与的信号通路有密切关系。相较于USPs 对成骨作用的研究,对于骨吸收的研究相对较少且作用机制类似。除RANKL 外,巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stimulating factor,M-CSF)也是破骨细胞分化过程中必不可少的因子之一。

2.3 USPs 对骨重建调控的其他影响

除了影响骨重建中的骨吸收与骨形成作用,USPs 对骨的影响还体现在其他方面。Nguyen 等

发现,受到机械刺激后,在前列腺素及其受体的作用下,胫骨中的CYLD 蛋白含量下降,导致骨细胞中TGF-β 信号通路受到抑制,从而抑制TGF-β 介导的SMAD2/3 蛋白的磷酸化过程。CYLD 对于机械负荷介导的SMAD2/3 蛋白的抑制和负荷诱导的骨形成过程都是必不可少的。邹浩等

研究发现,在循环牵张力作用下人牙周膜干细胞的成骨分化能力增强的过程中,细胞内的USP12 表达量上调,这提示USP12 与人牙周膜干细胞的成骨分化呈正相关。

在种植体骨结合方面,多项研究揭示USPs 发挥了重要作用。在磨损颗粒引起的骨溶解中,吞噬细胞的激活与促炎因子的释放受到NF-κB 和磷脂 酰 肌 醇3 激 酶(phosphatidylinositol-3-kinases,PI3K)-蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/Akt)信号通路的调节。NLRC5(NOD-like receptor family CARD domain containing 5)是一种模式识别受体,可通过抑制IKK 的磷酸化抑制NF-κB 通路,对PI3K/AKT 通路也具有负向调节作用

。Fang 等

研究指出,USP14 作为NLRC5 的去泛素化酶,可提高NLRC5 对NF-κB 和PI3K/AKT 信号通路的抑制作用,减弱钛颗粒诱导的小鼠骨溶解过程。Xue等

构建了小鼠股骨及上颌骨的种植体模型,通过体内实验证实USP34 可通过提高SMAD 和RUNX2 蛋白的稳定性促进BMP 信号通路,而在敲除间充质干细胞内USP34 基因的小鼠体内,种植体与骨结合过程受到明显的抑制。

3 小 结

综上所述,调节骨吸收与骨形成的动态平衡是维持骨稳态的关键。泛素-蛋白酶体系统在调节骨重建中起到了重要的作用,而USPs 是该系统的主要组成部分。近年来,USPs 对骨重建的调节作用不断被发现。但此前的研究更多地侧重于成骨分化与破骨分化过程,除了成骨与破骨细胞,骨细胞在维持骨稳态中也起到了关键作用,但关于USPs 影响骨细胞的研究并不多见。因此,未来的研究应寻找USPs 对骨重建是否具有更多的调节作用,以及其调节作用的具体机制,为临床开发USPs靶向药物,治疗骨骼疾病提供新的思路与途径。

Zhang GR wrote the article. Wu YY, Xiong Y revised the article. All authors read and approved the final manuscript as submitted.

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