HPLC 法复方克力乳膏中氯霉素和醋酸曲安奈德含量的同时测定

马婧 郑梓扬

（1.漳州卫生职业学院药学系，福建 漳州 363000；2.莆田市食品药品检验检测中心，福建 莆田 351100）

复方克力乳膏是由氯霉素、醋酸曲安奈德和克拉霉素组成的复方外用乳膏，临床主要用于过敏性皮炎、神经性皮炎、湿疹等，有抗真菌、抗过敏、消炎及止痒作用。为了更好地控制其产品质量，通过实验，确定并建立HPLC 法测定其氯霉素和醋酸曲安奈德等主要成分含量的方法，从而进一步有效控制该制剂的质量。

1 仪器与试药

LC-2030C3D 携带PDA 检测器（日本岛津公司）；XPE-206DR 电子天平（梅特勒托利多仪器有限责任公司）；甲醇为色谱纯；水为超纯水；乙醚为色谱纯。对照品：醋酸曲安奈德（批号100125-201406）、氯霉素（批号130555-201704）均购自中国食品药品检定研究院；复方克力乳膏（某市皮防院制剂）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱：Agilent ZORBAXSB-C18（250 mm×4.6 mm，5μm），流动相：甲醇—水—乙醚（64∶34∶2），检测波长：240 nm，柱温：30 ℃，流速：1.0 mL·min-1，进样量：10μL。

2.2 溶液的制备对照品溶液：精密称取氯霉素和醋酸曲安奈德对照品约200.10 mg 和15.06 mg，用甲醇配制成混合对照品储备液，浓度为含氯霉素约4.002 mg·mL-1，含醋酸曲安奈德约301.2μg·mL-1。精密量取上述混合对照品储备液1 mL，用甲醇配制氯霉素浓度为200.1μg·mL-1、醋酸曲安奈德浓度为15.06μg·mL-1的混合对照溶液。供试品溶液：精确称取新制备的复方克力乳膏约2.5 g，置50 mL 量瓶中，加入甲醇30 mL，80 ℃水浴中振荡20 min，待基质充分溶解后，冷却至室温，用甲醇定容，冰浴2 h，迅速滤过，取续滤液作为样品供试液。

2.3 阴性干扰试验按“2.1”项下的色谱条件，测得阴性对照品溶液、对照品溶液和供试品溶液的色谱图见图1～图3。

图1 对照品溶液

图2 供试品溶液

图3 阴性对照溶液

可见，所测样品中其他成分对氯霉素和醋酸曲安奈德的测定无干扰。氯霉素和醋酸曲安奈德两峰的理论板数均不低于3000，且氯霉素和醋酸曲安奈德两峰之间的分离度大于2.0。

2.4 线性关系的考察精密量取“2.2”项下混合对照液0.3 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL、3.5 mL，分 别置于10 mL 量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得系列标准溶液。按“2.1”项下的色谱条件测定，以峰面积（A）为纵坐标，进样浓度（C）为横坐标绘制出标准曲线，分别得氯霉素、醋酸曲安奈德回归方程氯霉 素A=56.192C-10.247（r=0.9993，n=5）、醋酸曲安奈德A=23.642C-3.217（r=0.9999，n=5）。结果表明氯霉素和醋酸曲安奈德在60.03～700.35μg·mL-1和4.518～52.71μg·mL-1范围内线性关系良好。

2.5 精密度试验取“2.2”项下的醋酸曲安奈德和氯霉素混合对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，连续进样6 次，测得氯霉素RSD 为0.21%（n=6），醋酸曲安奈德RSD 为0.18%（n=6），表明仪器精密度良好。

2.6 重现性试验取样品共5 份，按“2.2”项下制备供试液，按“2.1”项下色谱条件测定，结果氯霉素、醋酸曲安奈德峰面积的RSD分别为0.19%、0.23%，表明重现性良好。

2.7 稳定性试验取“2.2”项下供试品溶液，于室温放置0 h、3 h、5 h、8 h、10 h，按“2.1”项下色谱条件测定，结果氯霉素、醋酸曲安奈德峰面积的RSD分别为0.48%、0.36%。表明供试品溶液在10 h 内稳定性良好。

2.8 回收率试验精密量取9 份同一批号已知浓度的氯霉素和醋酸曲安奈德样品约2.5 g，精密加入氯霉素和醋酸曲安奈德对照品约为已知样品含量的80%、100%、120%的各3 份，按“2.2”项下制备供试液，按“2.1”项下色谱条件测定，按外标法以峰面积计算样品中氯霉素和醋酸曲安奈德含量，测得氯霉素和醋酸曲安奈德的平均回收率为99.92%，（RSD 为0.12%，n=9）和99.23%（RSD 为0.73%，n=9），由表中可以看出，该实验方法的回收率良好。见表1、表2。

表1 氯霉素回收率试验结果 （n=9）

表2 醋酸曲安奈德回收率试验结果 （n=9）

2.9 样品含量测定取3 批样品，按“2.2”项下方法制备对照品溶液和供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，按外标法以峰面积计算样品中氯霉素和醋酸曲安奈德含量。见表3。

表3 样品测定结果 （%）

3 讨论

3.1 溶剂选择因为氯霉素和醋酸曲安奈德对甲醇均有一定的溶解度[1]，所以前处理时，选择用甲醇充当溶媒；由于制剂配制时存在很多基质，需要80 ℃加热先除去部分基质，再冰浴2 h 凝固部分基质，最后迅速过滤，尽可能减少基质干扰。

3.2 波长选择由于制剂配方中，氯霉素占比较大，醋酸曲安奈德小，故以醋酸曲安奈德的最大吸收为主，通过PDA 检测器波段扫描分析得知在240 nm 波长处，有最大吸收且基质的干扰最少，所以选择检测波长为240 nm。

3.3 流动相选择由于在酸性条件下醋酸曲安奈德相对稳定，而在碱性条件下则水解严重[2]；氯霉素在酸性或碱性溶液中均易分解，故在分析中，在流动相中加入弱酸性的乙醚，有利于两组分稳定。从酸碱性上考虑，而在pH4～pH7 的微酸性或中性溶液中较为稳定[3]，最后根据多次试验，发现流动相在此比例下，跟各种基质的分离度最好，所以选择此比例流动相。