成纤维细胞生长因子受体3的表达预测膀胱癌预后

黄玉清，张 良，周海滨，李丹丹 (九江学院附属医院，江西 九江 332000)

膀胱癌作为临床常见泌尿科常见恶性肿瘤之一，在全世界癌症发病率排名中占据前十，且男性发病率显著高于女性，50～70岁是患者病症高发阶段。虽然当前针对膀胱癌治疗方法存在多元化，但仍有报道指出，50%～70%的表浅性膀胱癌存在高复发风险，10%～20%患者会发展成浸润性膀胱癌，严重者可能诱发肌层浸润性膀胱癌，缩短患者生存时间，降低其5年内生存率[1]。

当前，临床针对膀胱癌患者除去手术切除病灶，还主张配合全身化疗来提高其治疗效果，药物首选他滨、顺铂，均有一定确切疗效。但大量研究证实，患者化疗后的平均生存期只有15个月，5年内生存率未超过20%，病死率也未得到显著降低。与此同时，病灶根除术式优化方向尚未明朗，临床研究指出膀胱肿瘤发病与多条信号通路存在关联，尤其是成纤维细胞生长因子受体3(FGFR3)，在肿瘤发生和进展中占据重要地位，因此临床表明可借此为方向来研发新型靶点治疗药物[2]。基于此，本研究选择2017年4月～2021年4月收治的膀胱癌患者80例，对其肿瘤组织进行FGFR3基因突变和蛋白表达检测，评估此类因子表达对膀胱癌预后关系的预测价值。

1 资料与方法

1.1一般资料：本次研究均医院伦理会审批，将2017年4月～2021年4月收治的膀胱癌80例为观察对象，术后均配合病理检查，并经病理科主任医生多次阅片确诊，符合移性细胞癌相关诊断标准，同时对本次研究保有知情同意权。所选患者中，男女所占比例为60∶20；年龄35～85岁，平均年龄(64.11±10.34)岁；病症类型：低级别尿路上皮癌46例，高级别尿路上皮癌34例；手术类型：55例患者行经尿道膀胱肿瘤电切术，25例患者行根治性膀胱切除术+尿流改道术+术后GC化疗(吉西他滨+顺铂)。将癌组织标本置于10%甲醛溶液固定24 h后，选择5 μm厚蜡块对组织进行连续切片，其中1片行苏木精-伊红染色，1片行FGFR3免疫组化染色，1片与PBS液反应做成一抗空白对照。FGFR3单克隆抗体及免疫组化试剂盒分别于英国Abeam公司中国分公司、北京中杉金桥生物技术有限公司购买，操作步骤参照相关说明书，FGFR3-抗视为工作液，以1∶20的比例将浓度稀释后，有序完成色、复染、脱水和透明后封片等步骤。

1.2突变检测：检测所需组织是经包埋石蜡组织块中切取，选择于Omega Bio-Tec公司购买的试剂盒，完成组织DNA的分离和提取，后配合定量分析法对DNA质量进行评估，直至检测样本质量达到合格标准。模板设计引物采取FGFR3基因热点突变外显子7、10和15，DNA行PCR扩增。20 μl的PCR扩增体系包括肿瘤DNA(1 μl)、Taq高保真酶(0.15 μl)、引物(0.8 μl)、dNTP(0.8 μl)、Mg2+(0.8 ml)、ddH2O(14.45 μl)、10×buffer(2 μl)。反应条件包括外显子在15～95 ℃温度下的预变性(用时7 min)，94℃的变性(用时1 min),62℃退火(用时1.5 min)；外显子7和10需在61 ℃温度下退火(用时1.5 min)，后调整温度至72 ℃，延长1 min反应时间，经40个循环后在72℃环境下延长7 min反应时间。对扩增后所得产物经电泳分离来提高产物纯度，后经Sanger测序法得出产物结构序列，应用Chromas pro2.1.3软件来判读基因突变数值。

1.3评估标准：FGFR3蛋白表主要以细胞膜或细胞质为参考值，经高倍镜(×400)下，从5个不同视野来观察所有患者肿瘤组织的免疫组化切片，其中，肿瘤细胞中着色呈黄色或棕黄色，视为阳性表达，无着色视为阴性。

1.4统计学分析：采用SPSS22.0统计学软件，计量资料行t检验，计数资料行χ2检验，当P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1患者FGFR3基因突变、蛋白表达与各项参数值的相关性：FGFR3基因突变率、蛋白表达率分别为18.75%(15/80)、27.50%(22/80)，FGFR3蛋白表达与临床各参数无较大关联(P>0.05)；FGFR3基因突变与年龄、吸烟史、病理分期、肿瘤大小、复发情况等参数指标存在相关性(P<0.05)。见表1。

表1 FGFR3基因突变、蛋白表达与各项参数值相关性[n(%)]

2.2FGFR3基因突变和蛋白表达的关联性：FGFR3基因突变和蛋白表达一致性为33.33%(5/15)，但二者没有关联(P>0.05)，见表2。

表2 FGFR3基因突变和蛋白表达的关联性(n)

2.3FGFF3基因突变和蛋白表达对预后的影响：FGFR3基因突变和野生型的总生存期(OS)分别为(30.44±1.33)个月、(26.33±2.45)个月，差异无统计学意义(P>0.05)；FGFR3蛋白表达阳性、阴性分别是(27.89±1.33)个月、(27.33±1.63)个月，两组数据差异无统计学意义(P>0.05)；FGFR3基因突变和野生型的无瘤生存期(DFS)分别为(29.44±1.56)个月、(38.23±2.69)个月，前者DFS显著低于后者(P<0.05)；FGFR3蛋白表达阳性、阴性分别是(30.11±1.21)个月、(32.35±1.44)个月，差异无统计学意义(P>0.05)。由此可见，FGFR3基因突变和蛋白表达与患者总生存期OS无联系，FGFR3 蛋白表达对DFS不会造成影响，但FGFR3基因突变型膀胱癌与患者DFS有直接联系。

3 讨论

膀胱癌作为全球常见恶性肿瘤疾病，早期落实预防和诊疗工作，是提高患者生存率的关键。因此，寻找能科学评估膀胱癌复发、进展和转移的标志物，为患者治疗提供科学依据。基于此，本次研究结果显示FGFR3基因突变与年龄、吸烟史、病理分期、肿瘤大小、复发情况等参数指标存在相关性，且FGFR3基因突变型膀胱癌的DFS较野生型低，可见FGFR3基因突变与患者预后存在直接影响；分析FGFR3基因突变和蛋白表达可见二者没有关联，且对OS无影响，蛋白表达与DFS没有关联。综合上述结果分析，可见高龄男性患者FGFR3基因突变风险较高，存在吸烟史患者更甚，应倡导全民戒烟来控制恶性肿瘤发生风险[3]。与此同时，FGFR3基因突变与患者术后肿瘤高复发存在明显关联，究其原因，分析可能是受其突变体激活下游的信号通路影响，加上此类突变会对机体急性炎性反应和免疫反应进行抑制，促进肿瘤发展或诱导病发。因此，临床针对膀胱癌患者FGFR3基因突变现象，建议采取卡介苗膀胱灌注作首选方案，有利于控制肿瘤复发风险[4]。当前，临床仍需加大关于肿瘤分子特性定义的相关研究，寻找能准确预测病灶生物学的相关标志物，为提高靶向治疗效果、延长患者生存时间提供参考数据。

综上所述，FGFR3基因表达用于膀胱癌预后评估中有一定应用价值，但临床仍需加大样本研究证实其预测价值，仅供参考。