苍耳子化学成分及其对腺样体的影响

张灵敏，李静波，蔡纪堂，郑琳靖

(河南省中医院，河南 郑州 450002)

苍耳子为菊科植物苍耳XanthiumsibiricumPatr.的成熟带总苞的果实[1]。主要分布于河南、河北、内蒙古、辽宁等地。苍耳子性温，味甘苦辛，有毒，具有发散风寒、宣通鼻窍、祛风止痛的功效，用于鼻渊、湿痹拘挛、风疹瘙痒等。苍耳子主要成分包括蒽醌、黄酮类、酚酸类、萜类、木脂素类、噻嗪类、甾体类[2]。现代药理作用显示[3]，苍耳子具有抗炎、抗病原微生物、抗氧化、抗突变、抗肿瘤、镇痛、清除自由基、提高机体免疫力等作用。本研究对苍耳子90%乙醇提取物进行分离、纯化，得到12个化合物，所用化合物均为首次从苍耳子中分离得到，化合物5、9可抑制腺样体细胞的增殖。

1 材料

Bruker AVANCE NEO型核磁共振波谱仪、AVANCE NEO型质谱仪(德国Bruker 公司)；Polartronic touch旋光仪(德国Schmidt haensch公司)；PLT1300型超声波清洗器(济南好来宝医疗器材有限公司)；MLKHYF1500S型全自动离心机(浙江纳德科学仪器有限公司)；UV-254型暗箱式紫外分析仪(德国Sigma公司)；YPF-267L型分析天平(美国Thermo 公司)；100～200、300～400目硅胶(青岛海洋化工厂)；SephadeX LH-20凝胶(德国Eppendorf公司)；PLT96型旋转蒸发仪(菏泽嘉赢化工设备有限公司)。胶原酶(上海复申生物科技有限公司)；二甲基亚砜(DMSO，上海百运渡生物科技有限公司)；噻唑蓝(MTT，湖北健楚生物医药有限公司)；苯环喹溴铵(四川维克奇生物科技有限公司)。所用试剂均为分析纯。

苍耳子采自河南省郑州市，经河南中医药大学第二附属医院李静波教授鉴定为菊科植物苍耳XanthiumsibiricumPatr.的成熟带总苞的果实。

2 提取与分离

取苍耳子21.6 kg，粉粹后，加入8倍体积的90%乙醇溶液浸泡6 d，然后加热回流提取3次，每次2 h。收集提取液，经减压浓缩得苍耳子浸膏2.4 kg。将浸膏超声分散于蒸馏水，采用等体积的石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，回收溶剂，得石油醚萃取浸膏(Fr.A)157.2 g、二氯甲烷萃取浸膏 (Fr.B) 171.3 g、丙酮萃取浸膏 (Fr.C) 205.4 g、正丁醇萃取浸膏(Fr.D)227.3 g。取Fr.B，采用硅胶柱层析分离，以石油醚-二氯甲烷-丙酮 (80∶20∶0～50∶50∶0～0∶90∶10)梯度洗脱，得到8个组分(Fr.B1～Fr.B8)。取Fr.B3 (6.5 g)，采用硅胶柱层析分离，以石油醚-二氯甲烷-乙酸乙酯 (50∶50∶0～10∶90∶0～0∶80∶20) 梯度洗脱，得到6个流分Fr.B3-1～Fr.B3-6。Fr.B3-4 (715 mg) 经硅胶柱层析分离，以石油醚-丙酮 (30∶70) 洗脱，得化合物5(23 mg)、9(19 mg)；Fr.B3-5 (627 mg) 经硅胶柱层析分离，以石油醚-丙酮 (50∶50) 洗脱，得化合物3(27 mg)。取Fr.B5 (7.1 g)，采用硅胶柱层析分离，以石油醚-二氯甲烷-乙酸乙酯 (40∶60∶0～10∶90∶0～0∶90∶10) 梯度洗脱，得到7个流分Fr.B5-1～Fr.B5-7。Fr.B5-2 (648 mg) 经硅胶柱层析分离，以石油醚-丙酮 (20∶80) 洗脱，得化合物1(18 mg)；Fr.B5-6 (482 mg) 经硅胶柱层析分离，以石油醚-丙酮 (40∶60) 洗脱，得化合物7(18 mg)；Fr.B5-7 (513 mg) 经Sephadex LH-20柱，以氯仿-甲醇 (30∶70) 进行洗脱，得化合物2(19 mg)。取Fr.C，采用硅胶柱层析分离，以石油醚-二氯甲烷-乙酸乙酯(70∶30∶0～50∶50∶0～0∶30∶70) 梯度洗脱，得到7个组分 (Fr.C1～Fr.7)。取Fr.C2 (5.7 g)，采用硅胶柱层析分离，以石油醚-二氯甲烷-丙酮(40∶60∶0～10∶90∶0～0∶60∶40) 梯度洗脱，得到8个流分Fr.C2-1～Fr.C2-8。Fr.C2-2 (648 mg) 经硅胶柱层析分离，以石油醚-乙酸乙酯 (20∶80) 洗脱，得化合物4(28 mg)；Fr.C2-Fr.6 (764 mg) 经结晶、重结晶，得化合物12(21 mg)。取Fr.C4 (6.4 g)，采用硅胶柱层析分离，以石油醚-二氯甲烷-丙酮 (30∶70∶0～10∶90∶0～0∶40∶60) 梯度洗脱，得到9个流分Fr.C4-1～Fr.C4-9。Fr.C4-3 (516 mg) 经硅胶柱层析分离，以石油醚-丙酮 (20∶80) 洗脱，得化合物6(21 mg)；Fr.C4-7 (764 mg)，经Sephadex LH-20柱，以氯仿-甲醇 (30∶70) 进行洗脱，得化合物8(31 mg)。取Fr.D，采用硅胶柱层析分离，以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇 (90∶10∶0～50∶50∶0～0∶20∶80) 梯度洗脱，得到6个组分 (Fr.D1～6)。取Fr.D4 (9.1 g)，采用硅胶柱层析分离，以二氯甲烷-丙酮-甲醇 (30∶70∶0～10∶80∶10～0∶30∶70) 梯度洗脱，得到5个流分Fr.D4-1～Fr.D4-5。取Fr.D4-2 (682 mg)，经Sephadex LH-20柱，以氯仿-甲醇 (30∶70) 进行洗脱，得化合物10(31 mg)、11(24 mg)。

3 结构鉴定

化合物2：白色粉末 (甲醇)，ESI-MSm/z:399.7[M+Na]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ:5.31 (1H，s，H-14)，4.03 (1H，t，J=9.6 Hz，H-15)，3.91 (1H，t，J=9.6 Hz，H-16a)，3.78 (1H，m，H-2)，3.65 (1H，t，J=9.6 Hz，H-16b)，3.57 (1H，d，J=9.6 Hz，H-19a)，3.22 (1H，d，J=9.6 Hz，H-19b)，1.42 (3H，s，H-22)，1.30 (3H，s，H-23)，0.97 (3H，s，H-18)，0.73 (3H，s，H-17)，0.69 (3H，s，H-20);13C-NMR (150 MHz，CD3OD)δ:49.2 (C-1)，64.1 (C-2)，43.7 (C-3)，40.2 (C-4)，54.6 (C-5)，23.1 (C-6)，37.2 (C-7)，139.2 (C-8)，49.6 (C-9)，40.8 (C-10)，22.4 (C-11)，34.2 (C-12)，36.1 (C-13)，128.3 (C-14)，80.2 (C-15)，64.1 (C-16)，25.3 (C-17)，26.4 (C-18)，65.1 (C-19)，18.6 (C-20)，109.4 (C-21)，27.3 (C-22)，26.2 (C-23)。上述数据与文献[6]基本一致，故鉴定为isopropylidenkirenol。

化合物4：白色粉末 (甲醇)，ESI-MSm/z:200.8[M+Na]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ:4.81 (1H，d，J=9.6 Hz，H-1′)，4.31 (1H，dd，J=9.6，6.3 Hz，H-5′)，4.03 (1H，dq，J=9.6，6.3 Hz，H-2)，3.91 (1H，dq，J=9.6，6.3 Hz，H-1)，3.76 (1H，brd，J=9.6 Hz，H-3)，1.35 (3H，t，J=9.6 Hz，H-4′);13C-NMR (150 MHz，CD3OD)δ:65.3 (C-1)，72.1 (C-2)，105.3 (C-1′)，75.2 (C-2′)，80.4 (C-3′)，71.4 (C-4′)，67.2 (C-5′)。以上数据与文献[9]基本一致，故鉴定为ethyl β-D-xylopyranoside。

化合物5：白色粉末(三氯甲烷)，ESI-MSm/z:310.2[M+Na]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ:7.68 (1H，d，J=9.6 Hz，H-4)，7.08 (1H，d，J=9.6 Hz，H-5)，6.72 (1H，d，J=9.6 Hz，H-6)，6.22 (1H，d，J=9.6 Hz，H-3)，5.13 (1H，dd，J=9.6，6.3 Hz，H-2′)，3.37 (1H，dd，J=9.6，6.3 Hz，H-3′)，3.19 (1H，dd，J=9.6，6.3 Hz，H-3′)，1.97 (3H，s，H-4″)，1.58 (3H，s，1″-CH3)，1.39 (3H，s，1″-CH3);13C-NMR (150 MHz，CD3OD)δ:130.2 (C-1)，156.1 (C-2)，115.8 (C-3)，148.2 (C-4)，126.2 (C-5)，106.8 (C-6)，166.2 (C-7)，113.5 (C-8)，150.1 (C-9)，115.2 (C-10)，106.8 (C-1′)，90.2 (C-2′)，30.1 (C-3′)，84.1 (C-1″)，169.2 (C-3″)，26.2 (C-4″)，27.1 (H3C-1″)，20.8 (H3C-4″)。以上数据与文献[10]基本一，故鉴定为columbianetin acetate。

化合物6：白色粉末 (甲醇)，ESI-MSm/z:552.7[M+Na]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ:7.58 (2H，d，J=9.6 Hz，H-7′，7″)，6.95 (2H，m，H-2，2′)，6.72 (2H，m，H-6′，6″)，6.48 (2H，m，H-5′，5″)，6.07 (2H，d，J=9.6 Hz，H-8′，8″)，5.64 (1H，m，H-5)，5.02 (1H，dd，J=9.6，6.3 Hz，H-4)，4.37 (1H，m，H-3)，3.65 (3H，s，-OCH3-10);13C-NMR (150 MHz，CD3OD)δ:75.2 (C-1)，36.8 (C-2)，66.1 (C-3)，70.6 (C-4)，70.4 (C-5)，39.8 (C-6)，176.9 (C-7)，101.4 (C-8)，170.3 (C-9)，127.5 (C-1′)，114.2 (C-2′)，46.3 (C-3′)，152.4 (C-4′)，18.1 (C-5′)，123.1 (C-6′)，147.2 (C-7′)，115.3 (C-8′)，129.6 (C-1″)，115.4 (C-2″)，46.9 (C-3″)，149.2 (C-4″)，118.1 (C-5″)，123.0 (C-6″)，149.3 (C-7″)，115.2 (C-8″)，170.4 (C-9″)，55.2 (H3CO-10)。上述数据与文献[11]基本一致，故鉴定为4，5-二咖啡酰基奎宁酸甲酯。

化合物7：白色粉末 (三氯甲烷)，285.2[M+Na]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ:11.07 (1H，s，8-OH)，6.51 (1H，d，J=9.6 Hz，H-7)，6.37 (1H，d，J=9.6 Hz，H-5)，6.09 (1H，s，H-4)，4.02 (3H，s，H3CO-9)，2.61 (2H，t，J=9.6 Hz，H-1′)，1.81 (2H，m，H-2′)，1.37 (2H，m，H-3′)，1.28 (2H，m，H-4′)，0.91 (3H，t，J=9.6 Hz，H-5′);13C-NMR (150 MHz，CD3OD)δ:166.8 (C-1)，153.1 (C-2)，161.2 (C-3)，104.2 (C-4)，100.3 (C-5)，166.1 (C-6)，102.4 (C-7)，165.1 (C-8)，34.2 (C-1′)，28.1 (C-2′)，30.4 (C-3′)，23.4 (C-4′)，15.1 (C-5′)，138.2 (C-4a)，100.2 (C-8a)，57.3 (H3CO-9)。以上数据与文献[12]基本一致，故鉴定为8-hydroxy-6-methoxy-3-pentylisocoumarin。

化合物8:白色粉末 (丙酮)，ESI-MSm/z:441.2[M+Na]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ:6.72 (4H，s，H-2′，6′，2″，6)，5.52 (2H，s，OH)，4.91 (2H，d，J=9.6 Hz，H-2，6)，3.91 (12 H，s，H3CO-4)，3.81 (2H，m，H-4a，8a)，3.62 (2H，m，H-4b，8b)，3.12 (2H，m，H-1，5);13C-NMR (150 MHz，CD3OD)δ:54.2 (C-1)，86.1 (C-2)，74.6 (C-3)，70.8 (C-4)，54.2 (C-5)，86.1 (C-6)，64.2 (C-7)，70.8 (C-8)，132.4 (C-1′)，104.2 (C-2′)，147.2 (C-3′)，135.1 (C-4′)，147.2 (C-5′)，104.2 (C-6′)，132.4 (C-1″)，104.2 (C-2″)，147.2 (C-3″)，135.1 (C-4″)，147.2 (C-5″)，104.2 (C-6″)，57.2 (H3CO-4)。以上数据与文献[13]基本一致，故鉴定为diasyringaresinol。

化合物9:白色粉末 (三氯甲烷)，ESI-MSm/z:413.1[M+Na]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ:7.25 (1H，t，J=9.6 Hz，H-3)，5.58 (1H，d，J=9.6 Hz，H-1)，5.42 (1H，m，H-8)，5.09 (1H，m，H-10a)，4.96 (1H，m，H-10β)，4.68 (1H，d，J=9.6 Hz，H-1′)，4.02 (1H，m，H-6′a)，3.68 (1H，m，H-6′β)，3.58 (2H，m，H-6)，3.41～3.02 (4H，m，H-2′，3′，4′，5′)，2.93 (1H，dd，J=9.6，6.3 Hz，H-5)，2.31 (1H，q，J=9.6 Hz，H-9);13C-NMR (150 MHz，CD3OD)δ:97.1 (C-1)，90.8 (C-2)，153.1 (C-3)，110.3 (C-4)，28.1 (C-5)，36.3 (C-6)，169.3 (C-7)，134.1 (C-8)，46.3 (C-9)，119.4 (C-10)，176.3 (C-11)，103.1 (C-1′)，74.1 (C- 2′)，78.2 (C-3′)，70.8 (C-4′)，77.3 (C-5′)，62.8 (C-6′)。以上数据与文献[14] 基本一致，故鉴定为secologanoside。

化合物10:白色粉末 (丙酮)，ESI-MSm/z:293.1[M+Na]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ:2.43 (2H，t，J=9.6 Hz，H-2)，1.69 (2H，m，H-3)，1.28 (26H，brs，H-4～16)，0.87 (3H，t，J=9.6 Hz，17-CH3);13C-NMR (150 MHz，CD3OD)δ:179.4 (C-1)，33.7 (C-2)，32.4 (C-3)，21.7～30.2 (13×CH2)，15.2 (H3C-17)。以上数据与文献[15]基本一致，故鉴定为十七烷酸。

化合物11:白色粉末 (三氯甲烷)，ESI-MSm/z:321.2[M+Na]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ:2.41 (2H，t，H-2，3)，1.72 (2H，m，H2C-1)，1.31 (30H，m，H-4～13)，0.79 (3H，t，16-CH3);13C-NMR (150 MHz，CD3OD)δ:179.6 (C-1)，36.6 (C-2)，28.1 (C-3)，25.4～27.6 (12×CH2)，21.3 (C-18)，12.8 (C-19)。以上数据与文献[16]基本一致，故鉴定为十九烷酸。

化合物12:白色粉末 (丙酮)，ESI-MSm/z:272.9[M+Na]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ:6.52 (1H，d，J=9.6 Hz，H-13a)，5.61 (1H，d，J=9.6 Hz，H-13b)，4.23 (1H，m，H-8)，4.02 (1H，t，J=9.6 Hz，H-4)，0.92 (3H，d，J=9.6 Hz，H-14)，0.77 (3H，s，H-15);13C-NMR (150 MHz，CD3OD)δ:45.3 (C-1)，25.1 (C-2)，30.4 (C-3)，85.3 (C-4)，44.7 (C-5)，38.3 (C-6)，49.1 (C-7)，83.7 (C-8)，46.4 (C-9)，30.2 (C-10)，139.2 (C-11)，171.2 (C-12)，119.2 (C-13)，20.3 (C-14)，26.3 (C-15)。上述数据与文献[17]基本一致，故鉴定为2-desoxy-4-epi-pulchellin。

4 化合物对腺样体肥大细胞的影响

收集2021年5～6月在河南省中医院就诊的腺样体肥大患儿20例，行腺样体肥大切除术取腺样体。腺样体经0.9%氯化钠冲洗，进行组织粉粹，经胶原酶溶解后，于37.0 ℃恒温箱中培养2 h，10 ℃下离心(2 000 r/min，10 min)，吸除上清液。加入含DMEM培养皿，于37.0 ℃恒温箱中培养6 h，取悬浮细胞移至96 孔板中，于37.0 ℃恒温箱中继续培养24 h，然后加入生长因子继续培养12 d，取腺样体肥大细胞，分为实验组(含60 mg/L LPS+0.1、1、5、10、50 mg/L化合物)；空白组(含60 mg/L LPS+生理盐水)；阳性组(含60 mg/L LPS +2 mg/mL苯环喹溴铵)。参考文献[18]，采用 MTT 法检测化合物2、5、8～9对腺样体肥大细胞的影响。将腺样体肥大细胞移至96孔板中，于37.0 ℃恒温箱中继续培养24 h后，依次加入60 mg/L LPS+0.1、1、5、10、50 mg/L化合物；60 mg/L LPS+生理盐水；60 mg/L LPS +2 mg/mL苯环喹溴铵。培养24 h，加入5 mg/mL MTT溶液10 μL，继续培养5 h，弃去上层培养液，每孔分别加入90 μL DMSO，轻轻振荡后，于520 nm波长下测定光密度，计算对腺样体肥大细胞的抑制率及IC50值。见表1。

表1 各化合物对腺样体肥大细胞的抑制作用(%)Tab.1 Inhibitory effects of compounds on adenoid mast cells(%)

5 讨论

苍耳子为临床常用的药物，本实验从苍耳子中分离得到11个化合物，均为首次从该植物中分离得到，其中化合物2、3、5、9、11为首次从该属植物中分离得到。研究化合物2、5、8～9对腺样体肥大细胞的影响，结果显示化合物5、9对腺样体肥大细胞增殖具有抑制作用。以期本研究丰富了苍耳子化学成分的资料库，为耳鼻喉科的新药研发提供参考。