原发性发育迟滞患儿血清维生素A、25-羟-维生素D3、维生素E 含量及其与神经发育的相关性

张樊 唐 鑫 张 敏 朱一可 刘思奇 任永颖 王 昕 王 琳 杨 健

1.首都儿科研究所附属儿童医院神经内科，北京 100020；2.中国人民解放军空军军医大学第一附属医院儿科，陕西西安 710032；3.首都儿科研究所生化免疫研究室，北京 100020；4.首都儿科研究所附属儿童医院保健科，北京 100020

发育迟滞（development delay，DD）用来描述儿童技能发育延迟，通常是指儿童与同龄儿童相比在运动、语言、社交等领域显著迟缓。国内研究显示，0～6 岁DD 的患病率为1.63%[1]；在国外，3～17 岁DD 的患病率为4.1%[2]。DD 缺乏有效的药物治疗，严重影响儿童健康，而原发性DD 无法明确病因更加受到关注。

原发性DD 的发病机制尚不明确，与环境、产前、围生期及产后多种因素有关。原发性DD 与营养素有着密切联系，尤其是维生素在神经发育、免疫功能中起到关键作用。维生素D 与中枢神经递质、脑内神经营养因子有关[3-5]，维生素D 缺乏是DD 发生的重要因素[6]。尽管尚无相关研究去揭示维生素A、维生素D、维生素E 与原发性DD 发生的关联，然而维生素A 与胚胎神经发育、脑内神经递质有关[7-9]；维生素E 在中枢神经系统功能活动及维持神经细胞完整性发挥着重要作用[10]。并且维生素A 和维生素D 可通过维生素D受体协同发挥生物活性[11]。本研究对33 例原发性DD患儿血清维生素A、维生素D、维生素E 含量进行测定，并分析其与神经发育的相关性，从营养素角度为原发性DD 的防治提供依据。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2019 年3 月至2020 年2 月首都儿科研究所附属儿童医院（以下简称“我院”）神经内科就诊的33 例原发性DD 患儿为原发性DD 组。纳入标准：①年龄<6 岁；②存在神经发育水平落后同时伴有适应功能缺陷；③采用《0 岁-6 岁儿童发育行为评估量表》[12]评估发育商（developmental quotient，DQ）<80 分；④患儿监护人均知情并签署知情同意书。排除标准：①通过影像学、遗传代谢学、基因学等检测明确病因；②近3 个月服用维生素A、维生素D 及维生素E 等维生素补充剂；③明确患有神经系统器质性病变、遗传代谢性疾病、神经发育障碍及神经精神类疾病等。另收取同期我院保健科门诊体检的同年龄段儿童30 名健康儿童作为健康对照组。本研究通过我院伦理委员会批准（批准文号：SHERLL 2016032）。

1.2 研究方法

1.2.1 研究工具 采用《0 岁-6 岁儿童发育行为评估量表》[12]，DQ≥80 分定义为神经发育正常，DQ<80 分定义为神经发育落后。

1.2.2 维生素含量测定 采用首都儿科研究所建立的高效液相色谱串联质谱法同时定量两组血清中的维生素含量。应用Waters ACQUITY UPLC/Zevo-TQS 分析系统，ACE Excel2 C18-PFP 色谱柱（50 mm×2.1 mm，2 μm），以0.1%甲酸水溶液为流动相A，0.1%甲酸甲醇溶液为流动相B，流速为0.55 ml/min，梯度洗脱[流动相条件为：0～6.50 min（71% B，0.55 ml/min），6.51～7.20 min（100% B，0.60 ml/min），7.21～8.00 min（71%B，0.55 ml/min）]，进样体积为10 μl，柱温为45℃，采用正离子电喷雾离子化，多反应监测模式，目标待测物定量离子通道分别为：维生素A、25-羟-维生素D3及维生素E 的MRM 采集参数分别为：M/Z 269.3-119.1、M/Z 383.45-257.2、M/Z 431.5-137.05。低、中、高3 个水平的质控样本批内及批间精密度RSD 为3.71%～13.42%，准确度范围为81.41%～117.85%。日内及日间RSD 均<15%，维生素室间质评样本准确度范围为85%～115%。维生素A、25-羟-维生素D3及维生素E加标回收率为83.24%～95.53%、88.44%～100.24%、95.97%～102.06%。

诊断标准：维生素A<0.70 μmol/L 为缺乏，0.70～1.05 μmol/L 为不足，＞1.05～1.75 μmol/L 为正常[13]；25-羟-维生素D3<50 nmol/L 为缺乏，50～75 nmol/L 为不足，>75 nmol/L 为正常[14]；维生素E<5 mg/L 为缺乏，5～7 mg/L 为不足，＞7～20 mg/L 为正常[15]。

1.3 统计学方法

采用SPSS 23.0 统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（）表示，两组间比较采用t 检验；计数资料用例数或百分率表示，组间比较采用χ2检验；采用Pearson 法进行相关性分析；危险因素分析采用logistic 回归分析。以P <0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组一般资料比较

两组一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。

表1 两组一般资料比较

2.2 两组维生素含量比较

原发性DD 组维生素A、25-羟-维生素D3含量低于健康对照组，差异有统计学意义（P <0.05）；两组维生素E 含量比较，差异无统计学意义（P >0.05）。见表2。

表2 两组维生素含量比较（）

表2 两组维生素含量比较（）

注 DD：发育迟滞

2.3 两组维生素不足率比较

原发性DD 组维生素A、25-羟-维生素D3及维生素E 不足率高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表3。

表3 两组维生素不足率比较[例（%）]

2.4 维生素含量与神经发育的关系

原发性DD 组大运动DQ 得分为（65.03±17.55）分，精细运动DQ 得分为（52.62±19.86）分，适应性DQ 得分为（56.10±18.01）分，语言DQ 得分为（46.66±18.52）分，社交DQ 得分为（49.90±15.59）分，总DQ 得分为（54.00±14.58）分。25-羟-维生素D3含量与精细运动DQ 得分呈正相关（P <0.05），与其他能区DQ 得分无相关性（P >0.05）；维生素A 及维生素E 含量与各能区DQ 得分无相关性（P >0.05）。见表4。

表4 维生素含量与神经发育的关系

2.5 logistic 回归分析结果

将“有原发性DD”赋值为1，“无原发性DD”赋值为0。结果显示，维生素A 及25-羟-维生素D3为原发性DD 的保护因素（P <0.05）。见表5。

3 讨论

3.1 维生素含量

本研究结果显示，原发性DD 组维生素A 含量显著低于健康对照组；维生素A 是原发性DD 的保护因素。赵兵等[16]研究结果显示，早期给予补充足量的维生素A，能够改善脑瘫高危儿童体格与神经发育，表明维生素A 对于神经发育起着关键作用[7-9]。考虑其原因可能为维生素A 主要通过视黄酸升高多巴胺受体-2 含量及影响5-羟色胺的合成[17-18]，进而控制黑质-纹状体通路及中脑侧被盖区-伏隔-前额叶皮层通路影响神经发育[19]。原发性DD 组25-羟-维生素D3含量低于健康对照组，与柯海劲等[20]和韦茹等[21]的研究结果一致。25-羟-维生素D3不足与神经发育不良有关[6]，具体机制在于其可通过上调神经生长因子对神经元的分化、成熟和生长发挥营养作用[22-25]。维生素E 主要参与中枢神经系统的功能活动、神经细胞的完整性和维持神经细胞膜的稳定性。本研究结果显示，两组维生素E 含量比较，差异无统计学意义（P ＞0.05），但原发性DD 组维生素E 含量较健康对照组低，且维生素E 不足率明显低于健康对照组。

3.2 维生素对神经发育的影响

维生素D 在大脑中广泛分布，在中枢神经系统中局部合成和代谢。同时脐血维生素D 与神经发育也有关联[26]。动物模型显示，维生素D 缺乏大鼠大脑皮质变薄，侧脑室扩大。这些均表明维生素D 与神经发育有重要联系。本研究结果显示，25-羟-维生素D3与原发性DD 患儿精细运动能区呈正相关，这与Darling等[25]和Sass 等[27]的研究结果一致。究其原因，维生素D 可以通过儿茶酚-O-甲基转移酶作用于大脑中的多巴胺能系统，而腹侧中脑多巴胺能神经元在运动发育的调制中发挥关键作用[28]。此外，维生素D 可增加纹状体和黑质的角质细胞源性神经营养因子进而对DA 神经元具有保护作用。本研究尚未显示维生素A、E 与神经发育的相关性，未来需通过纵向队列研究同时扩大样本量去揭示其与神经发育的相关性。

综上，原发性DD 患儿血清维生素A 和25-羟-维生素D3含量显著低于健康同龄儿童，血清25-羟-维生素D3缺乏对儿童精细运动的发育存在影响。25-羟-维生素D3缺乏或不足对于儿童神经系统发育的潜在影响值得关注。