松黄和野菊花及其联合应用对小鼠血糖及血脂的影响

赵士博 吴忠港 郑淮远 潘智 李昊阳 邓鹏钰 韦雪海 黄锁义

(右江民族医学院 1临床医学院，广西 百色 533000；2护理学院；3药学院；4广西高校右江流域特色民族药研究重点实验室)

松黄即松花粉，松科植物马尾松等松属植物的精细胞，是中国药食两用的传统中草药〔1〕。松黄味甘、性温、无毒，兼具益气除风、生肌止血等多种药理功效，对血糖的降低有奇效〔2〕。野菊花是菊科植物野菊Chrysanthemum indicum L．的干燥花序，性味苦辛、微寒，具有抗菌解热、保肝、抗肿瘤、神经保护等药理作用〔3〕。本实验研究松黄和野菊花醇提取物对四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠体重、食欲、血糖及肝功能的影响。

1 材料与方法

1.1动物 SPF级昆明种小鼠，雌雄参半，体重(20±2)g，周龄不详，由右江民族医学院实验动物中心提供，许可证号:SCXK桂2012-0003。

1.2药品 药材松黄和野菊花由右江民族医学院科学实验中心主任黄锁义教授鉴定为松科植物松属乔木马尾松Pinus massoniana Lamb.的干燥花粉和菊科植物野菊Chrysanthemum indicum的干燥头状花序。盐酸二甲双胍片，规格:每片 0.25 g，批号:180627，北京京丰制药集团有限公司；四氧嘧啶，规格：5 g/瓶。批号:227A021，北京索莱宝科技有限公司。

1.3仪器与耗材 安稳+血糖仪(三诺生物传感股份有限公司)；TWCL-T 5000磁力搅拌器(上海标和仪器有限公司)；DLSB-5低温冷却液循环泵(郑州长城科工贸有限公司)；JSC电子天平秤CN-BH(福州科迪电子技术有限公司)；FA1204B电子天平(上海精科天美仪器有限公司)；JMF-320G多级闪蒸器(河南智晶生物科技股份有限公司)；TH-UP-10实验室专用超纯水机(山东滕海分析仪器有限公司)；清洁级实验鼠维持饲料(江苏省协同医药生物工程有限责任公司)。

1.4四氧嘧啶诱导糖尿病小鼠模型的建立 参照文献〔4〕方法，禁食16 h后，将四氧嘧啶一水合物溶解在0.9%氯化钠溶液中，通过腹腔注射150 mg/kg体重的四氧嘧啶进行造模，24 h注射1次，共3次。诱导3 d后进行筛选。选择3 d后血糖控制在200 mg/dl及以上的小鼠进行本研究。空白对照组普通饲料喂养，不建模。腹腔注射四氧嘧啶几小时内，个别小鼠会出现低血糖反应，以致死亡。模型小鼠出现消瘦、皮毛光泽降低及活动减少，同时鼠笼垫料脏湿加速等现象出现。以上变化符合糖尿病病症中的“三多一少”(多饮、多食、多尿及体重减少)的特征，提示造模成功。分组时逐一测定小鼠空腹血糖，各组小鼠的平均血糖值相差应小于20 mg/dl，血糖值升高不符合要求的动物予以剔除。

1.5动物分组与给药 试验采用随机数字表法并用5%苦味酸标记分为7个组，即空白对照组，阳性对照组，松黄组，野菊花组，松花和野菊花1∶1配比低、中、高3个剂量(低、中、高剂量)组。依照雌雄1∶1分笼并随机分配，每组10只。阳性对照组灌胃12.5 mg/kg盐酸二甲双胍溶液。两种中药提取物分别配制成1.5、4.5、7.5 mg/ml 3种浓度的药液，分别对应配伍组低、中、高3个实验组。

实验动物经1 w适应性喂养后逐一测定体重。为保证灌胃剂量的准确与实验操作的严谨，实验期间每3 d测定一次体重。实验中各组均按体重20 ml/kg给予对应药液，空白对照组按等体积给予0.9%生理盐水，共给药14 d。采用24 h灌胃原则，本实验遵守动物实验伦理要求。

1.6药物提取 参照文献中〔5〕松黄的乙醇提取方法，称取2 kg松黄用10倍体积的乙醇超声提取3次，合并滤液进行闪蒸浓缩与冷冻干燥，得到药物干燥粉末，用纯水配成生药量为1 g/ml的溶液。野菊花2 kg粉碎，过60目筛，按料液比1∶100加入乙醇，浸泡30 min〔6〕，80℃恒温加热，回流2 h，提取3次，合并提取液，蒸发浓缩得提取物浸膏并配制成生药量为1 g/ml的药液。两种药物均于4℃冰箱保存。

1.7实验指标 检测小鼠体重变化，用快速血糖仪测定小鼠空腹血糖值，用生化分析仪检测样本中血清谷丙转氨酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆固醇(TC)及三酰甘油(TG)含量。颈椎脱臼处死小鼠后即刻取肝称重，并计算肝指数：肝指数=肝净重(g)/体重(g)×100%。

1.8统计学方法 采用统计软件SPSS17.0进行方差分析、两实验组组间比较用矫正检验水准后的配对t检验；用双因素重复测量设计方差分析进行多重比较，部分用单因素方差分析。

2 结果

2.1各组体重对比 给药前及给药14 d，各组体重差异无统计学意义(P>0.05)。给药7 d除阳性对照组外，各实验组体重均显著低于空白对照组(P<0.05)。见表1。

2.2各组血糖水平对比 各实验组血糖均显著高于空白对照组(P<0.05)，表明造模成功。给药7 d,低、中、高剂量组及阳性对照组血糖均显著低于给药前(P<0.05)。给药14 d，除野菊花组外，其余实验组血糖均显著低于给药前(P<0.05)，且以高剂量组血糖最低。见表2。

表1 各组不同时间体重比较

表2 各组不同时间血糖水平比较

2.3各组血生化指标和肝脏指数对比 各实验组ALT显著高于空白对照组(P<0.05)，低、中、高剂量组及阳性对照组ALT显著低于松黄组和野菊花组(P<0.05)。各实验组AST显著高于空白对照组(P<0.05)，各实验组间AST差异无统计学意义(P>0.05)。阳性对照组、松黄组、低剂量组、中剂量组TC显著高于空白对照组(P<0.05)，野菊花组、高剂量组TC与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。除高剂量组TG与空白对照组差异无统计学外(P>0.05)，其余实验组TG均显著高于空白对照组(P<0.05)。各实验组肝脏指数显著高于空白对照组(P<0.05)，高剂量组肝脏指数显著高于松黄组(P<0.05)。见表3。

表3 各组血生化指标水平比较

3 讨 论

四氧嘧啶作用于胰岛的β细胞，能够中止胰岛素分泌而引起动物实验性四氧嘧啶糖尿病〔7〕。四氧嘧啶通过产生超氧自由基选择性地破坏胰岛β细胞，并使细胞内DNA 损伤，同时激活多聚二磷酸腺苷(ADP)核糖体合成酶的活性，进一步致使mRNA 功能受损引起细胞死亡，形成胰岛素依赖性糖尿病。

西医治疗糖尿病存在耐受性低、药物不良反应多、依赖性强等问题。中药通过多成分、多靶点、多效应及多功能的作用特点，已成为当前治疗糖尿病药物研究的新兴方向〔8〕。研究发现，松黄对降低血糖有奇效〔9～11〕，同时佐以野菊花使松黄作为君药的作用进一步发挥。

本研究表明，松黄和野菊花及其配伍能够在一定程度上降低胰岛素依赖性糖尿病小鼠的空腹血糖，且效果随配伍药物浓度的升高而呈正相关。此外松黄和野菊花配伍能够有效降低血清中TG含量与ALT水平，对缓解糖尿病典型的“三多一少”症状，对预防糖尿病并发症起良性作用。但该配伍对血清AST水平干预效果不明显，表明该配伍对四氧嘧啶致糖尿病小鼠的肝脏损伤无修复或保护作用。