锦红冰糖橙芽变优系——云锦1号的鉴定与评价

江 东，普金安，朱延松，陈 磊

(1 西南大学柑桔研究所，重庆，400712；2 新平彝族傣族自治县农业农村局经作站，云南新平，653400)

冰糖橙是湖南省洪江市(原黔阳县)从普通甜橙中选出的低酸甜橙品种[1]，因果实具有风味浓甜、酸低、无核、肉质细嫩化渣等优点而广受消费者喜爱。目前冰糖橙已经成为国内栽培面积最大的低酸甜橙品种，在湖南麻阳、洪江、永兴，广西鹿寨，云南新平、保山等地广泛种植。长期以来，通过对冰糖橙开展选育，已经获得了许多优良品种(系)。比如：湖南农业大学等单位从冰糖橙芽变中选出了锦红[2，3]、锦玉[4]、锦蜜、黔阳冰糖脐橙[5]等品种，西南大学柑桔研究所与新平彝族傣族自治县农业农村局(以下简称新平县农业农村局)合作从冰糖橙中选出了新冰30等品种，对冰糖橙产业发展起到了重要推动作用。2011年国家果树种质重庆柑桔圃江东等在对湖南麻阳江口墟镇舒湘森的锦红冰糖橙果园进行调查时，发现该果园中的锦红存在大果形、果实椭圆形、果皮更红等较为丰富的变异类型，遂收集这些变异材料的枝条，在国家果树种质重庆柑桔圃中进行嫁接繁殖，并开展观察鉴定。2014年这些材料结果后，发现锦红果实椭圆形变异材料(以下称为椭圆形锦红)的果实具有肉质脆嫩、糖高酸低、品质优异等特点。2016年国家果树种质重庆柑桔圃将繁育的椭圆形锦红嫁接苗(枳砧)提供给云南鼎成农业科技有限公司在云南新平进行栽植试验。2018年云南鼎成农业科技有限公司的这批椭圆形锦红结果后，果实品质表现十分突出，其糖度比对照品种锦红更高。在2020年新平举办的冰糖橙果品大赛中，云南鼎成农业科技有限公司及其他公司选送的椭圆形锦红获得金奖。经过国家果树种质重庆柑桔圃与新平县农业农村局经作站多年多点的区域试验，发现椭圆形锦红与锦红存在较大差异，椭圆形锦红的成熟期较早，果形特异、肉质脆嫩、风味浓甜，品质优于锦红。由于该变异材料在云南新平表现良好，又是从锦红变异材料中选出的优异单株，故定名为云锦1号。本研究从植物形态学、分子水平等方面对云锦1号与锦红开展鉴定评价，以期弄清云锦1号与锦红的遗传差异，并为云锦1号的品种登记和推广种植奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

云锦1号、对照材料锦红冰糖橙均来自新平县漠沙镇鱼塘村云南鼎成农业科技有限公司基地果园，两者同期于2016年2月定植，均为2年生嫁接苗(枳砧)，株行距均为2 m×3 m，田间施肥、打药、除草、灌溉等日常管理均相同。其中，云锦1号定植用苗来自于国家果树种质重庆柑桔圃，锦红定植用苗来自湖南麻阳。在进行SSR分子标记遗传差异分析时，还从国家果树种质重庆柑桔圃采集了仁冰4号、仁冰5号、锦红冰糖橙、锦红大果、锦红最红、5号冰糖橙、30号冰糖橙、普通冰糖橙、锦蜜冰糖橙、锦蜜冰糖橙芽变、早熟冰糖橙、椭圆形锦红不同芽变系(编号：2021-103至2021-105)、早冰(2022-17)、早冰芽变(2022-18)等材料进行比较分析。其中，锦红大果、锦红最红等是在湖南麻阳江口墟镇收集的锦红冰糖橙单株；椭圆形锦红不同芽变系(编号：2021-103至2021-105)来自于新平县漠沙镇鱼塘村云南鼎成农业科技有限公司；锦蜜冰糖橙、锦蜜冰糖橙芽变来自于湖南麻阳；早冰(2022-17)、早冰芽变(2022-18)来自于云南新平褚橙基地。

1.2 方法

2020—2021年连续两年在云南鼎成农业科技有限公司基地同一果园对云锦1号和锦红进行植物形态学性状和生物学特性(含物候期)观察测定。选取同一小区的样株6株进行持续观测，每株树冠外围随机取样品果实10个进行果实品质分析。植物形态学性状和生物学特性的观测方法参考文献[6]。在果实品质分析中，采用阿贝折射仪法[7]测定可溶性固形物，利用NaOH滴定法[7]测定可滴定酸含量，利用碱性酒石酸铜液直接滴定法[8]测定还原糖、转化糖，利用2，6-二氯靛酚滴定法[9]测定维生素C，可食率和出汁率等测定参见文献[7]。对开花结果习性进行观察。在2021年10月上旬分别对各样树的单株产量进行统计，取平均值为株产，以株产折算每667 m2产量。

采用SSR(简单重复序列)标记和S-SAP(特异序列扩增多态性)标记两种技术寻找云锦1号和锦红的差异性条带。在10月份采集云锦1号和其他13份冰糖橙材料的叶片样品，使用CTAB方法提取DNA。SSR引物合成及扩增方法参考文献[10]，扩增产物经6% SDS-PAGE胶120 V垂直电泳2 h后进行银染显色。从45对SSR引物中筛选出4对差异性较好的引物(见表1)用于品种间的区分。S-SAP引物合成及分析方法参考文献[11-12]，接头序列、预扩引物序列及选扩引物序列见表2。云锦1号和其他冰糖橙的DNA经过EcoR I单酶切，酶切产物通过T4连接酶与接头连接，连接产物经预扩、选扩后，扩增产物经6% PAGE胶120 V垂直电泳3 h后银染显色。

表1 冰糖橙芽变材料检测所用SSR引物[10]

表2 冰糖橙芽变材料检测所用S-SAP引物和接头[11-12]

2 结果与分析

2.1 植物形态学性状与果实品质

在云南新平县鼎成农业科技有限公司基地果园栽培的枳砧云锦1号，4年生树平均株高为2.15 m，冠径2.4 m×2.6 m，嫁接口上方20 cm处平均周长为32 cm。与普通冰糖橙相比，其树势偏弱，树冠圆头形，生长势与锦红冰糖橙相当。春梢枝条形态似温州蜜柑，呈棱形，较柔软，披垂，长度14.6 cm，粗度2.7～4.5 mm，节间长19.5 mm、较短，无刺。强旺夏梢枝条上有少量不明显的短刺，枝梢密度中等。取老熟春梢叶片进行测量，叶片较普通冰糖橙大，与锦红相当，倒卵圆形或长椭圆形，大而厚，叶色浓绿，叶片表面光滑而具有光泽。嫩叶淡绿色，无花青苷显色。叶缘全缘，叶尖渐尖，叶基为狭楔形。叶柄长22.2～25.1 mm，叶片长92.3～112 mm，叶片宽47.0～63.2 mm，翼叶倒披针形，翼叶长11～14.9 mm，翼叶宽3.6～4.2 mm。花量较大，丛生或单生。花朵形态与锦红无太大差异。花瓣5瓣，白色，花瓣长17.9 mm，花瓣宽7.9 mm。花柱直立。雄蕊与花柱等高，雄蕊数22枚，花丝基部部分联合。花药淡黄色，花药囊长3.9 mm。花粉中多。果实长椭圆形。靠果梗处的果基部具有浅果颈，果基无放射沟纹。果面光滑。果顶平，无放射沟纹和印圈。平均单果质量160 g，横径为64.6 mm，纵径为74.3 mm，果形指数1.15，成熟后果面橙红色。果皮上常具有深绿色的竖状不规则条纹，使得果面颜色不太均匀。果皮上油胞小而细密，凸起或平生。果面比锦红更光滑。果皮厚0.40 cm，与锦红相当。果心充实，果心大小为0.95 cm×0.90 cm。囊瓣数9～11瓣。果肉浅橙色，具有香气，肉质较脆嫩。汁液含量中等，出汁率明显低于锦红，可食率也低于锦红，但糖度比锦红高。果实减酸早，肉质紧实化渣，风味浓甜而无酸，无种子。云锦1号与锦红在植物形态学与果实品质上的差异见表3和图1。

表3 云锦1号冰糖橙与锦红冰糖橙的形态与果实品质对比

图1 锦红冰糖橙和云锦1号冰糖橙树体、枝叶和果实

此外，田间观察发现云锦1号与锦红一样对柑桔溃疡病表现敏感。

2.2 物候期

在云南新平，通常在1月下旬萌芽，2月下旬至3月上旬为盛花期，3月中旬为第一次生理落果期，4月下旬为第二次生理落果，5月上旬有夏梢抽发，果实膨大期为7月中下旬，7月底抽发秋梢，其秋梢抽发能力较普通冰糖橙弱。10月中旬果实可以采收，其成熟期比锦红成熟时间早5～7 d，11月中旬果实完全转色。2020年在10月中旬时测定的可溶性固形物含量为11.8%，到11月中旬时达13.7%，此时品质最优。

2.3 产量

云锦1号尽管无核，但结实能力较强。以春梢和秋梢为主要结果母枝，与锦红一样，表现为花量大，着果率高，丰产性强，果实大小较整齐。2016年2月栽植的枳砧容器苗，初期结果2019年平均单株产量为5.2 kg，第5年2021年平均单株产量可达28.6 kg，按照111株/667 m2(株行距2 m×3 m)的栽植密度，则每667 m2产量可达3 174.6 kg，盛产期产量会更高。对照锦红第4年平均单株产量为28.8 kg，略高于云锦1号。云锦1号果顶的皮较薄，4—5月若干旱少雨且缺乏灌溉会影响果实膨大，果实膨大期7—8月若干旱后遇暴雨又容易导致果实开裂，因而尤其需要注意果实膨大期的均衡供水。

2.4 遗传差异分析

利用筛选的SSR标记引物对云锦1号与其他冰糖橙材料开展分子水平遗传差异分析的结果表明，4号SSR引物能够扩增出明显的差异性条带，云锦1号与锦红的带型存在明显差异，且与锦红大果、锦红最红、椭圆锦红(2021-103至2021-105)、锦蜜、普通冰糖橙、仁冰4号、仁冰5号、5号冰糖橙、30号冰糖橙等均存在明显的带型差异(见图2左)。利用sscB/E01和sscB/E04引物进行扩增的结果均表明，云锦1号与锦红在DNA水平上存在差异，进一步证实了该芽变系不同于其母本锦红，具备成为新品种的遗传基础(见图2右)。

图2 利用4号引物扩增出的云锦1号和其他冰糖橙材料的SSR带型(左)及利用sscB/E01和sscB/E04引物扩增出的云锦1号和其他冰糖橙材料的S-SAP带型(右)

3 讨论

云锦1号冰糖橙是从锦红冰糖橙芽变椭圆形锦红中选出的一个果形特异、品质优良的优系。该优系由于可溶性固形物比锦红冰糖橙和普通冰糖橙更高、成熟时间更早，在云南新平县等早熟冰糖橙优势产区具有极大的竞争优势和发展空间，该优系的发掘利用对云南省新平县早熟冰糖橙市场优势地位的巩固有积极作用。锦红冰糖橙是国家柑桔改良中心长沙分中心、麻阳苗族自治县农业局、湖南省农业厅经济作物处共同选育的一个优良冰糖橙品种，果实圆球或高扁圆形，除了有普通冰糖橙的糖高酸低、风味浓甜、脆嫩化渣、无核等优良性状外，还具有果皮橙红色、果大均匀的优点，克服了普通冰糖橙果实偏小且大小不匀的缺点，可食率一般在72%～75%之间[2-3]，因而受到广泛关注。在云南新平县种植的锦红冰糖橙，果实在充分完熟后，果皮颜色也比普通冰糖橙颜色更红，售价比普通冰糖橙更高。云锦1号冰糖橙不仅保持了锦红冰糖橙的果皮颜色，而且糖度更高，成熟期更早。在云南干热河谷地区的新平鼎成基地发展冰糖橙，由于果实成熟时期气温较高，成熟时果面往往呈现黄绿色而非橙色，对果实商品外观的影响较大，而云锦1号冰糖橙果面颜色较深，色泽良好，优势非常明显。云锦1号冰糖橙的树势较普通冰糖橙弱，用枳做砧木时，可促进其成熟期进一步提前，果实品质也会大幅提升。

在柑桔[13]、柿[14]等果树中发现，在5—6月果实发育的早期阶段，细胞分裂的方向对果实纵径的影响更大。在云南华宁、新平等地区，许多甜橙类品种的果形指数均会增加，这与开花时间早，幼果发育时期外界温度有利于细胞分裂有很强的相关性。由此分析认为，云锦1号冰糖橙的果形比锦红冰糖橙更长的原因，除了遗传因素外，还与其开花时间早，幼果期果实发育的纵向生长速率高于横向生长速率有关。由于开花早，果实成熟期也相应提前，云锦1号冰糖橙比锦红冰糖橙要早5～7 d成熟。由于果形长，云锦1号冰糖橙在果实后期膨大时，也有少量裂果发生。在生产上，在花谢2/3时叶面喷施氨基酸钙(或富利盖®钙液)等，或者在5月中旬结合复合肥土施一次中微量元素肥(如：葆力素TM硫酸钾钙镁)，有助于减少裂果的发生。

云锦1号冰糖橙的枝条较软，挂果过多易使树冠披垂。树形宜采用开心形，以促进果实着色良好。对离地较近的枝条进行剪除，防止果实触地影响果面外观。在秋梢萌发前，宜进行短剪结合肥水管理促进秋梢整齐萌发和强壮。

该品种与普通冰糖橙一样，对柑桔溃疡病较敏感，种植时应选用无病种苗。冬季采果后及时剪除病枝、病叶，集中烧毁，并喷施石硫合剂进行清园。夏季防控好柑桔潜叶蛾，减少叶片创口。在春夏季嫩梢展叶期喷施46%氢氧化铜水分散粒剂1 500倍液或者47%春雷王铜可湿性粉剂500倍液，以防控柑桔溃疡病。

在云南新平多年观察的结果表明，云锦1号冰糖橙的果实品质优于普通冰糖橙和锦红冰糖橙。与其他冰糖橙品种相比，该优系具备早熟性强、品质优的特点，在云南省冰糖橙优势产区具有巨大的发展空间。