ciRS-7 和miR-7 在结直肠腺瘤和腺瘤癌变组织中的表达及相关关系

谭嘉圣 李伊倩 张宝庭 陈毅斌

（东莞市松山湖中心医院消化内科，广东 东莞 523000）

结直肠癌是消化系统常见恶性肿瘤，发生于结肠或直肠，通常直肠癌为常见，后期可出现大便性状改变、便血、腹痛等。结直肠癌的恶性程度较高，进展期患者的生存率仅有7%左右，但其进展需要一个过程，若能在早期及时诊出，同时采取有效措施加以治疗，可有效改善预后，提升患者的生存率。以往，早期诊断结直肠癌通常采用影像学手段进行，尽管有一定的效果，但鉴别诊断水平仍有待提高，而生物学分子标志物作为另一诊断方法，也有较大的争议[1]。近年来，医学界对结直肠癌的发病分子学机制研究不断深入。本文在以往的研究基础上，针对结直肠腺瘤和腺癌病变组织中，ciRS-7 和miR-7 的表达水平及相关关系进行分析，报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 纳入我院2019 年7 月至2021 年6 月收治的结直肠腺瘤和结直肠腺癌患者各30例为研究对象。结直肠腺瘤：男18例，女12例；年龄32～78岁，平均（58.74±2.36）岁。结直肠腺癌：男19例，女11例；年龄34～76 岁，平均（58.60±2.35）岁。两种疾病患者各资料差异不显著（P＞0.05）。

1.2 方法 采集结直肠腺瘤、结直肠癌患者新鲜组织标本，平均分为3 份，其中一份立即送病理诊断，其余两份离体30min 后用EP 管保存，存储至-80℃的冰箱中。经荧光定量PCR（qRT-PCR）检测组织标本中ciRS-7 和miR-7 的表达水平。（1）提取总RNA：取出组织标本，取100mg 转入研磨器，将液氮加入其中后研磨在至粉状，随后将1mL TRIzol 加入其中并摇匀。根据常规TRIzol RNA 方法进行总RNA 提取，成功后冰箱保存（-80℃）。（2）PCR 反应检测：经核酸蛋白检测仪，对RNA 的浓度、纯度进行检测，并反转录成cDNA，合成的cDNA 保存至-20℃冰箱，适当稀释后进行PCR 反应。检测时，严格按操作要求进行检测，确保检测的质量符合要求，以保证研究工作的顺利进行。ciRS-7 和miR-7 引物序列。见表1

表1 ciRS-7 和miR-7 引物序列

1.3 统计学方法 采用SPSS23.0 软件处理，用Excle绘制相关关系图，若P＜0.05 则表示差异有统计学意义和有明显相关性。

2 结果

2.1 两种疾病病变组织ciRS-7、miR-7 表达水平比较结直肠腺癌ciRS-7 的表达水平高于结直肠腺瘤，miR-7 表达水平低于结直肠腺瘤，差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表2

表2 两种疾病病变组织ciRS-7、miR-7 表达水平比较（）

表2 两种疾病病变组织ciRS-7、miR-7 表达水平比较（）

2.2 两种疾病病变组织ciRS-7 和miR-7 的相关关系结直肠腺瘤病变组织中，ciRS-7 和miR-7 呈明显负相关（P＜0.05）；结直肠腺癌病变组织中，ciRS-7 和miR-7 呈明显负相关（P＜0.05）。见图1

图1 iRS-7 和miR-7 表达的相关关系

3 讨论

CircRNA 广泛存在与真核细胞中，是一种内源性非编码新型RNA 分子，其不存在5’和3’末端，被RNA外切酶破坏的可能性较低，与传统线性RNA 相比，其稳定性更加突出，而上述特征的存在，也使其相较于miRNAs 和非编码长链RNA 作为生物学标志物应用在恶性肿瘤的早期诊治中更为适合[3]。ciRS-7 是RAN分子之一，形状为环状，其功能主要为miRNA 海绵、转录和转录后调节和与RNA 结合蛋白相互作用[4]。但是国内有关ciRS-7 与结直肠癌相关内容的研究并不多见。miRNAs 是非编码RNA，有长19～23 个的核苷酸，参与了细胞的增殖、侵袭、转移和凋亡[5]。RNA-7 是一种新型的肿瘤标志物，其在多种肿瘤中的表达均表现出下调，有研究指出其是恶性肿瘤预后不良的重要危险因素[6]。而国内尚无miR-7 在正常肠粘膜-结直肠腺瘤-肠癌序列癌变组织中表达方面的研究。本研究结果显示：ciRS-7 表达水平，结直肠腺癌高于结直肠腺瘤（P＜0.05）；miR-7 表达水平，结直肠腺癌低于结直肠腺瘤（P＜0.05），说明了结直肠腺瘤→腺癌的发病过程中，ciRS-7 表达上升，miR-7 表达下降。此外，ciRS-7、miR-7 的表达呈显著负相关（P＜0.05）。由此可推测，在结直肠癌细胞中ciRS-7 可抑制miR-7 的表达，其可能发挥出了miR-7 抑制剂的作用。

综上，结直肠腺癌ciRS-7 表达高于结直肠腺瘤，miR-7 表达低于结直肠腺瘤，ciRS-7、miR-7 呈显著的负相关。