TSLP、Bach2及IL-9在嗜酸性粒细胞浸润鼻息肉中的表达及临床意义

魏鑫鑫 李晓玲 黄维平 尹中普

鼻息肉（Nasal polyps，NP）是一种常见的鼻腔或黏膜组织的良性增生，可形成于鼻窦或鼻腔粘膜的任何部位中，多见于慢性鼻窦炎鼻息肉（Chronic rhinosinusitis with nasal polyps，CRSwNPs）［1］。既往研究显示，CRSwNPs 的主要特征是以嗜酸性粒细胞浸润增多为主，且细胞因子在其发病机制中发挥着重大作用［2-3］。胸腺基质淋巴细胞生成素（Thymic stromal lymphopoietin，TSLP）是一种类似IL-7 的细胞因子，能介导辅助性T 细胞2（T helper 2 cell，Th2）炎性反应，促进Th2 的产生。BTB 与CNC 同源基因2（BTB and CNC homology 2，Bach2）是一类大分子的转录抑制因子，定位于人的6 号染色体长臂中，能调节和维持Th2 免疫反应，促进Treg 细胞的分化，有效避免致死性的炎症反应。白细胞介素-9（Interleukin-9，IL-9）是一种促炎症因子，在微生物感染、免疫应答、肿瘤发生等病理过程中发挥着重要作用。本研究就TSLP、Bach2、IL-9 在嗜酸性粒细胞浸润鼻息肉（Eosinophilic infiltrating nasal polyps，Eos NPs）中的表达及临床意义进行探讨，现研究报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2017年2月至2019年2月于南阳市中心医院行鼻内镜手术的85 例Eos NPs 患者（共85 份下鼻甲组织）设为实验组，其中男49 例，女36 例，平均年龄（43.59±9.26）岁。根据Eos NPs 分期标准［4］分为：Ⅱ型2 期37 例，Ⅱ型3 期48 例。纳入标准：①Eos NPs 均符合《中国慢性鼻窦炎诊断和治疗指南》标准［5］；②所有入组患者均无鼻部手术史；③术前1 个月未用抗生素、糖皮质激素等药物；④慢性鼻窦炎伴多发性鼻息肉。排除标准：①精神病史者；②过敏性鼻炎患者；③合并其他恶性肿瘤患者。

收集同一时期在本院行单纯鼻中隔矫正术的52 例患者（共52 份下鼻甲组织）设为对照组。其中男28 例，女24 例，平均年龄（43.07±8.59）岁。两组患者基本资料比较差异无统计学意义（P＞0.05）。本研究经院医学伦理委员会批准通过，受试者均签署知情同意书。

1.2 实验方法

1.2.1 TSLP、Bach2 检测方法

采用SP 免疫组化染色检测TSLP、Bach2 表达情况。每例组织蜡块均切片4 张，厚度约4 μm。所有标本均经甲醛溶液固定，石蜡包埋、载玻片泡酸、高温灭菌及多聚赖氨酸涂片等处理。DAB 显色剂显色，苏木精复染，乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。免疫组织化学染色试剂盒TSLP、Bach2 兔多克隆抗体采购自上海优宁维生物科技公司，严格按照试剂盒说明进行操作。

1.2.2 TSLP、Bach2 判定标准［6］

TSLP 主要表达于粘膜上皮细胞和间质炎症细胞的细胞浆或细胞核上，其阳性表达组织染色较深，呈棕黄色或者棕褐色。Bach2 主要表达于粘膜上皮层细胞核内，其阳性表达组织染色较浅，且染色颗粒较少。每个标本随机选取5 个高倍（×400）视野，结果由两位高年资医师采用双盲法阅片得到。以细胞浆或细胞核中出现黄色颗粒者设为阳性。根据阳性细胞的百分比及显色程度分级：①阳性细胞百分比：无细胞显色者为0 分；阳性细胞的百分比1%～25%时为1 分；阳性细胞的百分比26%～50%时为2 分；阳性细胞的百分比＞50%时为3 分。②显色程度：无着色或显色不清楚为0 分；淡黄色者为1 分；棕黄色者为2 分；黄褐色或棕褐色为3 分。将两种评分综合作为切片的最终评分，＞3 分为阳性。

1.2.3 IL-9 检测方法

采集两组患者空腹静脉血样10 mL，常温静置10 min 后，经3 500 r/min（r=10 cm）离心10 min 处理，分离血清置于-20℃冰箱内待检。采用ELISA检测血清中IL-9 水平，ELISA 试剂盒采购自美国Elabscience 公司，严格按照试剂盒说明进行操作。

1.3 统计学方法

采用SPSS 21.0 统计软件进行统计分析。计量资料以（±s）表示，采用t检验；计数资料以n（%）表示，采用χ2检验；相关性采用Pearson相关性分析；采用受试者工作特征曲线（Receiver operating c haracterist ic curve，ROC）评估诊断价值，计算曲线下面积（Area under curve，AUC），AUC 值越高，诊断价值越高，以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组TSLP、Bach2、IL-9 表达情况比较

实验组TSLP 的阳性率及IL-9 水平均高于对照组，Bach2 的阳性率低于对照组，差异有统计学意义P＜0.05）。见表1、图1。

表1 两组TSLP、Bach2、IL-9 表达情况比较［n（%），（±s）］Table 1 Comparison of the expression of TSLP，Bach2，and IL-9 between the two groups［n（%），（±s）］

表1 两组TSLP、Bach2、IL-9 表达情况比较［n（%），（±s）］Table 1 Comparison of the expression of TSLP，Bach2，and IL-9 between the two groups［n（%），（±s）］

组别对照组实验组t/χ2值P 值n 52 85 TSLP阳性11（21.15）72（84.71）54.567＜0.001阴性41（78.85）13（15.29）Bach2阳性42（80.77）27（31.76）30.993＜0.001阴性10（19.23）58（68.24）IL-9（pg/mL）3.58±0.26 6.97±1.19 20.211＜0.001

图1 TSLP、Bach2 免疫组化染色图（SP，×500）Figure 1 TSLP，Bach2 immunohistochemical dyeing map（SP，×500）

2.2 不同分期Eos NPs 的TSLP、Bach2、IL-9 表达情况比较

Ⅱ型2 期的TSLP 阳性率、IL-9 水平低于Ⅱ型3 期，Bach2 阳性率高于Ⅱ型3 期，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 不同分期Eos NPs 的TSLP、Bach2、IL-9 表达情况比较［n（%），（±s）］Table 2 Comparison of TSLP，Bach2，and IL-9 expression of Eos NPs in different stages［n（%），（±s）］

表2 不同分期Eos NPs 的TSLP、Bach2、IL-9 表达情况比较［n（%），（±s）］Table 2 Comparison of TSLP，Bach2，and IL-9 expression of Eos NPs in different stages［n（%），（±s）］

类别Eos NPs 分型nⅡ型2 期Ⅱ型3 期37 48 TSLP阳性26（70.27）46（95.83）10.539＜0.001阴性11（29.73）2（41.67）阴性16（43.24）42（87.50）t/χ2值P 值Bach2阳性21（56.76）6（12.50）18.881＜0.001 IL-9（pg/mL）6.34±0.82 7.45±1.48 4.099＜0.001

2.3 三项指标与不同分期Eos NPs 的相关性分析

Pearson相关性显示，TSLP、IL-9与Eos NPs分期呈正相关（R=0.625，P=0.036；R=0.893，P=0.027），Bach2与Eos NPs分期呈负相关（R=-0.875，P=0.027）。

2.4 三项指标对Eos NPs 患者的诊断价值

联合TSLP、Bach2、IL-9 检测诊断Eos NPs 的灵敏度（0.945）、特异度（0.907）、AUC（0.926）均显著高于单一指标检测（P＜0.05）。见表3、图2。

图2 ROC 曲线图Figure 2 ROC curve

表3 三项指标对Eos NPs 患者的诊断价值Table 3 The diagnostic value of three indicators for Eos NPs patients

3 讨论

Eos NPs 是慢性鼻窦炎伴鼻息肉的一种，在东亚发生率较低，但近年来相关研究数据显示，亚洲Eos NPs 比例在未来仍有继续增加的趋势［7］。探讨相关细胞因子在Eos NPs 中的表达，对于Eos NPs的发生机制和诊断价值有着至关重要的意义。

TSLP是一种主要来源于上皮细胞、肥大细胞的细胞因子，能够促进Th2型炎症反应的发生。TSLP与树突状细胞的受体结合，通过表达CD4+的T细胞，促进白介素-4（Interleukin-4，IL-4）等因子的产生，增强Th2的免疫应答作用［8］。IL-9作为一种炎性因子，可作用于多种炎症细胞，参与气道炎症反应［9］。Bach2主要表达于T细胞及B细胞中，近年研究显示，Bach2可维持细胞免疫稳态，促进Th2型免疫应答［10］。本次研究结果显示：实验组TSLP的阳性率及IL-9水平均高于对照组，Bach2 的阳性率低于对照组，提示TSLP、Bach2、IL-9在CRSwNP发病过程中发挥重要作用，与张佩珊等［11］研究中Eos NPs患者IL-9、TSLP升高及吴君等［12］研究中Eos NPs患者Bach2低表达结果一致。

研究发现，IL-9 表达于人外周血中的嗜酸性粒细胞表面，参与过敏性疾病的炎症反应，IL-9 水平升高可促进机体全身和鼻腔局部的免疫炎症反应，使各种炎症细胞和炎症因子向炎症部位迁移，加重鼻腔局部组织损伤和粘膜重塑，促进Eos NPs 的发展［13］。大量的细胞类型已经被证明能够在体内和体外对TSLP 产生反应，如T 细胞被TSLP 刺激时可促进CD4+T 细胞向Th2 细胞分化，从而促进Th2 的免疫应答作用［14］。吴君等［12］研究表明：Eos NPs 疾病发展中，Bach2基因可负向调节嗜酸性炎症机制。气道上皮细胞在接触到病原体或过敏原后能够产生众多炎症介质，在黏膜炎症的发生中起着重要的作用。本次研究发现：Ⅱ型2期的TSLP阳性率、IL-9水平低于Ⅱ型3期，Bach2阳性率高于Ⅱ型3期，与既往研究结果［15］一致，说明TSLP、Bach2、IL-9Eos NPs 患者疾病程度有关。疾病愈发严重，浸润程度增多，TSLP、IL-9及Bach2在促进Th2型炎症反应中均发挥重要作用，对NP的发展与病情进展有着重要影响。

Pearson相关性显示，TSLP、IL-9 与Eos NPs 分期呈正相关，Bach2 与CRSwNP 分期呈负相关，与Sidwell 等［16］研究结果一致。可见随着Eos NPs 患者疾病严重程度的增加，TSLP 阳性率、IL-9 水平会逐渐升高，Bach2 阳性率逐渐下降。这一研究结果证实TSLP、Bach2、IL-9 均与Eos NPsP 患者病情进展存在关联，临床可通过检测TSLP、Bach2、IL-9 评估Eos NPs 患者病变损害程度。进一步绘制ROC 曲线结果显示：联合TSLP、Bach2、IL-9检测诊断Eos NPs 的灵敏度、特异度、AUC 均显著高于单一指标检测，表明三者联合检测对诊断CRSwNP 有重要临床意义。

综上所述，TSLP、Bach2、IL-9 的表达水平与Eos NPs 疾病程度和浸润程度有关，联合三者检测对诊断Eos NPs、评估患者病情进展有重大意义，可为临床判断提供新的理论依据。