化学发光法检测梅毒螺旋体特异性抗体的价值

黄燕敏 黎晓敏 王衬平 陈加家 刘新成

梅毒是由梅毒螺旋体（treponema pallidum，TP）引发的性传播性疾病，该病毒主要是通过人体中的黏膜或者破损的皮肤直接接触患者感染性病原体进行传播，持续时间可长达几年到几十年，一旦感染会引起全身性的病变及损害[1]。近年来，我国梅毒的整体患病率呈现上升的态势，在经济发展较好的地区尤为多见[2]。此外，梅毒还可通过血液的传播，目前已经成为患者手术前常规检查的项目。常规的酶联吸附试验用作初筛，操作时间比较长，不适合临床应用[3]。血清学诊断是目前梅毒螺旋体诊断的主要方法，检测血清中的TP抗体成为目前主要的手段，血清学诊断方法主要包括两种，第一种是非TP抗体血清试验，检测方法包括甲苯胺红不加热血清试验（tolulized red unheated serum test，TRUST）、快速血浆反应素环状卡片（rapid plasma reagin，RPR）、性病研究实验室实验等，主要是对类脂抗原抗体（反应素）进行试验；第二种是TP抗体血清试验，检测方法包括梅毒螺旋体明胶凝集试验（treponema pallidum particle assay，TPPA）、化学发光法（chemiluminescence immunoassay，CLIA）、梅毒螺旋体血凝试验等。CLIA主要是对血清梅毒特异性抗体进行检测，不仅能够大大缩短检测时间，而且灵敏度和特异性显著提高。基于此，本试验选取万江医院收治的1 000例术前患者的血清标本采用化学发光法进行检测，旨在评价其特异性，结果汇报如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

研究符合伦理学要求。选取2020年1—12月在万江医院进行常规术前检查患者1 000例，其中男性480例，女性520例，年龄1～85岁，平均年龄（45.67±7.42）岁。所有标本采集必须全部为空腹状态下抽取患者静脉血4 mL进行离心，其中离心机转速设置为3 500 r/min，半径设置为25 cm，离心时间设置为5 min，实施离心反应后，将上层清液取出，置于-20℃冰箱内冷藏、待检。

1.2 检测方法

仪器与试剂采用全自动免疫自动分析仪（德国西门子ADVIA Centaur XP）、梅毒特异性抗体检测试剂（德国西门子）进行检测，质控品、定标液均由德国西门子公司提供。具体判断标准如下：阳性：化学发光检测法S/CO值≥1.00，阴性：S/CO值＜1.00[4]。所有阳性标本必须统一采用同一种试剂进行复检，若经复检后显示结果仍为阳性者，则判断患者为初筛试验阳性，若检测结果为阴性，则不再使用TPPA方法进行补充检验，若检测结果为S/CO≥1，说明检测结果为疑似阳性，则需通过TPAA实施进一步验证。所有初筛试验阳性的标本进行附加的TRUST，TRUST试验中需要的试剂均由北京万泰生物药业股份有限公司提供，梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）试剂均由日本富士株式会社提供。根据实际说明书相关保准通过肉眼判读结果，若反应孔4中的孔中央有呈光滑纽扣状的细胞沉积，说明结果为阴性，若反应孔4中的孔中央出现不规则形状的细胞沉积，说明结果为阴性。振荡器、移液器等器材准备齐全备用。

1.3 统计学处理

数据处理采用SPSS 24.0统计学软件，计数资料以（n，%）描述，数据比较采用χ2检验，符合正态分布的计量资料以（±s）描述，P＜0.05说明差异有统计学意义。

2 结果

2.1 TRUST试验检测结果

医院共1 000份血清标本，共初步筛查出46份阳性标本，TRUST试验检测结果显示阳性的有20份，占43.48%，阴性26份。

2.2 TPPA试验检测结果

46份经TPPA试验复检后，38份为阳性，占82.61%，8份为阴性，占17.39%，经统计学分析特异性为99.82%（95%CI为99.71%～99.85%），阳性预测值为89.45%（95%CI为87.71%～91.75%）。

2.3 CLIA梅毒特异性抗体检测S/CO值与TRUST、TPPA检测结果

S/CO值≥10.00时100%为阳性，在S/CO值＜10.00时，TPPA试验阳性越来越低，该值与TPPA阳性比例呈正比。此外，S/CO值越低，TPPA阴性比例越高。TRUST试验中，最高稀释度为1∶256，TPPA试验阳性标本中，TRUST试验阳性18份，阴性20份，随着S/CO值不断增加，TRUST滴度≥1∶2逐渐增加；TPPA试验阴性标本中，TRUST试验阳性2份，阴性6份。经统计学软件分析，化学发光法检测梅毒螺旋体特异性抗体的特异性为99.85%（95%CI为99.86%～99.90%）。见表1。

表1 两组CLIA阳性标本S/O值TPPA试验结果

3 讨论

梅毒是经典性病中比较为常见的一种，主要由于TP感染所引起，早期可出现硬下疳、低热，也可能不出现任何症状，随着病情的发展，出现的临床症状比较多样和复杂，病情严重的患者还可能累及全身各器官，危及患者生命[5]。梅毒的传播途径主要是性传播，血液传播也较为多见，因此，术前患者在进行手术之前的常规检查中包括对术前患者进行梅毒特异性抗体血清标本的检测。

人体一旦被感染梅毒螺旋体之后，体内会产生两种抗体，一种是患者血清中的反应素，即抗脂质抗体，属于非特异性抗体，另一种是抗密梅毒螺旋体，属于特异性抗体[6-7]。在传统检测中，非特异性梅毒螺旋体抗体方法是常用检测方法，具有操作简单、稳定性高的特点，但是血中含有抗心磷脂抗体，在较多疾病中均可存在，如高血脂症、急性病毒性感染、怀孕妇女等，会影响检测结果的准确性。目前，采用血清学检测的方式检测梅毒特异性抗体是目前临床上比较常用的方法，试验方法具有高灵敏度与高特异性对检测梅毒是至关重要的[8]。CLIA是近年来伴随着关于梅毒螺旋体的抗原及基因工程研发成功而建立起来的梅毒特异性抗体的检测方法，其特点之一就是可检测细胞的杀菌功能，同时能够代谢和调理血清，针对性较强，可有效通过化学发光底物将传统显色底物进行取代，促进发光信号的增强，使传统方法中信号持续时间短的问题得以纠正，促进发光信号时间的延长，促进其灵敏度的提高[9-10]。CLIA是由美国雅培公司推出的，目前已经在国内部分实验室中大量应用，而且每个测试仅需要29 min，灵敏度与特异度均较高，其中敏感度最高能够得到100%，而且能够对抗体效价较低的弱阳性血清标本进行检测，优势显著。此外，梅毒试剂盒的研发工艺逐渐成熟，能够应用于多种梅毒螺旋体特异性蛋白抗原中，制备出固相抗原，对标记抗原进行设定，与样品中梅毒螺旋体抗体合作形成双抗体夹心抗体，对其进行洗涤，再加入化学发光底物液，测定其发光强度，根据临界值判断梅毒螺旋体特异性抗体的存在情况。但是CLIA作为一种筛查试验，也会存在一定假阳性，尤其是在梅毒低流行地区，假阳性的发生率比较高，因而检测结果容易受到影响。

筛查TP感染比较普遍的方法是TRUST，考虑到生物假阳性的现象，需要进行TPPA进行确认。相关研究[11-12]显示，TPPA试验具有灵敏度高、特异性强的优势，但是由于该试验操作步骤比较多，过程较为繁琐，对检测人员的要求较高，因而进行初筛有一定的困难，而TRUST试验可取长补短，在一定程度上将初筛进行简化，且灵敏度与特异性也较强，因此，TRUST试验是初筛梅毒特异性抗体标本的最佳选择之一。本研究显示，采用TRUST试验对术前患者进行常规血清抗体检查，能较为有效地初步筛选出阳性患者。究其原因，TRUST试验主要以心磷脂作为抗原的非特异性梅毒试验，主要以心磷脂为靶抗原的抗体有梅毒血清反应素、心磷脂抗体等[13]。因此，TRUST试验非常适合进行梅毒血清的初步筛选，关键还是在于其抗原的非特异性，经过该项试验结果显示阳性的患者并不一定是梅毒患者，但是TRUST试验可以较为准确地筛选出初步判定的阳性者。

有相关研究[14]指出，TPPA试验是进行梅毒血清抗体特异性复检的重要手段，虽然该方法操作为纯手工，操作流程复杂，对检测人员具有较高的技术要求，但其相比于TRUST试验具有更高的特异性及灵敏性，可以较大程度上提升试验的准确性，非常适合经过初步筛选判定为阳性的患者进行进一步检测筛查。本研究显示，将初筛的阳性患者再行TPPA试验，其中又检测出部分阴性患者，这充分体现了TPPA试验的临床应用价值。究其原因，TPPA试验检测的是梅毒螺旋体的IgM和IgG的混合抗体，主要是利用已经纯化的致病性强的抗密梅毒螺旋体，将其中的精制菌体成分包被于明胶颗粒上，因此，精确度比较高[15-16]。

在临床中进行梅毒血清学检测诊断时，假阳性一直以来是困扰医生的一个重要问题，人们对假阳性的关注度越来越高，TPPA复检甚至WB确证起到的至关重要的作用就是尽可能的避免或减少假阳性的出现，减少对患者产生的不良影响[17-19]。分析本文中的数据，结果显示S/O值为6.00时也并不是意味着TPPA试验的检测结果一定是阳性，同理，S/O值为3.00时也并不意味着TPPA试验的检测结果一定是阴性。有相关的报道指出，梅毒特异性抗体S/O值5.073的时候，抗体的特异性对相对达到100%，这就意味着，当S/O值≥5.073时患者不会出现假阳性[20-21]。但是在文章的研究中却发现S/O值≥5.073时也出现假阳性的患者，这可能与环境、地域差别等有一定关系，但是差别是比较微小的。

综上所述，化学发光法检测梅毒螺旋体特异性抗体的特异性较高，TPPA试验可作为临床常规实验室中梅毒螺旋体特异性抗体筛查试验的补充试验。