炎症环境下敲低SHP2 对人牙周膜干细胞增殖和成骨分化的影响

牙周炎是细菌感染引起的慢性炎症性疾病，可激活宿主的免疫反应，破坏牙齿的支持组织，最终导致牙齿脱落

。牙周炎的现有治疗方法旨在去除菌斑和控制局部炎症，然而恢复已经丧失的牙周组织依旧是一个挑战。基于干细胞的组织工程策略为牙周再生带来新的希望，人牙周膜干细胞（human periodontal ligament stem cells, hPDLSCs）是形成牙槽骨的理想细胞来源，但局部炎症微环境抑制了hPDLSCs 成骨分化能力，因此明确hPDLSCs 的成骨分化机制，尤其是在炎症环境下的成骨分化，对牙周炎治疗至关重要。含有Src 同源结构域2 的蛋白酪氨酸磷酸酶2（Src homology-2 domain containing protein tyrosine phosphatase-2,SHP2）是一种由非受体型酪氨酸蛋白磷酸酶11（tyrosineprotein phosphatase non-receptor type 11，PTPN11）基因编码，并广泛表达的非受体蛋白酪氨酸磷酸酶（protein tyrosine phosphatase，PTP）。越来越多的证据表明，SHP2 在骨骼发育和形成中起着至关重要的作用，同时SHP2 与骨髓间充质干细胞（bone mesenchymal stem cells, BMSCs）的体外成骨和体内骨形成密切相关

。但目前SHP2 对干细胞的骨形成作用尚有争议，SHP2 在不同环境以及不同的细胞可能对成骨有着不同作用

。SHP2 与炎症反应同样关系密切。SHP2 与干扰素-β 的产生

以及促炎细胞因子和趋化因子（包括IL-1β）的产生密切相关

。SHP2 也被证实可能在不同的炎症通路中表现出正或负调节功能。由于SHP2 同时参与成骨和炎症过程，笔者猜测SHP2 可能参与调节hPDLSCs 的成骨分化。SHP2 目前在炎症条件下是否调节hPDLSCs 的成骨分化以及通过何种方式调节，目前尚无报道。本研究通过慢病毒感染敲低hPDLSCs 中的SHP2 基因，旨在探讨敲低SHP2 对炎症环境下hPDLSCs 增殖和成骨分化的影响，并研究相关机制。

1 材料和方法

1.1 主要材料及仪器

hPDLSCs（Sciencell，美国）；SHP2 shRNA 慢病毒表达载体［pSLenti-U6-shRNA（PTPN11）-CMVEGFP-F2A-Puro-WPRE，和元生物，中国］；胎牛血清（Gibco，美国）；青链霉素（Hyclone，美国）；高糖DMEM 培养基（Gibco，美国）；PBS（Gibco，美国）；甲醇（CNW，德国)；蛋白酶抑制剂（碧云天，中国）；RIPA 裂解液（碧云天，中国）；转膜缓冲液（苏州新赛美生物科技有限公司，中国）；电泳缓冲液（南京金斯瑞生物科技有限公司，中国）；TBS 缓冲液（上海生物工程有限公司，中国）；蛋白酶抑制剂（碧云天，中国）；CCK-8 试剂盒（Dojindo，日本）；碱性磷酸酶染色试剂盒（碧云天，中国）；茜素红S（Sigma，美国）；氯化十六烷基吡啶（Sigma，美国）；COL-1 抗体（1∶1 000，Abcam，美国)；RUNX2 抗体（1∶1 000，Abcam，美国)；ALP 抗体（1∶1 000，proteintech，美国）；GAPDH 抗体（1∶5 000，Proteintech，美国)；核因子κB（nuclear factor kappa-B，NF-κB）抗体（p-p65、p65 和IκBα，1∶1 000，Affinity Biosciences，美国）；MAPK 抗体（p-ERK、ERK、p-p38、p-38、p-JNK 和JNK，1∶1 000，Cell Signaling Technology，美国）；兔源及鼠源二抗（1∶5 000, Proteintech，英国）；ECL 试剂盒（苏州新赛美生物科技有限公司，中国）；总RNA 提取试剂盒（诺唯赞生物，中国）；HiScript ⅢRT SuperMix for qPCR（+gDNA wiper）（诺唯赞生物，中国）；ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix（诺唯赞生物，中国）；多聚甲醛（博士德生物，中国）；地塞米松（Sigma，美国）；β-甘油磷酸钠（Sigma，美国）；抗败血酸（Sigma，美国）。

1.2 实验方法

1.2.1 细胞培养 按照低糖DMEM 培养基+10%胎牛血清+1%双抗（青霉素/链霉素）配置完全培养基用于PDLSCs 的培养。成骨诱导液为完全培养基额外添加成骨诱导成分（50 μM抗坏血酸,10 mM β-磷酸甘油和100 nM 地塞米松）。根据预实验及既往研究

，使用10 ng/mL 肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）和10 ng/mL 白细胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）刺激hPDLSCs 创建炎症微环境。

1.2.2 SHP2 shRNA 慢病毒载体的构建 SHP2 shRNA 慢病毒载体由和元生物公司构建，根据Human PTPN11 基因的转录本设计siRNA 靶点，安排引物合成。将单链的引物退火成双链oligo 序列，连接入双酶切线性化的RNA 干扰载体，替换原有ccdB 毒性基因。菌落PCR 筛选转化子，筛选的阳性克隆进行测序验证。测序验证正确的克隆，进行高纯度质粒抽提。

1.2.3 重组质粒的包装和滴度测定 将构建的SHP2 shRNA 慢病毒载体和包装质粒共转染进人肾上皮细胞系HEK 293T 细胞，换液、培养后，收集细胞上清液，进一步离心获得病毒浓缩液。使用有限稀释法稀释病毒浓缩液，用不同浓度梯度感染HEK 293T 细胞，荧光显微镜下观察各孔荧光细胞数量，结合稀释倍数计算病毒滴度。

11月28日，欧洲委员会宣布其已根据《欧盟并购制度》就日本电产集团（尼得科）计划收购美国家电制造商惠而浦旗下压缩机业务恩布拉科开展深入调查。尼得科预计将于2019年上半年完成对恩布拉科的收购。

1.2.5 CCK-8 检测细胞增殖 在96 孔板中加入100 μL 不同处理后的细胞悬液（5×10

个/孔），置于培养箱（37 ℃，5% CO

）中孵育24 h，使细胞贴壁。在培养箱中孵育适当的时间（1、3、5、7 d）后每孔加入10 μL CCK-8 溶液，孵育1 h 后酶标仪测量450 nm 处的吸光度并绘制生长曲线。

学生内在原因一方面体现在其自我防护意识的薄弱，另一方面是由于其心理特点的复杂化和多样化。自我防护意识受到后天环境和教育的影响，若在就学期间缺少相应的教育，接触社会少，思辨能力差，很容易受到外界的影响改变其初心。还有很多学生在宿舍里乱用违章电器，缺少防火意识，一旦出现突发情况就无法从容应对等。心理特点的复杂和多样体现为在学习压力、生活压力或周边环境的影响下，很多学生会存在或轻或重的心理问题，承受能力不强，遇到困难就容易选择极端的处理方式。这些心理问题若不能及时解决，会严重影响学生的身心健康［3］。

1.2.6 碱性磷酸酶（alkaline phosphatase , ALP）染色及ALP 活性检测 hPDLSCs 成骨诱导3、7 d 后，去除孔板内的培养基，用PBS 洗涤细胞样品5 次，每次5 min。加入适量染色工作液，将样品置于室温下，避光孵育30 min。去除染色工作液，蒸馏水洗涤2 次，终止显色反应。

慢病毒感染HEK 293T 细胞72 h 后通过倒置荧光显微镜观察到绿色荧光（图2），测得SHP2 shRNA 重组慢病毒的滴度为2.9×10

TU/mL，表明转染成功。

ALP 在钙化过程中作为第一批功能基因，在骨骼发育早期表达。在骨矿化过程中，ALP 增加局部无机磷的浓度，同时可水解抑制矿化结晶的焦磷酸盐，最终促进羟基磷灰石的形成。COL-1 是骨骼中有机细胞外基质中最丰富的成分，其主要功能是和其他胶原蛋白一同充当骨细胞的支架，并起着支撑作用。因此ALP、COL-1 在早期成骨中意义重大，也是经典的早期成骨指标

。本实验证明敲低SHP2 可促进ALP、COL-1 的表达，表明SHP2参与了上述早期矿化过程。

1.2.7 茜素红染色（alizarin red staining, ARS）及钙离子浓度分析 hPDLSCs 成骨培养21 d 后，用4%多聚甲醛固定15 min 并用茜素红S 染色液在室温下染色30 min，显微镜下观察并拍照。每孔加入1 mL 10%氯化十六烷基吡啶，在室温下充分溶解。使用酶标仪测量562 nm 处的吸光度作为钙结节的半定量分析结果。

成骨诱导3 d 时，与对照组相比，SHP2 敲低组ALP、COL-1 基因表达均有增高（

= 3.628，

=0.022；

= 11.010，

＜0.001），而RUNX2 和OCN 基因表达无明显差异（图4a）；在成骨培养3 d 后SHP2 敲低组ALP 活性高于对照组（

= 5.423，

=0.032）（图4b）。在成骨诱导7 d 时，SHP2 敲低后相较对照组，只有COL-1 基因表达增高（

=4.402，

=0.022），其他基因均无明显变化（图4c），而成骨诱导7 d 后的ALP 活性检测显示，SHP2 敲低后ALP 活性提高（

= 6.947，

= 0.020）（图4d）。在成骨诱导14 d 后，SHP2 敲低组的COL-1 表达增高（

=13.32，

＜0.001），但RUNX2，ALP 的表达无明显变化（图4e、4f）。ALP 染色结果显示，与诱导3 d 相比，诱导7 d 的对照组及SHP2 敲低组染色均加深，说明随着时间增加ALP 在细胞质中进一步积累。此外，在成骨培养3 d 后SHP2 敲低组ALP 染色深于对照组，但成骨诱导7 d 后两组ALP 的着色深度无明显差异（图4g、4h）。经ARS 染色实验证明SHP2 敲低组的着色及钙结节的形成量与对照组无明显差异（图4i）。

在培养1 d 后细胞增殖暂无明显改变，而3、5、7 d 后，SHP2 敲低组细胞活力低于对照组（

＜0.05, 图3i）。提示SHP2 对hPDLSCs 的增殖有一定的潜在作用。炎症条件下，SHP2 敲低对hPDLSCs的增殖活力并无明显影响（

＞0.05）。

1.2.9 蛋白提取以及Western blot 实验 提取总蛋白并按BCA 蛋白浓度测定试剂盒说明书测定蛋白浓度。根据BCA 所测得蛋白浓度，上样不同体积的蛋白。蛋白分离后转移至PVDF 膜，并置入封闭液内，室温下摇床封闭10 min。随后4 ℃过夜孵育一抗。TBST 摇床洗涤3 次，10 min/次。按照一抗的源性选择不同的兔源或鼠源二抗，室温孵育1 h，通过化学成像发光仪曝光。用Image J 软件进行灰度值分析。

1.3 统计学分析

采用GraphPad Prism 9.0 软件进行统计学分析，采用Shapiro-Wilk 法进行正态性检验，数据用均数±标准差表示，两样本比较采用

检验。

＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 SHP2 shRNA 慢病毒载体的测序结果

经过比对，重组克隆中插入的片段序列与选用的oligo 序列完全一致（图1），表明SHP2 shRNA慢病毒载体构建成功。

2.2 慢病毒原液滴度测定结果

hPDLSCs 成骨诱导3、7 d 后，去除孔板内的培养基，用PBS 洗涤细胞样品3 次，每次5 min。使用细胞裂解液裂解细胞。每毫克蛋白样品每分钟生产的对硝基苯酚毫摩尔数作为ALP 活性进行统计分析。

2.3 建立体外炎症模型

使用10 ng/mL TNF-α、IL-1β 刺激hPDLSCs 24 h后，通过RT-qPCR 检测炎症因子IL-6、IL-1β、IL-8和TNF-α 基因转录水平表达。如图3a 所示，TNF-α和IL-1β 刺激hPDLSCs 的炎症组IL-6（

=14.84，

＜0.001）、IL-1β（

= 130，

＜0.001）、IL-8（

= 26.751，

＜0.001）和TNF-α（

= 6.775，

=0.003）基因表达水平均明显提高。诱导7 d 后，RT-qPCR 显示炎症刺激组成骨相关基因COL-1（

= 68.42，

＜0.001）、RUNX2（

= 5.359，

= 0.006）的表达降低（图3b）。成骨诱导7 d 后，炎症组hPDLSCs 的ALP 染色浅于对照组，ALP 活性也更低（

= 22.65，

= 0.002）（图3c、3d）。成骨诱导21 d 后，ARS 染色同样显示相似结果，即炎症状态下hPDLSCs 的钙结节矿化形成远少于对照组（

= 23.42，

＜0.001）（图3e）。上述结果均证明炎症微环境会损伤hPDLSCs 成骨分化潜力。

2.4 SHP2 敲低效率的检测

SHP2 敲低组和空载病毒组细胞在荧光显微镜下均显示出明显的绿色荧光（图3f），提示病毒转染成功。通过Western blot 及RT-qPCR 检测发现，SHP2 敲低组的SHP2 蛋白及基因的表达显著降低（

= 9.739，

＜0.001；

= 8.474，

＜0.001），并且与空载病毒组相比，SHP2 表达量降低达70%以上（图3g、3h）。

2.5 敲低SHP2 对hPDLSCs 增殖活力的影响

1.2.8 RT-qPCR 使用Vazyme RNA extraction kit提取总RNA，用HiScript ⅢRT SuperMix for qPCR（+gDNA wiper）反转录试剂盒对RNA 进行逆转录，获得cDNA，以cDNA 为模板，用实时荧光定量PCR仪扩增。引物序列见表1。采用2

相对定量法分析目标基因的相对表达水平。

2.6 正常环境下敲低SHP2 对hPDLSCs 成骨分化的影响

女性盆底支持系统是由盆底肌肉以及韧带、筋膜共同构成，对于维持女性盆底器官正常功能以及解剖位置存在重要的意义[1]。在女性盆底肌肉群的承重结构当中，耻骨直肠肌是重要部分，耻骨直肠肌出现损伤会导致女性出现盆底器官脱垂[2]。而在女性耻骨直肠肌损伤的诱发因素当中，经阴道分娩被视为主要原因之一，且在相关研究的数据现实中，表示经阴道分娩的初产妇，出现肛提肌损伤的几率在10%～35%之间，且损伤部位多位于耻骨直肠肌骨盆内侧壁附着部位[3]。我院选择112例经阴道分娩女性，让其分别接受经阴道二维腔内超声与阴道三维超声检查，对其耻骨直肠肌损伤情况进行观察，现作如下报告。

2.7 炎症环境下敲低SHP2 对hPDLSCs 成骨分化的影响

成骨诱导3 d 时，相较于对照组，SHP2 敲低组的ALP（

= 6.823，

= 0.006）、COL-1（

= 8.249，

=0.004）、RUNX2（

= 4.589，

= 0.019）基因表达增高，OCN 作为晚期成骨指标在3 d 时并未表现出明显差异（图5a）；SHP2 敲低后，hPDLSCs 的ALP 活性升高（

= 5.064，

= 0.037）（图5b）。成骨诱导7 d后，与对照组相比，SHP2 敲低后ALP（

= 6.987，

＜0.001）、COL-1（

= 8.992，

＜0.001）、RUNX（

=3.751，

= 0.033）、OCN（

= 4.737，

= 0.018）的表达增高（图5c）。成骨诱导7 d 的ALP 活性升高，与3 d 的结果相同（

= 4.760，

= 0.041）（图5d）。在成骨诱导14 d 后，与对照组相比，SHP2 敲低组的COL-1（

= 8.767，

＜0.001）、ALP（

= 3.418，

=0.027）、RUNX2（

=8.224，

=0.004）的蛋白表达均增高，这与RT-qPCR 结果保持一致（图5e、5f）。从ALP 染色结果上可见，成骨诱导3 d 和7 d 的SHP2敲低组着色均深于对照组（图5g、5h）。SHP2 敲低组经ARS 染色后，着色深度及钙结节的形成量高于对照组（

=87.88，

＜0.001）（图5i）。

爱国主义教育基地资源融入“纲要”课程教学，需要高校教师结合新的教学内容，加大教学改革力度，以丰富多样的教学方法深化学生对爱国主义教育基地的认识和对中国近现代史的理解。

2.8 炎症环境下敲低SHP2 通过抑制MAPK/NF-κB通路促进hPDLSCs 成骨分化

与非炎症组相比，炎症组p-p65 的水平增高（

=36.34，

＜0.001），IκBα水平降低（

=12.79，

＜0.001），说明炎症因子（TNF-α 和IL-1β）刺激30 min时已能够激活NF-κB 通路；而炎症环境下，敲低SHP2 可下调p-p65（

= 12.17，

＜0.001），并且提高IκBα的表达水平（

=8.979，

＜0.001）（图6a）。如图6b所示，与非炎症组相比，炎症组p-p38和p-JNK 的表达增高（

= 67.30，

＜0.001；

= 9.712，

＜0.001）；而炎症环境下，敲低SHP2基因可抑制p-p38和p-JNK的表达（

=25.99，

＜0.001；

=12.79，

=0.002）。

1.2.4 慢病毒转染 以5×10

个/mL 的密度将hPDLSCs 接种于6 孔培养板中，待细胞融合度达到60%～80%之间时加入慢病毒感染（MOI=20）。培养箱中培养4 h 后观察细胞状态，将无血清培养基更换为完全培养基，继续培养。细胞培养72 h 后在荧光显微镜下观察转染效率。加入嘌呤霉素培养筛选，经增殖传代后，通过RT-qPCR 、Western blot验证敲低效率，用于后续实验。SHP2 低表达慢病毒（shSHP2）的靶序列为5′-ACACTGGTGATTACTATGA-3′。敲低SHP2 的hPDLSCs 组用shSHP2 表示，空载病毒组用shSHP2-NC 表示。

3 讨 论

牙周炎是一种常见的破坏牙周支持组织的慢性炎症性疾病，在牙周炎期间，促炎细胞因子在牙周组织中大量分泌

，抑制PDLSCs 的成骨能力，进一步造成牙周硬组织再生的困难。由于临床上大多数牙周组织的愈合阶段都发生在牙周炎症微环境下，因此研究炎症细胞因子对牙周病和干细胞介导的愈合过程的影响，对理解牙周再生机制及临床上进一步指导和优化牙周再生方法至关重要。

国内外许多学者已经对巷道底鼓进行了诸多研究。曼·奥顿哥特等[9]通过相似模拟试验对巷道底鼓的全过程进行了研究，结果表明巷道围岩的变形与破坏首先在垂直应力作用下两帮岩层被压裂，其次是水平应力的作用巷道顶底板向巷道内移近，其中直接底板围岩先破坏。康红普等 [10-11]认为底鼓的原因主要在于失稳的底板岩层向巷道内压曲，偏应力作用下的扩容，岩石自身的遇水膨胀。文献[5-8]将底鼓分为挤压流动性底鼓、挠曲褶皱性底鼓、遇水膨胀性底鼓、剪切错动性底鼓等4种类型。文献[12-18]也先后在巷道底鼓机理、治理方法、施工机具等方面进行了研究，对巷道底鼓控制技术的发展起到了积极作用。

在刑事诉讼中，侦查人员进行讯问时录音录像制度是司法改革的重要成果，发挥了规范侦查人员讯问行为、提升司法人员办案水平、遏制相关人员刑讯逼供等作用。根据《监察法》的规定，调查人员在讯问、搜查、查封、扣押等取证工作中，应当进行全程录音录像，留存备查。该规定不但对于监察机关进行调查取证中严格执行法律和纪律有重要意义，而且保障了调查人员和被调查人员的合法权利。《监察法》中关于调查取证时录音录像的规定比《刑事诉讼法》中要求更严苛，发挥的作用亦更大。

然而，牙周炎修复过程中的骨再生与正常状况下的不一样，牙周炎局部具有特殊的炎症环境影响了hPDLSCs 再生牙周组织的能力，在炎症状态下hPDLSCs 成骨能力减弱，显然不利于牙周硬组织的修复。研究表明，来源牙周炎患者的hPDLSCs 成骨能力受损，表现为成骨细胞基因表达降低以及钙化结节沉积物和ALP 活性减少

。本实验也证明相比正常环境，在TNF-α 和IL-1β 诱导炎症环境下，hPDLSCs 成骨能力明显下降。因此，如何提高hPDLSCs 在牙周炎环境中的成骨分化能力，使其受损的成骨能力得以恢复，是干细胞治疗获得满意治疗效果的重要因素。于是笔者研究了SHP2 敲低在炎症条件下对hPDLSCs 增殖及成骨分化的影响，发现SHP2 敲低在炎症条件下增加了成骨标志物（ALP、COL-1 和RUNX2）的表达，证实了SHP2 敲低在炎症环境下可以促进早期成骨。而在成骨诱导21 d 后，通过ARS 评估钙沉积水平，以及在14 d 时通过Western Blot 评估成骨相关蛋白水平，证明了SHP2 敲低对晚期成骨指标也有促进作用。相较于正常环境，SHP2 敲低在炎症环境下对hPDLSCs 成骨分化的促进作用更为显著，这意味着SHP2 对于炎症下hPDLSCs 的成骨分化起着重要作用。

NF-κB 是一种转录因子，在炎症发作中起重要作用

。在炎症状况下，NF-κB 通路下游产生炎症因子（如TNF-α）可抑制骨形成

。在牙周炎疾病背景下，炎症环境也被证实可通过NF-κB 通路抑制hPDLSCs 的成骨修复效果。据现有研究表明，SHP2 与NF-κB 信号通路关系密切

。因此，笔者认为NF-κB 信号通路可能参与炎症条件下SHP2 介导的hPDLSCs 成骨分化。本实验发现，炎症刺激能够激活NF-κB 通路，而SHP2 敲低能够抑制炎症状态下激活的NF-κB 通路。MAPK 通路位于NF-κB 上游，有3 条主要的分支路线即ERK、JNK、p38

。多项研究证实了在炎症环境下，MAPK 通路中的JNK、p38 由炎症反应激活，而通过各种生物分子或药物抑制JNK/p38 激活可有效下调促炎细胞因子、抑制炎症反应，实现多种炎症疾病的治疗

。本实验同样发现SHP2 可以调控MAPK 通路中的p38、JNK 磷酸化。

对于后期二铵的价格走势，郑冰表示，二铵后市的价格还是要看成本是否会出现大的波动。目前来看，经销商普遍都比较担心高价买入后，到了后期又出现大幅度跌落现象。后期二铵价格或将仍有一定的上升空间，但是目前价格已经涨到一个相对尴尬的高点，未来价格的不确定性还很多，如果说涨价带来了机遇，相对应的风险也还是很大。但相比较而言，如果前期有提前备肥的经销商，可操作的利润空间还是相对可观的。

基于本实验，笔者发现敲低SHP2 基因后，炎症条件下MAPK-NF-κB 通路部分受到抑制，hPDLSCs 的成骨分化似乎得到恢复。已有研究证明，p38、JNK 及NF-κB 通路在炎症状态下激活，这些通路被抑制后能够减轻炎症反应。此外，较低的炎症水平可促进干细胞的成骨分化，因此笔者推断高水平炎症环境下，敲低SHP2 后，p38、JNK 及NF-κB 通路被抑制，减轻了炎症反应，从而恢复干细胞的成骨分化能力。有趣的是，与SHP2 对大多数细胞中NF-κB 通路的影响相反，在正常条件下，SHP2 敲低导致hPDLSCs 中NF-κB 通路激活。未来的研究需要进一步探索这种差异的潜在机制。

综上，本研究证明了在炎症条件下，敲低SHP2可能通过MAPK/NF-κB 介导的信号传导，促进炎症环境中hPDLSCs 的成骨分化。SHP2 可能是治疗炎症相关骨骼疾病（如牙周炎）的潜在靶标，并为临床上牙周再生的干细胞治疗提供新的思路。

某供电公司在对一座500 kV变电站500 kV HGIS的5061断路器I母侧电流互感器A相二次绝缘进行检查时，发现该电流互感器对地、各互感器线圈之间绝缘为0(交接试验规程要求二次绝缘不低于1000 MΩ) [5]。打开外壳后发现内部有积水，电流互感器线圈受潮、互感器舱室内部发霉严重，如图1所示。

Zhang Y, Jin YQ and Ji J wrote the article and designed the study. Zhao Q, Lv HD, Wang TC and Dou ZJ collected, processed and analyzed the data. All authors read and approved the final manuscript.

[1] Zhang X, Gu H, Xie S, et al. Periodontitis in patients with psoriasis: a systematic review and meta-analysis[J]. Oral Dis, 2022, 28(1):33-43.doi:10.1111/odi.13617.

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