白三烯A4水解酶基因多态性rs17025122检测在老年COPD患者中的临床价值

胡慧芳 刘明 张青 冯契靓 赵云峰 雷撼 崔栋慧

(1上海杨思医院呼吸科，上海 200126；2上海市浦东新区浦南医院呼吸科)

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是呼吸科常见病、多发病〔1，2〕，中国人群流调数据结果显示，40岁以上人群COPD患病率13.7%〔3〕。白三烯(LT)与COPD的发病有一定关系〔4〕。白三烯A4水解酶(LTA4H)能够催化生成白三烯(LT)B4，而LTB4与支气管黏膜细胞膜上的 G蛋白受体结合后，能够导致气道产生炎症〔4，5〕。LTA4H上游启动子的单核苷酸多态性(SNP)rs17025122与COPD病情进展有关〔5，6〕。在COPD发病过程中，LTA4H在气道黏膜有一定表达量，香烟中的烟雾颗粒能够诱导气道上皮细胞LTA4H的表达〔7〕。本研究旨在探讨LTA4H基因多态性rs17025122检测在COPD患者中的临床价值。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取上海市浦东新区浦南医院及上海杨思医院呼吸科病房2017年9月至2020年1月老年COPD患者300例，分为COPD急性加重(AECOPD)组及对照组(支气管扩张、社区获得性肺炎患者)各150例。AECOPD患者符合2017年GOLD指南制定的AECOPD标准〔8〕；排除标准为：①心、肝、肾功能不全；②血液系统恶性疾病；③肺感染性疾病、肺间质性疾病；④支气管扩张症、支气管哮喘；⑤有心肌梗死史、心脏、胸部及腹部外科手术史、眼底出血等；⑥各系统晚期肿瘤患者；⑦存在纳入本研究禁忌者。

AECOPD组男104例，女46例，年龄61～75岁(中位数62.5岁)；对照组男96例，女54例，年龄60～77岁(中位数64.8岁)。对照组包括80例支气管扩张急性加重患者、70例社区获得性肺炎患者，入组患者符合支气管扩张或社区获得性肺炎专家共识、指南〔9，10〕。另外，两组各自分为两个亚组，分别为吸烟组及不吸烟组，其中AECOPD组包括吸烟组110例、不吸烟组40例；支气管扩张患者中吸烟组43例、不吸烟组37例；社区获得性肺炎患者中吸烟组40例、不吸烟组30例。所有入组研究对象签署知情同意书，且本研究获得上海市浦东新区浦南医院伦理委员会批准。外周血LTA4H rs17025122基因多态性测定应用imLDR多重连接酶SNP分型检测技术〔11〕，测定每例患者治疗前、治疗10 d后的动脉血气，测定患者肺功能第1秒用力呼气容积(FEV1)、FEV1%及6 min步行距离(6MWT)、慢性阻塞性肺病评估测试(CAT)问卷评分。

1.2基因位点测定 采集患者清晨空腹静脉血4 ml，置于-80℃冰箱内保存。有关引物序列如下：rs17025122位点上游引物5′-AGCTTTTAGGACAACCTGGGAAGTG-3′；下游引物5′-TGCCCTTTTAAGGGAAGCATTTG-3′；连接引物序列rs17025122FG：5′-TTCCGCGTTCGGACTGATATTGGGAAGTGAGAAGC-AACCAAGG-3′；rs17025122FA：5′-TACGGTTATTC-GGGCTCCTGTTGGGAAGTGAGAAGCAACCAGGA-3′；rs17025122FP：5′-TTTGTACAGCAAAACAAGTCACACCAT-3′。

1.3CAT评分测定 CAT问卷共8项内容，包括患者症状、活动能力等方面，CAT分值0～40分，其中0～10分为轻微影响，11～20分为中等影响，21～30分为严重影响，31～40分为非常严重影响〔12〕。

1.4统计学处理 采用SPSS21.0软件进行LSD-t检验、Hardy-Weinberg平衡定律、χ2检验及Logistic回归分析。

2 结 果

2.1Hardy-Weinberg平衡检验 rs17025122位点的基因型在AECOPD组与对照组之间的分布符合 Hardy-Weinberg平衡，有群体代表性(P=0.435，P>0.05有意义)。 本研究选择的rs17025122位点基因型，GG为野生型、AG为变异杂合子、AA为变异纯合子。

2.2两组rs17025122位点基因型频率比较 两组rs17025122位点基因型频率分布差异有统计学意义(P<0.05)，与野生型GG基因型相比较，AG突变基因型显著增加了COPD患病风险，见表1。

表1 两组rs17025122位点基因型频率比较〔n(%)，n=150〕

2.3两组rs17025122位点基因型的亚组分析 两组rs17025122位点基因型频率差异有统计学意义(P<0.05)，且在吸烟亚组中，相较于GG基因型，AG基因型显著增加了COPD患病风险，见表2。

2.4两组治疗前后有关指标比较 与对照组不吸烟患者相比，对照组吸烟患者pH值、PaO2、PaCO2、FEV1、FEV1%、6MWT、CAT评分差异均无统计学意义(均P>0.05)。与AECOPD不吸烟患者治疗前相比，AECOPD组吸烟患者pH值、PaO2、PaCO2差异均无统计学意义(均P>0.05)，而FEV1、FEV1%、6MWT、CAT评分差异均有统计学意义( 均P<0.05)。两组治疗前后上述有关数据差异均有统计学意义( 均P<0.05)。相较于对照组治疗前，AECOPD患者治疗前pH值、PaO2差异均无统计学意义(均P>0.05)；而PaCO2、FEV1、FEV1%、6MWT、CAT评分差异均有统计学意义(P均<0.05)。相较于对照组治疗后，AECOPD患者治疗后pH值、PaO2、PaCO2差异均无统计学意义(均P>0.05)；而FEV1、FEV1%、6MWT、CAT评分差异均有统计学意义(均P<0.05)。见表3。

表2 各组rs17025122位点基因型的亚组分析〔n(%)〕

表3 对照组与AECOPD组治疗前后有关指标的比较

3 讨 论

基因诊断和精准治疗已成为当今医学研究的重点和热点，为了达到对COPD患者个体化精确治疗的目的，提高COPD的诊治水平，寻找有效的基因靶点及研究有效基因靶点与环境的关系是目前COPD的研究热点之一。

本研究结果说明，外周血LTA4H基因多态性rs17025122位点测定结果显示，AG基因型突变显著增加了COPD的患病风险。吸烟的COPD患者存在明显的AG突变基因型，说明吸烟一方面可能是导致吸烟者外周血LTA4H基因多态性rs17025122位点AG突变基因型表达的诱因，另一方面是吸烟者发展为COPD的重要原因，相较于不吸烟的COPD患者，吸烟的COPD患者肺功能更差、6MWT更短、CAT评分更高。

综上，通过LTA4H基因多态性rs17025122位点测定，外周血rs17025122位点AG基因型突变显著增加了COPD患病风险。与不吸烟的COPD患者相比，吸烟的COPD患者有更高的AG突变基因型表达、更差的肺功能、更短的6MWT及更高的CAT评分。本研究存在的不足之处是单中心、小样本临床研究，希望以后进行多中心、大样本的临床研究，为临床医生提供更多的科学依据。