胃癌组织中lncRNA UCA1、miR-590-3p 表达及与病理参数和预后的关系

李艳梅 李 伟 王海芹

1.河北省唐山市中医医院腔镜中心，河北唐山 063000；2.河北省唐山市中医医院中西医结合科，河北唐山 063000

胃癌是起源于胃黏膜上皮的恶性肿瘤，是全球癌症死亡的第四大原因，2020 年我国胃癌发病率和死亡率分别为47.9 万、37.4 万[1-3]。非编码RNA 是一类不能反映为蛋白质的RNA，可作为促癌基因或抑癌基因的转录调控分子，参与肿瘤发生和发展[4]。长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）尿路上皮癌相关基因1（urothelial cancer associated 1，UCA1）与微小RNA（micro RNA，miR）-590-3p 是新近发现的非编码RNA，研究报道lncRNA UCA1 在非小细胞肺癌、子宫内膜癌等恶性肿瘤中异常表达[5-6]，miR-590-3p在宫颈鳞状细胞癌、肝细胞癌等恶性肿瘤中异常表达，均与癌细胞增殖、迁移、侵袭有关[7-9]。本研究分析胃癌组织中lncRNA UCA1、miR-590-3p 表达及与病理参数和预后的关系，以期为临床评估患者病情进展和预后提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017 年1 月至2018 年7 月河北省唐山市中医医院收治的107 例胃癌患者，收集术中切除部分癌组织和距离＞5 cm 的癌旁组织，液氮冷冻至检测。纳入标准：①经术后病理检查确诊为胃癌；②初诊，未接受任何抗肿瘤治疗；③可接受随访；④病理参数和随访资料完整；⑤患者及家属均知情本研究。排除标准：①合并其他部位肿瘤；②年龄＜18 岁；③合并严重心、肝、肾等脏器疾病；④全身感染性疾病。患者出院后通过门诊或电话方式随访3 年，随访至2021 年7 月，统计术后3 年累积生存率，随访期间死亡或随访截止则研究结束。本研究经河北省唐山市医院伦理委员会批准。

1.2 研究方法

取50 mg 组织液氮中研磨，TRIzol 试剂盒（厂家：上海创赛科技有限公司，批号：15589226）提取组织中总RNA，Narodrop 验证cDNA 浓度及纯度，使OD260/OD280为1.8～2.0，Takara 试剂盒（厂家：武汉科昊佳生物科技有限公司，批号：DRR420A）转录合成cDNA，使用qRT-PCR 试剂盒（厂家：北京宝日医生物技术有限公司，批号：639505）进行qRT-PCR 扩增。lncRNA UCA1 正向引物序列5’-TTTGCCAGCCTCAGCTTAAT-3’，反向引物序列5’-TTGTCCCCATTTTCCATCAT-3’，长度22 bp；miR-590-3p 正向引物序列5’-GCGCTAATTTTATGTATAA-3’，反向引物序列5’-GTGCAGGGTCCGAGGT-3’，长度18 bp；lncRNA UCA1 内参β-actin 正向引物序列5’-GACCTCTATGCCAACACAGT-3’，反向引物序列5’-AGTACTTGCGCTCAGGAGGA-3’；miR-590-3p 内参U6 正向引物序列5’-AGAGCCTGTGGTGTCCG-3’，反向引物序列5’-CA -TCTTCAAAGCACTTCCCT-3’。10.0 μl 反应体系：5.0 μl SYBR Premix Ex Taq；0.2 μl 上游引物；0.2 μl 下游引物；0.2 μl ROX 参考染料；1.0 μl cDNA 模板；3.4 μl 经DEPC 处理水。反应条件：95℃预变性90 s 循环1 次，再95℃变性30 s、63℃退火30 s、72℃延伸15 s 循环40 次，反应结束后得到各反应管Ct，采用2-ΔΔCt法计算组织中lncRNA UCA1 和miR-590-3p 的相对表达量。

1.3 统计学方法

采用SPSS 27.0 对数据进行统计分析，计数资料以例数和百分比表示，比较采用χ2检验；计量资料均呈正态分布，以均数±标准差（）表示，比较采用t检验；Pearson 相关性分析明确相关性；采用K-M 法绘制生存曲线，组间生存率采用log-rank 检验。以P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 胃癌组织与癌旁组织中lncRNA UCA1、miR-590-3p 表达比较及相关性

胃癌组织中lncRNA UCA1 表达高于癌旁组织，miR-590-3p 表达低于癌旁组织（P ＜0.05）。见表1、图1。Pearson 相关性分析显示，胃癌组织中lncRNA UCA1 与miR-590-3p 表达呈负相关（r=-0.720，P ＜0.001）。

表1 胃癌组织与癌旁组织中lncRNA UCA1、miR-590-3p 表达比较（）

表1 胃癌组织与癌旁组织中lncRNA UCA1、miR-590-3p 表达比较（）

注 lncRNA：长链非编码RNA；UCA1：尿路上皮癌相关基因1；miR：微小RNA

图1 胃癌组织与癌旁组织中lncRNA UCA1、miR-590-3p 电泳图

2.2 lncRNA UCA1、miR-590-3p 表达与胃癌患者病理参数的关系

不同临床病理分期和淋巴结转移患者lncRNA UCA1 和miR-590-3p 表达比较，差异有统计学意义（P ＜0.05）。见表2。

表2 lncRNA UCA1、miR-590-3p 表达与胃癌患者病理参数的关系（）

表2 lncRNA UCA1、miR-590-3p 表达与胃癌患者病理参数的关系（）

注 lncRNA：长链非编码RNA；UCA1：尿路上皮癌相关基因1；miR：微小RNA

2.3 lncRNA UCA1、miR-590-3p 表达与胃癌患者生存率的关系

随访3 年，107 例胃癌患者累积生存率为63.55%（68/107），以胃癌组织中lncRNA UCA1、miR-590-3p表达均值为基准将患者分为高低表达组。高lncRNA UCA1 表达组（≥1.042，n=53）累积生存率为52.83%（28/53），低lncRNA UCA1 表达组（＜1.042，n=54）累积生存率为74.07%（40/54），高miR-590-3p 表达组（≥0.974，n=52）累积生存率为76.92%（40/52），低miR-590-3p 表达组（＜0.974，n=55）累积生存率为50.91%（28/55）。K-M 生存曲线显示，高lncRNA UCA1 表达组累积生存率低于低lncRNA UCA1 表达组，高miR-590-3p 表达组累积生存率高于低miR-590-3p 表达组，差异有统计学意义（Log-rank χ2=8.140、11.624，P=0.004、0.001）。见图2。

图2 不同lncRNA UCA1、miR-590-3p 表达胃癌患者K-M 生存曲线

3 讨论

胃癌是消化道常见恶性肿瘤，其发生是从胃黏膜至慢性胃炎、萎缩性胃炎、肠上皮化生、不典型增生、癌变的连续过程，早期常无症状，大多患者确诊时已达中晚期，由于恶性程度较高，转移率和复发率高，预后较差[10-11]。lncRNA UCA1 定位于人染色体19p13.12，最初于膀胱移行细胞癌细胞中发现，后续研究表明，lncRNA UCA1 参与多种恶性肿瘤发生发展[12-14]。本研究结果显示，胃癌组织中lncRNA UCA1 表达上调，并与临床病理分期和淋巴结转移有关，提示lncRNA UCA1在胃癌中也可能作为一种促癌基因参与胃癌发生，其机制可能与lncRNA UCA1 促进胃癌细胞上皮-间充质转化有关。上皮-间质转化是上皮来源恶性肿瘤细胞获得迁移和侵袭能力的重要生物学过程，锌指E 盒结合同源框1（Zinc E-box-binding homobox 1，ZEB1）能通过调控上皮间质转化过程参与多种恶性肿瘤的发生、发展[15]。ZEB1 为miR-204 下游靶基因，miR-204可负向调控ZEB1 表达，抑制肿瘤细胞上皮-间质转化[16]。钟定福等[17]研究显示，lncRNA UCA1 能通过抑制miR-204 上调ZEB1 表达，促进胃癌细胞上皮-间质转化。本研究进一步发现，高lncRNA UCA1 表达组术后3 年累积生存率明显降低，提示lncRNA UCA1可能成为胃癌患者预后评估的生物标志物。

miR-590-3p 定位于人染色体7q11.23，已有研究发现其在多种恶性肿瘤中呈异常表达，如miR-590-3p 在胰腺癌中表达上调[18-20]，但其在结直肠癌中表达下调[21]。本研究显示，胃癌组织中miR-590-3p 表达下调，并与临床病理分期和淋巴结转移有关，提示miR-590-3p 在胃癌中也可能作为一种抑癌基因参与胃癌发生，其低表达与胃癌恶性进展有关，与刘明辉等[22]报道一致。其机制可能与miR-590-3p 能负向调节环磷酸腺苷反应元件结合蛋白（cAMP-response element binding protein 1，CREB1）有关。CREB1 是新近发现的一种癌基因，能异常启动肿瘤相关基因转录，通过调节具有细胞增殖、分化、凋亡、细胞周期、抗凋亡、血管新生等功能的靶基因促进肿瘤细胞生长和增殖，参与包括胃癌在内的多种恶性肿瘤进展[23]。Gu 等[24]研究显示，miR-590-3p 能靶向抑制CREB1 表达，进而抑制胃癌细胞增殖、集落形成能力和侵袭。进一步分析发现，高miR-590-3p 表达组术后3 年累积生存率明显升高，提示miR-590-3p 亦可成为胃癌患者预后评估的生物标志物。lncRNA 对miRNA 具有海绵吸附作用，可吸附特定miRNA，干扰miRNA 对下游靶基因的调控[25]。本研究显示，胃癌组织中lncRNA UCA1 与miR-590-3p 表达呈负相关，提示二者可能共同影响患者预后，考虑与miR-590-3p 为lncRNA UCA1 调控靶点有关。Gu 等[24]通过双荧光素酶报告基因、放射免疫沉淀试验技术、RNA 下拉试验证实miR-590-3p 为lncRNA UCA1靶标，lncRNA UCA1 能负调控miR-590-3p 上调CREB1 表达，促进胃癌细胞增殖和侵袭。

综上所述，胃癌组织中lncRNA UCA1 高表达，miR-590-3p 低表达，与临床病理分期、淋巴结转移及预后有关，可能作为预后评估指标。但本研究样本量较少，随访时间较短，且关于两指标参与胃癌发生发展机制尚未完全明确，有待进一步研究。