人源性多肽、可溶性E-钙黏蛋白在乳腺癌中的表达及对患者预后的预测价值

李俊强，文小强，代引海

陕西中医药大学第二附属医院肿瘤乳腺外科，陕西 咸阳 712000

乳腺癌属于临床常见的恶性肿瘤，主要发生于乳腺上皮组织，临床主要表现为乳房肿块、乳房皮肤异常等，若控制不及时，病情进展至晚期肿瘤细胞会发生转移，器官出现病变，严重威胁患者的生命健康。研究显示，乳腺癌的发病率正逐年上升，居女性恶性肿瘤首位，病死率居女性恶性肿瘤第二位[1]。目前，乳腺癌多采用手术切除治疗，术后需进行放化疗等辅助治疗，不良反应明显，且乳腺癌康复时间较长，康复过程中患者疼痛明显，可严重影响患者的预后[2]。有研究认为，采用敏感的乳腺癌预后生物标志物对评估肿瘤病情和预后尤为重要，人源性多肽（dermcidin，DCD）、可溶性E-钙黏蛋白（soluble E-cadherin，sE-cadherin）表达与乳腺癌细胞的侵袭转移密切相关，可作为评估乳腺癌患者预后的生物标志物[3-5]。因此，本研究探讨DCD、sE-cadherin在乳腺癌中的表达及对患者预后的预测价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2016年10月至2020年12月陕西中医药大学第二附属医院收治的乳腺癌患者。纳入标准：①经CT、病理学检查确诊为乳腺癌；②病历资料完整。排除标准：①合并其他恶性肿瘤；②合并脏器功能异常；③合并精神障碍；④已接受治疗。依据纳入和排除标准，本研究共纳入298例乳腺癌患者，年龄24～65岁，平均（43.59±8.49）岁；病程6～15个月，平均（10.26±2.96）个月；TNM分期：Ⅰ期124例，Ⅱ期100例，Ⅲ期74例。取所有患者乳腺癌组织和相应的癌旁组织。本研究经医院伦理委员会批准通过，所有患者均知情同意并签署知情同意书。

1.2 免疫组化法检测DCD、sE-cadherin的表达情况

取所有患者乳腺癌组织和相应的癌旁组织，对组织标本进行切片、脱蜡、水化处理后，将标本浸泡于3%过氧化氢中20 min，封闭内源性过氧化物酶活性。高压枸橼酸盐抗原修复，温水清洗后使用磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline，PBS）清洗3次，每次5 min，同时滴加10%血清以阻断非特异性的结合，37℃孵育10 min。滴加一抗DCD、sE-cadherin兔抗人单克隆抗体（浓度1∶100）4℃过夜，PBS再次清洗，滴加二抗DCD、sE-cadherin兔抗人单克隆抗体，37℃孵育10 min，PBS清洗3次后，滴加过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液孵育10 min，二氨基联苯胺显色，苏木素复染，脱水、干燥后中性树脂封片，用PBS代替一抗作为阴性对照。

结果判定：细胞质呈棕黄色或棕褐色染色，或染色明显强于背景色为阳性，选取5个不同视野进行全面观察，每个视野中细胞应不低于200个，观察完成后计算每个视野中阳性细胞所占比例，阳性细胞所占比例﹤5%为阴性，阳性细胞所占比例为5%～50%为弱阳性，阳性细胞所占比例﹥50%为强阳性，弱阳性和强阳性判定为阳性表达。

1.3 随访

采用门诊复查等方式对所有患者进行为期半年的随访，记录患者的预后情况，将远处转移、病情加重或死亡判定为预后不良。

1.4 统计学方法

采用SPSS 22.0软件对所有数据进行统计分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验；计数资料以例数和率（%）表示，组间比较采用χ2检验；乳腺癌患者预后的影响因素采用多元Logistic回归分析；绘制受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线，计算曲线下面积（area under the curve，AUC），评估DCD、sE-cadherin单独及联合检测对乳腺癌患者预后的预测价值；以P﹤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 乳腺癌组织和癌旁组织中DCD、sE-cadherin表达情况的比较

乳腺癌组织中DCD的阳性表达率明显高于癌旁组织，sE-cadherin的阳性表达率明显低于癌旁组织，差异均有统计学意义（P﹤0.01）。（表1）

表1 乳腺癌组织和癌旁组织中DCD、sE-cadherin阳性表达率的比较[ n（%）]

2.2 不同预后情况乳腺癌患者乳腺癌组织中DCD、sE-cadherin表达情况的比较

随访半年，298例乳腺癌患者中，预后良好209例，预后不良89例；预后不良乳腺癌患者乳腺癌组织中DCD的阳性表达率明显高于预后良好患者，sE-cadherin的阳性表达率明显低于预后良好患者，差异均有统计学意义（P﹤0.05）。（表2）

表2 不同预后情况乳腺癌患者乳腺癌组织中DCD、sE-cadherin阳性表达率的比较[ n（%）]

2.3 乳腺癌患者预后影响因素的单因素和多因素分析

单因素分析结果显示，年龄、病程均可能与乳腺癌患者的预后无关（P﹥0.05），淋巴结转移情况、肿瘤直径、TNM分期、DCD表达情况、sE-cadherin表达情况均可能与乳腺癌患者的预后有关（P﹤0.05）。多因素Logistic回归分析结果显示，淋巴结转移、肿瘤直径≥5 cm、TNM分期为Ⅱ～Ⅲ期、DCD阳性表达、sE-cadherin阴性表达均为乳腺癌患者预后不良的独立危险因素（P﹤0.05）。（表3）

2.4 DCD、sE-cadherin单独及联合检测对乳腺癌患者预后的预测价值

DCD、sE-cadherin、DCD+sE-cadherin预测乳腺癌患者预后的AUC分别为0.795、0.711、0.887，DCD+sE-cadherin联合预测的AUC最大，此时的灵敏度、特异度分别为0.576、0.619。（表4、图1）

表4 DCD、sE-cadherin单独及联合检测对乳腺癌患者预后的预测价值

3 讨论

随着社会生活水平的提高，女性的工作生活压力不断升高，与女性相关的健康问题也逐渐显现。乳腺癌是女性发病率最高的恶性肿瘤，权威数据显示，近年来，乳腺癌的发病率居女性恶性肿瘤首位[6-7]。同时，乳腺癌也是女性恶性肿瘤死亡原因的第二位，这主要是因为肿瘤细胞增殖指数较高，病情进展迅速，对女性和社会造成的危害日渐突出。临床常采用触诊、病理学检查、钼靶X线、正电子发射计算机断层显像（position emission tomography，PET）/CT、MRI等对乳腺癌进行检查，但触诊准确度较低，受主观因素的影响较大；病理学检查虽准确度高，但是一种术后有创检查，无法及时了解药物的效果，甚至会延误治疗；X线对致密型乳腺癌诊断不准确；PET/CT及MRI检查费用昂贵。早期乳腺癌多无明显临床表现，多数患者确诊时已进展至中晚期，失去了最佳的手术治疗时机，且多数患者预后不良[8-9]。上述检查方法无法及时有效评估患者的预后情况，因此需寻找一种更有效的检测方法。

有研究发现，血清肿瘤生化指标检测特异度、灵敏度均较高，便于临床持续监测预后及辅助诊断[10-12]。有研究认为，sE-cadherin是一种跨膜糖蛋白，其表达下调时，可减轻肿瘤细胞间的黏附能力，可促进肿瘤细胞的侵袭转移[13-14]。研究认为，sE-cadherin在乳腺癌组织中高表达，其表达与乳腺癌的发生发展、侵袭转移、预后密切相关，可作为临床诊断与预后的评价指标。国外研究表明，DCD在多种肿瘤中发挥致癌基因的作用，被认为与恶性肿瘤发生发展及转移有关[16]。

邓奔腾等[17]研究认为，DCD在乳腺癌组织中表达明显上调，可成为临床诊断的生物标志物。本研究结果显示，DCD在乳腺癌组织中的阳性表达率较高，而sE-cadherin在癌旁组织中的阳性表达率较高，同时DCD阳性表达、sE-cadherin阴性表达均是乳腺癌患者预后不良的独立危险因素。同时，本研究还就DCD、sE-cadherin单独及联合检测对乳腺癌患者预后的预测价值进行评估，DCD+sE-cadherin预测乳腺癌患者预后的AUC为0.887，分别高于二者单独检测。主要是因为sE-cadherin为转移抑制基因，存在于表皮组织中，对肿瘤细胞维持高黏附特性和抑制肿瘤细胞的转移侵袭发挥重要作用；sE-cadherin水平升高时能够使细胞间的黏附增加，使肿瘤细胞难以远离原发灶，从而明显抑制肿瘤细胞转移，若sE-cadherin水平降低，则会促进肿瘤细胞的增殖、转移，对患者的预后产生不良影响[18]。而DCD由人类汗液中分离，是一种天然活性的多肽物质，具有抗细菌和真菌的活性，在肿瘤发生及人体天然免疫系统疾病、神经系统疾病、妊娠相关疾病的病理生理过程中发挥作用，可通过ERBB信号通路促进乳腺癌的发生发展[19]。因此DCD、sE-cadherin水平变化可作为乳腺癌诊断、治疗及预后评估的生物标志物。

综上所述，乳腺癌组织中DCD的阳性表达率较高，sE-cadherin的阳性表达率较低，二者联合检测对乳腺癌患者的预后评估的预测价值较高。