LncRNA GAS5和miR-142-5p在慢性心力衰竭患者血清中表达及临床意义

王建军，郭莹，张淑芳

慢性心力衰竭（慢性心衰）是各种心血管疾病的终末期表现和最主要死因[1]。随着饮食结构的改变及生活水平的提高，慢性心衰的发病率、死亡率逐年增加，成为医学领域面临的最大挑战之一[2]。因此，寻找用于慢性心衰早期诊断及预后预测的生物标志物十分重要。长链非编码RNA生长停滞特异基因5（LncRNA GAS5）广泛分布于胚胎及成人机体中，主要特点为优先表达于生长停滞细胞中[3]。文献报道，微小RNA-142-5p（miR-142-5p）可作为免疫疾病及肿瘤等疾病潜在的生物标记物[4]。Du等[5]研究表明，LncRNA GAS5、miR-142-5p可影响缺氧诱导的心肌细胞损伤程度，但二者在慢性心衰中的作用仍需进一步探究。因此，本研究通过检测83例慢性心衰患者血清LncRNA GAS5、miR-142-5p水平，探讨二者在早期诊断及预后评估中的作用，以期为慢性心衰不良预后的早期预测提供参考指标。

1 资料与方法

1.1 研究对象选取2018年2月～2019年2月于济宁医学院附属医院心内科住院治疗的83例慢性心衰患者为慢性心衰组，年龄50～74岁，平均（62.83±9.46）岁，男性44例，女性39例；同期选取健康体检者86例作为健康对照组，年龄51～74岁，平均（63.24±9.17）岁，男性46例，女性40例。

纳入标准：①符合2018年中国心衰诊断和治疗指南中的诊断标准[6]；②临床病例资料齐全者；③研究经本院临床研究伦理委员会批准，所有研究对象均签署知情同意书；④未伴有心脏瓣膜病、高血压性心脏病、急性心肌梗死者。排除标准：①入院前1周内使用过抗炎药物、免疫抑制剂者；②伴有严重肝肾功能不全及血液系统、自身免疫系统疾病者；③伴有感染性疾病及恶性肿瘤者；④6个月内发生过脑卒中、急性脑血管意外者。

查阅门诊及住院病历，收集并整理患者一般资料，主要包括年龄、性别、体质指数（BMI）、吸烟史、饮酒史、高血压、糖尿病。

1.2 主要试剂与仪器RNA提取试剂盒（北京索莱宝科技有限公司，货号：R1200-100）；反转录试剂盒（上海康朗生物科技有限公司，货号：KL266）；miScript SYBR® Green PCR试剂盒（德国QIAGEN公司，货号：218073）。qRT-PCR仪（美国Bio-Rad公司，型号：CFX384）；彩色多普勒超声诊断仪（荷兰飞利浦公司，型号：IE33）。

1.3 研究方法

1.3.1 样品采集及保存采集健康体检者体检当天及慢性心衰患者入院第2 d晨起空腹静脉血，经3000 r/min离心15 min后收集血清，保存待测。

1.3.2 血清LncRNA GAS5、miR-142-5p水平测定采用试剂盒提取血清总RNA并反转录得cDNA，采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）仪扩增miR-142-5p、LncRNA GAS5及其内参（U6和GAPDH），引物序列见表1，引物由上海生工生物工程股份有限公司设计并合成。qRT-PCR反应条件：95℃预变性10 min；95℃ 30 s，58℃ 30 s，72℃ 30 s，40个循环。反应体系共20 μl：cDNA模板（50 ng/μl）2 μl，miScript SYBR® Green Mix 10 μl，上下游引物（10 μM）各0.8 μl，ddH2O 6.4 μl。每份样品均设3个重复孔，采用2-△△CT法计算血清miR-142-5p、LncRNA GAS5相对表达量。

表1 qRT-PCR引物序列

1.3.3 心功能指标测定采用心脏超声检查心功能指标左室舒张末期内径（LVEDD）、左室收缩末期内径（LVESD）及左室射血分数（LVEF）。

1.3.4 随访慢性心衰患者出院2年内以门诊、电话等方式随访，了解患者心源性死亡情况，随访时间截至2021年2月。

1.4 统计学分析应用SPSS 23.0统计分析数据，计量资料均符合正态分布，以均数±标准差（±s）表示，两组间比较采用t检验；计数资料以百分比表示，组间比较采用卡方检验；采用Pearson法分析慢性心衰患者血清LncRNA GAS5、miR-142-5p水平与心功能指标的相关性；采用受试者工作特征曲线（ROC曲线）分析血清LncRNA GAS5、miR-142-5p水平对慢性心衰的诊断价值；采用Kaplan-Meier法分析血清LncRNA GAS5、miR-142-5p表达与慢性心衰患者预后的关系，检验水准为α=0.05，用Log-rank进行生存曲线显著性检验。以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 健康对照组与慢性心衰组一般资料比较健康对照组与慢性心衰组年龄、性别、BMI、吸烟史、饮酒史、高血压、糖尿病比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），表2。

表2 健康对照组与慢性心衰组一般资料比较

2.2 健康对照组与慢性心衰组血清LncRNA GAS5、miR-142-5p水平及心功能指标比较慢性心衰组血清miR-142-5p水平、LVESD、LVEDD高于健康对照组，血清LncRNA GAS5水平、LVEF低于健康对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），表3。

表3 健康对照组与慢性心衰组血清LncRNA GAS5、miR-142-5p水平及心功能指标比较

2.3 慢性心衰患者血清LncRNA GAS5、miR-142-5p水平与心功能指标的相关性Pearson法分析结果显示，慢性心衰患者血清LncRNA GAS5与miR-142-5p水平呈负相关（r=-0.647，P＜0.05），且LncRNA GAS5（miR-142-5p）与LVESD、LVEDD呈负（正）相关（P＜0.05），与LVEF呈正（负）相关（P＜0.05），图1和表4。

图1 慢性心衰患者血清LncRNA GAS5与miR-142-5p水平的相关性

表4 慢性心衰患者血清LncRNA GAS5、miR-142-5p水平与心功能指标的相关性

2.4 血清LncRNA GAS5、miR-142-5p水平对慢性心衰的诊断价值以血清LncRNA GAS5、miR-142-5p水平为检验变量绘制ROC曲线，结果显示，血清LncRNA GAS5、miR-142-5p水平诊断慢性心衰的曲线下面积（AUC）分别为0.873（95%CI： 0.819～0.928）、0.896（95%CI：0.850～0.941），截断值分别为0.807、1.124，特异性分别为82.6%、72.1%，敏感度分别为84.3%、91.6%；二者联合诊断的AUC为0.914（95%CI：0.872～0.955），特异性为79.1%，敏感度为92.8%，图2。

图2 血清LncRNA GAS5、miR-142-5p诊断慢性心衰的ROC曲线

2.5 血清LncRNA GAS5、miR-142-5p表达与慢性心衰患者预后的关系以LncRNA GAS5、miR-142-5p表达水平平均值（0.66、1.41）为界，将83例慢性心衰患者分为LncRNA GAS5高表达41例及LncRNA GAS5低表达42例；miR-142-5p高表达43例及miR-142-5p低表达40例。采用Kaplan-Meier法分析慢性心衰患者血清LncRNA GAS5、miR-142-5p表达与患者生存率的关系，结果显示LncRNA GAS5低表达患者2年生存率（57.14%）低于LncRNA GAS5高表达患者2年生存率（85.37%），差异有统计学意义（P＜0.05）；miR-142-5p高表达患者2年生存率（58.14%）低于miR-142-5p低表达患者2年生存率（85.00%），差异有统计学意义（P＜0.05），图3～4。

图3 血清LncRNA GAS5表达与慢性心衰患者预后的关系

3 讨论

慢性心衰主要临床表现为器官组织血液灌注不足、体循环或肺循环淤血，它是一种各类心脏疾病导致心功能不全的综合征[7]。慢性心衰的发生发展伴随着心肌细胞凋亡、损伤以及细胞间质纤维化等过程，此类变化一般在血清学中表现出来[8]。慢性心衰在心血管疾病中占比不高，但其复发、心律失常、心源性死亡等不良预后发生率较高，给家庭及社会增加经济和医疗负担[9]。探究与慢性心衰相关的血清学标志物，可能对个体化治疗方案的选取有重要意义。

LncRNA参与机体生长、发育生命过程，在心肌纤维化、心肌细胞凋亡、心肌肥厚中均有重要的调控作用[10]。LncRNA GAS5可通过影响心肌成纤维细胞的分化和增殖，进而影响心血管疾病的发生发展[11]。尹鲁平等[12]研究结果显示，血清LncRNA GAS5表达水平与老年冠心病经皮冠状动脉介入术后发生支架内再狭窄有关。miRNA可调控血管生成相关因子，影响内皮细胞增殖、迁移，进而调节血管新生，参与冠心病、脑梗死等心脑血管疾病发生发展[13]。miR-142-5p作为miR-142家族的一员，参与食管鳞状细胞癌、结直肠癌等人类多种疾病的发病过程[14,15]。徐瑞金等[16]研究结果表明，miR-142-5p有促进动脉粥样硬化进展的作用。本研究结果显示，与健康人群相比，慢性心衰患者血清LncRNA GAS5表达水平降低、miR-142-5p表达水平升高，且二者呈负相关，本研究miR-142-5p表达趋势与刘静等[17]结果一致。提示LncRNA GAS5低表达、miR-142-5p高表达可能与慢性心衰的发生发展有关。Du等[5]研究中LncRNA GAS5可负调控miR-142-5p表达，进而调控心肌细胞损伤。推测本研究中LncRNA GAS5作为miR-142-5p的负性调节因素，其水平降低后miR-142-5p表达上调，从而对心肌成纤维细胞活化增殖产生影响，加速心肌纤维化的进展，进而影响慢性心衰的发生发展。本研究中慢性心衰患者血清LncRNA GAS5、miR-142-5p与心功能指标LVESD、LVEDD、LVEF呈一定的相关性，进一步表明二者在心功能损伤中的作用。此外，LncRNA GAS5、miR-142-5p对慢性心衰的早期诊断及预后评估均有一定的价值，且LncRNA GAS5低表达、miR-142-5p高表达患者预后较差。当LncRNA GAS5、miR-142-5p异常表达时，警示临床工作中需及时采取针对性措施，避免患者发生心源性死亡。

图4 血清miR-142-5p表达与慢性心衰患者预后的关系

综上所述，血清LncRNA GAS5低表达、miR-142-5p高表达可能与慢性心衰疾病的发生、发展及预后有关。LncRNA GAS5、miR-142-5p不仅在慢性心衰早期诊断中有重要作用，还对其预后评估有重要价值，可能会成为慢性心衰潜在的治疗靶点。但影响慢性心衰预后及LncRNA GAS5、miR-142-5p表达水平的因素较多，尚需进行多中心、大样本量的前瞻性研究进行验证。