肾虚证动物模型研究进展

李国辉，黄晓巍，王雨辰，白 冰，林 喆*

（1.长春中医药大学药学院，长春 130117；2.吉林修正药业新药开发有限公司，长春 130103）

肾主藏精，与人生殖、生长发育及衰老有关。肾虚是临床常见的病证之一，一些疾病的转归及预后也会出现肾虚证。因此建立肾虚证动物模型对疾病的治疗与转归非常重要[1][2],也为中医临床指导和诊疗疾病提供依据[3][4]。目前肾虚动物模型大体分为两大类:中医病因病机类模型和西医病理生理类动物模型。本文将从这两类造模方法进行综述。

1 中医病因病机动物模型

1.1 惊恐伤肾动物模型

中医基础理论中有“恐伤肾”学说。《素问》说“百病生于气也，怒则气上，喜则气缓，悲则气消，恐则气下，惊则气乱。”“惊则心无所依，神无所归，虑无所定，故气乱矣。”由此说明惊和恐的情志刺激可影响人体的气机运行，所以惊恐及肾常可见到惊悸、坐立不安、慌乱、甚则神乱，大小便失禁、滑精、腰酸等症状。根据中医“惊恐累及肾”的理论，和靖[5]利用电子驱鼠仪恐吓孕鼠方法，考察恐吓对试验动物所繁育出的子代的影响，其结果表明，惊恐对模型动物子代的血清T3、T4、CORT、CAMP均降低，CGMP升高、CAMP/CGMP降低。

1.2 劳倦过度，房劳伤肾动物模型

肾者，主蛰，封藏之本，精之处也，主藏精，故肾精不应该过度消耗。“肾者，作强之官，伎巧出焉”，“因而强力，肾气乃伤，高骨乃坏”。房劳过度，耗伤肾精，日久导致肾虚。常见腰酸，耳鸣，眩晕，精神萎靡，生殖机能减退。和靖[5]用“房劳伤肾”造模，发现模型动物子代的血清T3、T4、CORT、CAMP均降低，CGMP升高、CAMP/CGMP降低。此方法建造的肾虚动物模型，与临床常见的肾精亏虚患者的表现及检测指标一致。2月龄亲代雄性鼠与发情期雌鼠按1：3同笼，将笼中雌鼠每天进行随机互换,每间隔3d更换新的雌鼠。替换下来的雌鼠休息7d，再通过处理后，继续使用，每只雌鼠使用3～4次。如此饲养30d。颜亭祥等[6]“劳倦过度，房劳伤肾”造模，模型鼠出现进食量和饮水量减少，怕冷喜暖、聚拢在一起、自由活动度低、皮毛稀疏、失去光泽。游泳时长减少，性交次数明显减少，大便稀溏，小便增多，阴囊皱缩，睾丸回升，与临床肾虚相符。张丹［7］等“劳倦过度，房事不节”造模，通过强制小鼠劳倦游泳法造模；通过Colldege效应导致雄性小鼠房劳过度，模拟肾阳虚小鼠模型。结果模型组出现体温下降、畏寒、呈淡白舌、齿痕明显、舌乳头密度增加等。

1.3 先天不足肾虚模型

肾是先天之本，先天之精和后天之精储藏在肾中，其精气的盛衰可以确定子代体质量的强弱。先天之精旺盛，则先天禀赋强，子代在出生后体质强壮；反之则出现五软、五迟，影响身体和心理的健康发展。冯新玲等[8]采用“惊恐伤及怀孕雌鼠”的方式进行造模，发现新生幼鼠体质量明显变差、牙齿萌出晚、被毛生长稀疏、生长发育缓慢且髓海不足、大脑发育迟缓，从而揭示了“恐伤孕鼠”所繁育的子代为先天肾虚模型。周永生等[9]通过禁食孕鼠使老鼠过度饥饿的造模方法使怀孕雌鼠繁育的仔鼠体质量降低，可作为肾精先天不足的模型。

1.4 老年肾虚模型

依据肾可藏精，精可化气，肾精亏虚则肾气衰的中医理论，张云如等［10］对自然衰老雄性SD大鼠进行观察，研究发现，26～28月龄大鼠出现精神萎靡、倦卧弓背、嗜睡懒动等症状，血清中Cor、T3、T4含量明显减少。吴君等［11］观察老龄大鼠尿量、离子浓度及皮质醇的变化。结果发现，模型大鼠出现嗜睡懒动、行动迟缓、毛发发黄无光、目光晦黯等症状，5、24 h尿量明显增多，尿液中Na+、Cl-浓度增加，K+浓度降低，皮质醇的含量明显降低。

1.5 复合肾虚模型

通过中医基础理论中“病日久累及肾”的观点，可知“肾虚证”的发病是一个持续周期长的过程，常不是单一病因致病。故应用复合造模法建立的动物模型，更符合临床情况。史年刚［12］依据中医“阳偏衰失于温煦则寒”的理论挑选出阳虚的老龄雌鼠和雄鼠作为亲代并繁育子代，对怀孕的雌鼠采用猫吓鼠“惊恐伤肾”，低温“寒邪易伤阳气”和黄柏溶液灌胃联合造模方式直至仔鼠出生，出生后观察子代模型小鼠，小鼠出现体质量下降、畏寒怯冷、被毛脱落、被毛无光泽、嗜睡懒动、大便稀溏、食量下降,还出现ATP产能下降、低体重儿比例增加，呼吸链酶代谢异常和下丘脑抑制了能量代谢等表现，符合肾阳虚的表现。

2 西医病理生理动物模型

2.1 肾气虚证模型

肾气虚证是指肾气亏虚，生长发育迟缓，生殖功能下降，摄纳无权等所表现的证候，临床以腰膝酸软、气短自汗、倦怠无力、小便频数而清长，遗尿或尿失禁为主要表现。根据肾主水理论，王德山等[13]取SD大鼠，腹腔注射丁胺卡那霉素，250 mg/kg，分2次注射，连续14 d。结果表明，大鼠体重增长迟缓，毛稀松、畏寒、食欲下降，精神萎靡，尿量增多，尿比重减低。肾脏AQP2mRNA的表达减少，从而导致肾脏AQP2表达减少。太史春等[14]肾脏AQP1表达降低。

2.2 肾阳虚证模型

肾阳虚证是指肾阳气虚衰，温煦失职所出现的一类虚寒症状，临床以腰膝酸软冷痛、畏寒肢冷、性欲冷淡、反应迟钝、尿频清长、夜尿多等为主要表现。

肾阳虚证动物模型主要是依据现代医学来探索肾阳虚证的病理变化，常表现为内分泌功能障碍，通过运用药物干预、机械损伤等方式影响动物的靶腺轴，使其功能紊乱复制肾阳虚病理模型[15-17]。现将常见的病理模型及相关评价指标进行归纳总结，详见表1。

2.3 肾阴虚证模型

肾阴虚是由于肾阴亏虚，对机体各功能部分失于滋养濡润，虚热内扰所表现的症状，临床以腰膝酸软、心烦、头晕、耳鸣、失眠多梦、烦热、潮热盗汗、阳强易举、阳痿早泄为主要表现。现将最常用的模型建立的方法以及相关评价指标进行系统归纳，详见表2。

表2 肾阴虚证动物模型制备及评价

2.4 肾精不足证模型

肾精不足证是由于肾中所储藏的精气亏虚，表现出生长、发育与生殖机能减退，多因先天不足，后天失养，或脾运化失调，后天之精生成不足。临床以生长发育迟缓，身材矮小，骨骼痿软，智力低下，早衰，性欲减退等为主要表现的证候。目前对常用的肾精不足证模型及相关评价指标进行归纳，详见表3。

表3 肾精不足证动物模型制备及评价

3 现存不足及展望

3.1 缺乏规范化的造模对象

目前肾虚证常采用的模型动物大多为大鼠、小鼠及家兔，缺乏其它品系动物对于肾虚证造模方法的普遍性，科学性，规范化的研究，现今并没有明确规定各造模方法最相匹配的模型动物[41]。将动物作为模型对象，与人类存在一定的种属差异，人体的证候特征在试验动物上只能实现部分的复制，不能完全模拟出人体全面的证候特征[42]。

3.2 缺乏标准化的造模方法

常用的病理模型在给药方式、剂量、造模周期上存在较大差异，其结果的可靠性也会受到学者的质疑。例如，使用糖皮质激素类药物构建肾阳虚证模型，其给药方式多样，有肌肉注射、皮下注射、口服灌胃等，且给药剂量也尚未完全相同。模拟中医病因模型也存在模型的刺激因素较难控制等缺陷。如使用房劳、体劳、惊恐等方式造模时，很难将刺激做到标准化、定量化、程度化，容易导致模型病理程度不同，给中药药理学研究带来很多不便，难于被科学界认可。

3.3 缺乏标准化、特异性的评判指标

中医学认识和治疗疾病的出发点是“证”，它是从整体上对疾病发展至某一阶段的病因、病性、病理的概括，并随时间和空间的变化而改变[43]。成功复制肾虚证候模型的关键不仅要体现出中医的证候特征，还需要有被专家和学者认可的病理生理评价指标。目前常被用来评判的指标主要有观察模型动物的肾虚一般体征表现，检测靶腺轴功能，以及对免疫力、能量代谢、自由基代谢、环核苷酸系统的检测等[44]。虽取得一些成就，但尚没有达成统一的标准，难以做到诊断指标的大众化、标准化。

综上所述，肾虚证动物模型大体上复制了人体肾虚证的证候，在研究中医证候、治法等方面已取得初步成果，但仍需要广大研究者继续研究和发展。一个成功的肾虚证动物模型，中医病因是模拟肾虚证候的关键成因，其病因发生的病理变化应该是其模拟的肾虚证候[45]。因此，不仅要建立证候的规范化，展示中医证候特征，还需提高诊断的标准化、科学化，突出证候诊断的实践价值。全力探索能全面体现肾虚证本质的客观指标，以实现对肾虚证动物模型的标准化和实践性，更好的适用于中医药研究的各个领域。