HIV-1抗体阳性者的免疫印迹带型分析

张冬合， 王立华， 郑德桂， 梁英连

江门市疾病预防控制中心，广东 江门 529030

艾滋病是由人类免疫缺陷病毒(HIV)引起的慢性传染病，主要攻击和破坏人体免疫系统中的CD4+T淋巴细胞，导致机体免疫力下降，从而引发机会性感染或肿瘤。研究显示，HIV感染者在病毒感染的前2.5个月的传播风险比慢性感染者高10倍[1]。目前我国艾滋病流行形势依然严峻，及早识别新病例对防止艾滋病进一步传播、早期评估及治疗非常重要。HIV-1型病毒的基因组主要由三个结构基因和六个调节基因构成，其中env、gag、pol结构基因可编码多个蛋白，包括与CD4细胞结合的外膜糖蛋白gp41和gp120，稳定病毒并促进病毒入核的核心蛋白p17、p24和p55，以及病毒复制所需酶系相关的逆转录酶蛋白p66、p51和p31等。研究显示，在免疫蛋白印迹试验(Western blotting,WB)试验中的一些特定数量的阳性条带可作为个体新近感染的证据，目前已被广泛应用于临床和诊断当中[2]。WB因其高特异性和敏感性，是国内HIV抗体确证实验室的首选方法[3]。因此对HIV感染者进行抗体检测和流行病学调查可作为早期感染提示、临床鉴别诊断和传染源的确认、追踪的手段，是艾滋病防治工作中不可或缺的一环。本研究对2018—2019年期间广东省江门市疾病与预防控制中心确证中心实验室检测的样本进行WB条带和首次CD4+T淋巴细胞特征分析，综合了解本地区新确诊HIV感染者的疾病发生和免疫状态，为改善实验室检测评估策略，促进艾滋病的防治工作提供科学依据。

1 资料与方法

1.1 标本来源

收集2018—2019年期间广东省江门市疾病预防与控制中心艾滋病确证中心实验室检出的HIV-1抗体阳性标本，共计214份，均为未接受抗病毒治疗的个案。

1.2 方法

1.2.1 WB试验 采用新加坡MP生物医学亚太试剂盒，仪器为MP公司的AUTOBLOT SYSTEM 20。具体操作按试剂盒说明书进行。按照《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断(2019年版)》的判断标准[4]，HIV-1抗体阳性，需符合以下标准之一：①至少有2条env带(gp41和gp160/gp120)出现，或至少1条env带和至少1条gag或pol带同时出现；②符合国家批准的HIV抗体确证试剂盒提供的阳性判定标准，判断为HIV-1抗体阳性。

1.2.2 CD4+T淋巴细胞检测 采用流式细胞术(BD FACSCount流式细胞仪)和配套的免疫荧光试剂，测定红细胞溶解后的全血样本的人总T淋巴细胞，具体操作按仪器和试剂说明书进行。

1.3 统计学处理

用Epidata软件对个案调查资料进行双录入。采用SPSS 19.0软件进行数据统计分析，不同组间阳性率的比较采用卡方检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 人口特征分析

214例HIV-1抗体阳性者中，江门本地户籍203例(94.86%)，非本地户籍11例(5.14%)；男156例(72.90%)，女58例(27.10%)，男女比为2.69 ∶1；14～44岁99例(46.26%)，45～59岁83例(38.79%)，60岁以上32例(14.95%)，平均(44.70±14.00)岁；已婚97例(45.33%)，离异或丧偶58例(27.10%)，未婚59例(27.57%)；汉族205例(95.79%)，其他民族9例；小学及以下48例(22.43%)，初中107例(50.00%)，高中42例(19.63%)，大专及以上17例(7.94%)；待业或退休92例(42.99%)，农民工70例(32.71%),其他22例(24.30%)；异性传播153例(71.50%)，同性传播39例(18.22%)，注射吸毒22例(10.28%)；CD4+T淋巴细胞水平平均(269.5±218.1个/μL)，其中重度免疫抑制组(<200个/μL)87例(40.65%)，中度免疫抑制组(200～350个/μL)60例(28.03%)，轻度免疫抑制组(>350个/μL)67例(31.31%)。

2.2 HIV-1抗体阳性WB带型分析

214例HIV-1抗体阳性样本带型中，49例(22.90%)出现全条带，71例(33.18%)出现8条带，66例(30.84%)出现7条带，28例(13.08%)出现3～6条带。各WB条带的阳性检出率以env(外膜糖蛋白)最高，均达94.00%以上，其中WB全条带中缺失率最高的是gag核心蛋白的p55条带，阳性检出率仅为36.92%，其次是p17(62.15%)。不同性别间的WB带型仅p55的检出率差异有统计学意义(2=4.41，P=0.036)，女性检出率高于男性(表1)。

表1 214例HIV-1抗体阳性标本WB带型分布Table 1 WB band distribution of HIV-1 antibody positive specimens in 214 cases

2.3 不同年龄组HIV-1抗体阳性WB带型分析

214例HIV-1抗体阳性者中，年龄最小的为14岁，最大78岁,但不同年龄组之间各带型的检出率无统计学差异(表2)。

表2 HIV-1抗体阳性WB带型与年龄分布情况Table 2 Distribution of HIV-1 antibody positive WB band type among different age groups

2.4 不同途径感染人群HIV-1抗体阳性WB带型分析

214例HIV-1抗体阳性者中，在不同途径感染人群间WB带型gp41(2=16.31，P<0.01)、p51(2=8.75，P=0.013)的检出率差异有统计学意义，均以注射吸毒人群检出率最高，异性性行为传播次之(表3)。

表3 HIV-1抗体阳性WB带型与感染途径分布情况Table 3 Distribution of HIV-1 antibody positive WB band type among infection route

2.5 不同CD4+T淋巴细胞水平HIV-1抗体阳性WB带型分析

214例HIV-1抗体阳性者中，不同免疫水平的人群间WB带型gp41(2=9.26，P=0.010)、p24(2=5.35，P=0.035)和p17(2=21.37，P<0.01)的检出率差异均有统计学意义，其中gp41检出率在轻度免疫抑制组中检出率最低，说明gp160/gp120比gp41在HIV感染早期更容易检测到，随着疾病进程的发展，gp41的检出率逐渐增高，重度免疫抑制组检出率可达100%。而重度免疫抑制组中p24、p17检出率均比中度和轻度免疫抑制组低，其中p17检出率变化最大，在轻、中度免疫抑制组阳性检出率较高，均达70%以上，但在重度免疫抑制组则明显降低，仅为43.68%(表4)。

表4 HIV-1抗体阳性WB带型与CD4+T淋巴细胞水平分布情况Table 4 Distribution of HIV-1 antibody positive WB band type and CD4+T lymphocyte counts

3 讨论

本研究发现，江门市2018—2019年期间新确诊HIV-1感染者以男性青壮年为主，为本地区的主要高危人群，可能与此类人群生理需求较旺盛而社交活动活跃，文化程度普遍偏低，性行为防护意识薄弱有关。本研究中WB全条带出现率仅为22.90%，低于西宁地区(54.09%)[5]和乐山地区(57.70%)[6]；次全条带(7条带及以上者)占86.92%，说明大部分HIV感染者处于病毒繁殖活跃期，具有较强的传染性[7]；抗env基因编码的gp160、gp120、gp41和抗gag基因编码的p24检出的阳性率较高，均在90.0%以上，与其他研究结果相似[8-9]，因此这些常见蛋白可作为HIV感染的确证条件之一。WB缺失率较高的带型分别为p55和p17，是全条带缺失的主要原因，缺失条带类型与国内其他报道[10-11]相似，这可能与HIV病毒蛋白的功能特性、抗原性以及感染时间密切相关。p55虽然和gp160同为前体蛋白，但两者抗体阳性检出率差异较大，可能与gp160具有糖基化特性，在宿主体内相对稳定有关。也有研究发现，WB实验中p55条带的缺失与HIV血清阳转后的疾病进展速度有关，缺少p55条带的HIV感染者疾病进展明显加快[12-13]。在本研究中p55蛋白的缺失率最高，推测可能由于其并未被糖基化，易水解为p24、p17、p15，在宿主细胞中稳定性差而造成缺失。另外，本研究HIV新确诊的抗体阳性者并不都是新近感染者，部分患者感染了较长时间，机体免疫功能较差，也可能是造成p55缺失的原因。以往亦有研究表明近年来江门市HIV感染晚发现比例较高[14]，多数患者发现时或已进入慢性感染期。

本研究在分析患者首次CD4+T淋巴细胞与HIV-1抗体之间的关系时发现，gag蛋白p17和p24的低检出率与CD4细胞水平降低显著相关，提示随着机体免疫功能的破坏，p17和p24抗体滴度呈现不同程度水平的下降，与其他报道一致[15]，WB带型会随着疾病进展发生变化，推测p55、p24和p17或可作为判别疾病进程发展的潜在指标，与CD4细胞计数共同判断机体的免疫状态[16]。

在其他人口学特征与WB条带的关系上，本研究发现，不同性别人群p55带型检出率差异存在统计学意义，女性检出率略高于男性，与包艳丽等[17]研究一致。在不同感染途径上，gp41和p51抗体阳性检出率的差异也存在统计学意义，均为经注射吸毒感染检出率最高，而异性性行为传播高于同性性行为传播，与国内其他研究[18-20]一致，这可能与病毒进入的方式以及HIV-1亚型有关。近年来同性性行为发生率越来越高，传播方式变得更为复杂多样，各HIV亚型共感染的情况也时有发生，可能也是导致WB条带发生变化的一个影响因素，仍值得进一步研究。

综上所述，江门市的HIV疾病防控工作仍不容松懈，需加大HIV防治宣传和检测力度，力求早发现、早检测、早报告、早治疗HIV感染人群。应大力加强高危人群关于艾滋病防治知识的健康教育和行为干预，推行自我检测，及早发现，防止二代传播。但由于此次研究的HIV-1阳性感染者样本量较少，感染途径均为感染者自述，可能存在与实际情况不符的情况。今后需增加样本量并且提升流调技巧、增加感染者的随访频次尽量保证资料准确，开展进一步研究。