高效液相色谱-质谱联用仪测定食用菌中甲胺磷、乙酰甲胺磷、甲拌磷及其衍生物等5种有机磷农药残留量

2022-07-05王娜娜马瑞莹郭景明

农药科学与管理 2022年4期

张璇，王娜娜，马瑞莹，郭景明，常宏

(山西省检验检测中心，山西太原 030025)

甲胺磷、乙酰甲胺磷、甲拌磷、甲拌磷砜、甲拌磷亚砜、氧乐果和乐果是广谱类杀虫剂，虽然在食用菌的栽培种植过程中禁止使用，但作为广谱杀虫剂，时有检出。已有的气相色谱检测方法因其干扰强、前处理过程复杂，假阳性结果时有发生，虽然气相色谱串联质谱仪也可以检测这类型农药，但是峰型拖尾严重，基质干扰大，回收率相对比较差，所以本文采取QuECHERS萃取盐包提取，EMR净化包净化，用液质联用仪检测的方法，来大大降低了食用菌基质的干扰性，缩短检测时间，提高准确率。

1 实验部分

1.1 仪器与材料

1.1.1 仪器液相色谱-质谱/质谱联用仪，Agilent 1290-6470，电子天平离心机，实验室常规玻璃仪器。

1.1.2 试剂与耗材乙腈(色谱纯)，PTFE滤膜(0.2 2μm)，QuECHERS萃取盐包(安捷伦5982-5650CH)，EMR进化盐包(安捷伦5982-5056)。

1.1.3 标准品甲胺磷、乙酰甲胺磷、甲拌磷、甲拌磷砜、甲拌磷亚砜、氧乐果和乐果(天津环境监测中心)，浓度均为1 000μg/mL

1.2 实验步骤

1.2.1 样品制备将鲜食食用菌(整颗)放入破壁机中匀浆成浆状后立刻放入样品盒中，干制食用菌用研磨机研磨并过20目筛后放入样品盒中。

1.2.2 提取称取10.00g试样放入50ml离心管中，加入10.0mL乙腈和萃取盐包和1颗陶瓷均质子，盖上离心盖，剧烈振荡1min后4 200r/min离心5min。

1.2.3 净化吸取6mL上清液加到内含EMR净化包的15mL离心管中，涡旋混匀1min。4 200r/min离心5min。吸取一定量的上清液后用0.22μm滤膜过滤，待测。

1.3 仪器条件

液相色谱条件：

色谱柱：C18柱 100×2.1mm，填料细度1.8μm，

柱温：35℃

进样量：1.0μL

溶剂A：0.1%甲酸-5mmol/L乙酸铵的水溶液

溶剂B：甲醇(表1)

表1

质谱条件：

电离方式：电喷雾电离(ESI)

扫描方式：正离子扫描

检测方式：多反应监测(MRM)

离子源参数参考条件：毛细管电压：3 500V，离子传输毛细管温度：350℃，载气温度：280℃，载气流量：8L/min，氮气流量：40psi，鞘气温度：330℃，鞘气流量：11L/min。(表2)

表2

2 结果与讨论

2.1 方法线性范围和检出限将甲胺磷、乙酰甲胺磷、甲拌磷、甲拌磷砜、甲拌磷亚砜、氧乐果和乐果标准溶液用甲醇+水逐级稀释成由5、10、50、100、200、500ng/mL组成的标准工作液，在上述液相色谱-质谱/质谱条件测定，得到色谱图，以峰面积(Y)-绝对量(X)为坐标做工作标准曲线，结果表明甲胺磷、乙酰甲胺磷、甲拌磷、甲拌磷砜、甲拌磷亚砜、氧乐果和乐果的绝对量与峰面积在上述区间呈线性关系。甲胺磷的标准曲线方程为y = 26 086x-103 341，其R值为0.999 8；乙酰甲胺磷的标准曲线方程为y =15 532x+12 126，其R值为0.999 3；甲拌磷的标准曲线方程为y = 6 662.6x-2 751.6，其R值为0.999 1；甲拌磷砜的标准曲线方程为y = 2 591x-6 479.2，其R值为0.999 6；甲拌磷亚砜的标准曲线方程为y = 31 250x+123 712，其R值为0.999 4；氧乐果的标准曲线方程为y = 16 282x-86 428，其R值为0.998 8；乐果的标准曲线方程为y = 29 047x-287 389，其R值为0.997 9；标准曲线(图1-1)、(图1-2)、(图1-3)、(图1-4)、(图1-5)、(图1-6)、(图1-7)。

图1-1 甲胺磷标准溶液工作曲线图

图1-2 乙酰甲胺磷标准溶液工作曲线图

图1-3 甲拌磷标准溶液工作曲线图

图1-4 甲拌磷砜标准溶液工作曲线图

图1-5 甲拌磷亚砜标准溶液工作曲线图

图1-6 氧乐果标准溶液工作曲线图

图1-7 乐果标准溶液工作曲线图

2.2 检出限甲胺磷、乙酰甲胺磷、甲拌磷、甲拌磷砜、甲拌磷亚砜、氧乐果和乐果均为1.0×10-10g

2.3 相对保留时间甲胺磷1.81min；乙酰甲胺磷2.54min；甲拌磷6.84min；甲拌磷砜3.83min；甲拌磷亚砜5.82min；氧乐果2.95min；乐果4.58min。

2.4 方法定量限、添加回收率与精密度定量限为0.005mg/kg，取空白食用菌样品进行甲胺磷、乙酰甲胺磷、甲拌磷、甲拌磷砜、甲拌磷亚砜、氧乐果和乐果添加回收率试验，添加浓度为0.005、0.1、0.5mg/kg 3个水平，各处理重复5次，甲胺磷在食用菌中的添加回收率为70.1%～95.4%，相对标准偏差为3.0%～6.77%；乙酰甲胺磷在食用菌中的添加回收率为70.6%～94.5%，相对标准偏差为2.70%～8.46%；甲拌磷在食用菌中的添加回收率为71.6%～102.4%，相对标准偏差为4.53%～9.25%；甲拌磷砜在食用菌中的添加回收率为75.1%～103.4%，相对标准偏差为6.12%～9.74%；甲拌磷亚砜在食用菌中的添加回收率为70.4%～94.6%，相对标准偏差为3.38%～7.27%；氧乐果在食用菌中的添加回收率为73.5%～99.4%，相对标准偏差为4.02%～7.90%；乐果在食用菌中的添加回收率为70.9%～97.4%，相对标准偏差为5.21%～7.46%；结果(表3)。

表3

2.5 计算公式

式中：X：试样中农药残留量，mg/kg；

C：标准溶液浓度，mg/L；

A1：试样溶液的峰面积；

A：标准溶液的峰面积；

V：试样定容体积，mL；

m：样本质量，g。

2.6 质谱条件优化根据7种农药的化学性质和分子量等在MRM模式下对电喷雾电压、离子源温度、鞘气压力、氮气流速等质谱条件进行优化。得到特征子离子信息，选择相对丰度较高的两个子离子，对碰撞能量、电子管透镜电压进行优化。

2.7 液相色谱条件优化流动相加入0.1%甲酸和中性的乙酸铵缓冲盐，加入甲酸能提高离子化效率，当乙酸铵浓度为5mmol/L，甲酸浓度为0.1%时几种农药的的峰形和保留时间均较好，响应也较高。且甲醇-水(0.1%甲酸+5mmol/L乙酸铵)配制简单、重现性好、对环境污染小，综合考虑选择甲醇-水(0.1%甲酸+5mmol/L乙酸铵)作为流动相。

2.8 前处理条件优化选择QuECHERS方法，前处理简单快速，大大的降低溶剂的使用，从而能有效的减少对环境的污染和检测成本。