HPLC 法测定对乙酰氨基酚杂质含量

支永强，刘晓莲，马宁宁，韩 啸，杨藏军，王俊凯，代国爱，郝新庭

（河北冀衡药业股份有限公司，河北 衡水 053400）

0 引言

对乙酰氨基酚（Paracetamol） 是由对氨基苯酚和冰醋酸通过酰化反应生产而成，又名扑热息痛，为白色结晶或结晶性粉末，无臭，味微苦，是一种临床上常用的解热镇痛药。

对乙酰氨基酚解热镇痛的作用与阿司匹林相似，但基本无抗炎作用，对血小板及凝血机制无影响，另外，对乙酰氨基酚还具有解热作用缓慢而持久、刺激性较小、极少有过敏反应等优点。此外，其还可用于药物扑炎痛的合成、作为有机合成的中间体和过氧化氢的稳定剂等。

企业对于科研项目成果转化的意识较淡薄。主要体现在两方面：科研课题大多集中于理论层面方面，与解决实际问题有关的科研项目仍然较少，许多项目缺乏市场分析，容易造成科研成果与市场需求不匹配，成果转化难度加深；另一方面，科研项目管理大多局限于完成结项验收，缺乏对阶段性成果和最终成果的凝结与转化，导致科研项目成果没有得到及时的应用和推广。

目前，对乙酰氨基酚已成为世界上应用最广泛的药物之一，是国际医药市场上头号解热镇痛药，同时也是我国原料药中产量最大的品种之一。

1.1.3 仪器:日立7020型全自动生化分析仪;Beckman-Coulter MAXM血球分析仪;电子称(常熟市双杰测试仪器厂产品);万分之一电子天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司产品);Thermo BIOFUGE PRIMO R型离心机。

参照中国药典2020 版要求，当使用高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC） 检测对乙酰氨基酚原料药时，时常检测到对乙酰氨基酚二聚体杂质峰，有时导致对乙酰氨基酚质量不合格，需返工处理。所以我们采用HPLC法测定对乙酰氨基酚二聚体来达到提高产品质量的目的。

1 实验仪器与试剂

1.1 主要实验仪器

UltiMate 3000 型高效液相色谱，赛默飞世尔科技（中国） 有限公司。

KQ-250DB 型数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司。

Dsent=0.001918dcip(-1)+0.000884dcip(-2)-0.461604dsent(-1)-0.708382dsent(-2)+0.019000(M)

PURELAB flex 型超纯水仪，威立雅水处理技术（上海） 有限公司。

BSA224S 型电子分析天平，赛多利斯科学仪器（北京） 有限公司。

(2)离散数据网格化→参数设置：搜索半径为采样点距的2～5倍。(RX=2000，RY=2000，幂指数加权，指数因子10)。

1.2 主要实验试剂

磷酸氢二钠，天津市大茂化学试剂厂。

2.范围拓展。一方面，家庭作为稳定的社会支持系统，对社区服刑人员心理矫治的效果有辅助促进作用，因此心理干预不再仅限于社区服刑人员，也包括其家庭成员，通过家庭心理咨询改善了社区服刑人员与家庭成员之间的不良关系，减少了因家庭所造成的不良应激，避免了家庭成员对社区服刑人员过多的指责或过分的关心，尤其是对未成年的社区服刑人员和暂予监外执行的社区服刑人员，有利于他们的社会功能修复，促使他们顺利回归社会。另一方面，村居社区矫正协管员聘用制度已覆盖全区，协管员掌握心理咨询知识有助于在走访社区服刑人员时，通过观察其表情和肢体语言，了解社区服刑人员的真实状态。

进样量：20 μL。

磷酸二氢钠，天津市大茂化学试剂厂。

10%四丁基氢氧化铵水溶液，上海麦克林生化科技有限公司。

甲醇，美国迪马科技有限公司。

其它各杂质峰面积的和不得大于对照溶液中对乙酰氨基酚峰面积的0.5 倍（0.5%）。

检测波长：245 nm。

2 方法与结果

2.1 对乙酰氨基酚二聚体结构式

对乙酰氨基酚二聚体结构式如图1 所示。

2.2 色谱条件

色谱柱：辛烷基硅烷键合硅胶色谱柱（AcclaimTM120 C8，250 mm×4.6 mm×5 μm）。

流动相：以磷酸盐缓冲液（取磷酸氢二钠8.95 g，磷酸二氢钠3.9 g，加水溶解至1000 mL，加10%四丁基氢氧化铵溶液12 mL） - 甲醇（90∶10）为流动相。

我蹑手蹑脚地走上阳台，生怕惊破了这场难得的精神“艳遇”。远远看去，昙花那海带状的绿叶上，一朵朵娇嫩的花蕾似乎正在微微颤动着。那白玉般的花苞徐徐绽开，鹅黄色的花蕊悄悄地探出花苞，有如初降生的婴儿满带着好奇打量着眼前的世界。渐渐地，片片花瓣如电影中的慢镜头一般完全展开，展现给我的是一种惊世骇俗的美丽！我不敢用手，只能用一种满含温柔的目光轻轻地触摸着它们。

流速：1.0 mL/min。

柱温：40 ℃。

(3)预埋螺栓控制器的设置。利用布置好的控制点，在控制点两侧斜插钢筋，架设钢管支架，两端装紧线器，抽紧紧线器上的钢丝绳，使钢丝绳位于控制轴线上。

其中，甲醇为色谱纯，磷酸氢二钠，磷酸二氢钠，10%四丁基氢氧化铵水溶液均为分析纯试剂。

样品稀释剂：甲醇∶水（4∶6）。

测绘新技术在建筑工程测量中的地位越来越重要，尤其是随着建筑工程行业的规模不断壮大其重要性越来越突出。但与此同时，传统的测绘技术因为效率、准确性和可靠性的问题很难再满足建筑工程发展的需要。在这种状况下，越来越多的新的测绘技术不断涌现对推动测绘事业的发展以及提高建筑工程测量的准确度和可靠性起到了重要作用。

理论板数按对乙酰氨基酚峰计算≥2000，杂质二聚体与对乙酰氨基酚峰的分离度应符合要求。

2.3 溶液配制

供试品溶液：取本品0.2 g，精密称定，加溶剂（甲醇∶水为4∶6） 溶解并稀释至10 mL 制成每1 mL 中约含20 mg 的溶液，作为供试品溶液。

对照溶液：另取对乙酰氨基酚二聚体杂质对照品10 mg，精密称定，加溶剂（甲醇∶水为4∶6）溶解，并稀释至100 mL 的容量瓶中。制成每1 mL中约含对乙酰氨基酚二聚体0.1 mg 溶液，作为对照品溶液。

精密量取对照品溶液与供试品溶液各1 mL，置同一100 mL 量瓶中，加溶剂（甲醇∶水为4∶6） 稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。

选择我院内科1-3月份住院病人有便秘症状患者随机选取60名,随机分为2组,年龄60-92岁,平均年龄78.9岁,其中男33例,女27例,随机分为2组,每组30例,2组患者(性别、年龄、病程等)资料比较差异无统计学意义,具有可比性。

系统适用性要求理论板数按对乙酰氨基酚峰计算≥2000，杂质二聚体与对乙酰氨基酚峰的分离度应符合要求。

精密量取供试品溶液与对照品溶液各20 μL,分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的4 倍。

供试品溶液的色谱图中如有与对照品溶液中对乙酰氨基酚二聚体杂质保留时间一致的的色谱峰，按外标法以峰面积计算，对乙酰氨基酚二聚体杂质峰面积≤对照品溶液中对乙酰氨基酚的峰面积的0.1 倍（0.1%）。

对乙酰氨基酚二聚体标准品，含量＞99%，TRC 多伦多研究化学品公司。

2.4 HPLC 方法学考察

2.4.1 专属性考察

取空白溶剂20 μL，按照“2.1”项下的色谱条件，注入液相色谱仪。检测结果表明，无其它色谱杂峰，对对乙酰氨基酚及对乙酰氨基酚二聚体的含量测定无明显干扰，证明该方法专属性良好。

2.4.2 线性关系考察

精密称取对乙酰氨基酚二聚体杂质标准品适量，加样品稀释剂溶解并稀释成浓度为50、100、200、300、400、500 μg/mL 的6 个不同对乙酰氨基酚二聚体杂质标准品溶液，并依次编号。

我国的军粮供应工作已经走上了制度化、标准化、规范化道路，军粮管理、供应和服务工作得到很大的发展。现在纸制军用粮票已经被更先进、更快捷的电磁卡所取代，纸制军用粮票完成了历史任务，在我党我军的历史上为中国人民的解放事业和国防建设事业做出了重大贡献，将被载入史册，彪炳千秋，为后人铭记。

取上述各浓度的溶液20 μL，按照“2.1”项下的色谱条件，注入液相色谱仪，记录色谱图并计算峰面积。得出的数据以峰面积为纵坐标，以乙酰氨基酚二聚体杂质的浓度为横坐标，绘制标准曲线。对乙酰氨基酚二聚体杂质线性关系图如图2所示。

由图2 可以看出，在50 ～500 μg/mL 的线性范围内，具有良好的线性关系，相关系数R2=0.9998，线性方程为y=0.525 x+10.595。

2.4.3 重复性考察

精密称定对乙酰氨基酚二聚体标准品适量，配制成对乙酰氨基酚二聚体标准品0.4 mg/mL 的溶液，取上述溶液20 μL，按照“2.1”项下的色谱条件，注入液相色谱仪，连续进样6 针。结果表明，检测液相检测重复性良好，各峰面积RSD＜2.0%，符合分析方法学要求。对乙酰氨基酚二聚体杂质液相色谱图谱如图3 所示。

图3 对乙酰氨基酚二聚体杂质液相色谱图谱Fig.3 A liquid chromatography map of the acetaminophen dimer impurities

2.4.4 稳定性考察

精密称定对乙酰氨基酚二聚体标准品适量，加样品稀释剂稀释成适当浓度的供试品溶液，分别于0、2、4、8、12、18、24 h 各取20 μL，按照“2.1”项下的色谱条件，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明，与0 小时相比，24 h 溶液稳定，峰面积RSD＜2%，符合方法学要求。且系统适用性实验表明，理论板数按对乙酰氨基酚峰计算＞2000，杂质二聚体与对乙酰氨基酚峰的分离度＞1.5，分离度应符合要求。

针对性产品的研发离不开大数据的收集反馈，更离不开创新研发实力的支持。他表示，未来倍丰盐湖农业科技将继续发挥自身优势，不断整合各方资源，向产业链上下游持续延伸，与各科研院所不断加强合作，在现有的产品基础上加大创新研发力度，不断推陈出新，为中国农民提供越来越多的、具有针对性的优质肥料。

2.4.5 样品的检测

按“2.2”项下溶液的配制标准，取六批样品进行有关对乙酰氨基酚二聚体杂质的检测，杂质的量分别为0.05%、0.07%、0.08%、0.08%、0.06%、0.05%，均符合中国药典2020 版要求。

3 结语

本文以辛烷基硅烷键合硅胶色谱柱（250 mm×4.6 mm，5μm） 为固定相；以磷酸盐缓冲液（取磷酸氢二钠8.95 g，磷酸二氢钠3.9 g，加水溶解至1000 mL，加10%四丁基氢氧化铵溶液12 mL） - 甲醇（90 ∶10） 为流动相；流速：1.0 mL/min；柱温：40 ℃；进样量：20 μL；检测波长：245 nm。该方法对乙酰氨基酚杂质线性关系良好，线性方程：y =0.525 x +10.595，R2=0.9998。实验操作简单，简便快速、准确可靠的测定对乙酰氨基酚以及乙酰氨基酚杂质的含量，为提高对乙酰氨基酚产品的质量提供了保障。