阴道灌洗液中炎性因子表达水平与高危型HPV持续感染的相关性

李诗函 马煜磊

南阳医学高等专科学校第一附属医院妇科(南阳 473000)

宫颈癌是一种临床常见妇科恶性肿瘤，具有较高的发病率、死亡率[1]。有研究表明：人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)持续感染是引发宫颈癌的危险因素[2]。大多数女性在HPV感染之后的6～24个月，会从一过性的感染转为正常，仅有极少数患者会发展成为持续HPV感染[3]。T细胞免疫调节在肿瘤免疫中发挥着重要作用，可分泌转化生长因子-β(transforming grawth factor-β, TGF-β)、干扰素-γ(interferon-γ， IFN-γ)等一系列细胞因子，T细胞免疫调节失衡在宫颈癌的发生、发展中发挥着重要作用。基于此，为探究高危型HPV持续性感染与阴道灌洗液中炎性因子的相关性，本文选择本院2019年3月—2021年3月接诊的80例高危型HPV持续感染患者研究。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择本院2019年3月—2021年3月接诊的80例高危型HPV持续感染患者作为试验组，以病理组织检查结果分组，将19例宫颈癌患者作为试验组1、将30例宫颈上皮不典型增生(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)I级患者作为试验组2，将31例CIN II、III级患者作为试验组3，选取同期门诊体检的30例健康女性作为对照组。试验组1：年龄26～64岁，平均(45.62±6.34)岁；体质量42～85 kg，平均(63.52±6.34)kg。试验组2：年龄24～63岁，平均(45.51±6.29)岁；体质量44～84 kg，平均(63.67±6.31)kg。试验组3：年龄25～63岁，平均(45.69±6.21)岁；体质量43～84 kg，平均(63.67±6.31)kg。对照组：年龄26～62岁，平均(45.71±6.19)岁；体质量46～82 kg，平均(63.64±6.28)kg。4组相比P>0.05，可比较。

纳入标准：①试验组均存在HPV持续感染史，其中试验组1均满足《宫颈癌诊断与治疗指南》[4]中对“宫颈癌”诊断标准；②年龄在18周岁以上；③非月经期；④有正常性生活；⑤具备正常沟通、认知能力；⑥均知情，已同意并自愿参与此研究。

排除标准：①存在凝血功能异常者；②处于哺乳、妊娠期女性；③入组前接受过放化疗、手术等对症治疗者；④中途退出此研究者；⑤入组前6月存在免疫调节剂、糖皮质激素用药史者；⑥合并帕金森、狂躁症、痴呆者；⑦既往存在盆腔放疗史者；⑧入组前1周存在阴道用药史者。

1.2 方法

(1)阴道灌洗液中炎性因子检测：告知患者在标本采集前72 h，禁止性生活，采集前的1周不可进行阴道用药，标本采集要避开月经期。采集标本前患者自行清洁外阴，协助患者采取截石位，将阴道用窥阴器撑开，充分暴露宫颈。宫颈活检之前，以10 mL的生理盐水对阴道上1/3以及宫颈部位冲洗，在宫颈内部将生理盐水停留10 s，通过后穹隆吸出3.0～4.5 mL灌洗液，将血液标本剔除，取出灌洗液之后，以3 200 r/min离心速率、10 cm离心半径，离心处理5 min，取上层清液并置于-80 ℃环境待检。灌洗液取出后解冻，以ELISA法检测TGF-β、IFN-γ、白细胞介素-17(interleukin-17, IL-17)、白细胞介素-6(interleukin-16, IL-6)，试剂盒均由上海广锐生物科技有限公司提供，一切操作谨遵相关说明书完成。

(2)高危型HPV负荷量检测：采用HPV专用的宫颈刷，对宫颈顺时针刷5次，采集宫颈口脱落细胞，将其置于-4 ℃环境待检。以第2代杂交捕获法基因杂交信号放大系统检测高危型HPV负荷量。

1.3 观察指标

比较4组TGF-β、IFN-γ、IL-17、IL-6水平、高危型HPV负荷量。

1.4 统计学方法

2 结 果

2.1 阴道灌洗液炎症因子4组比较

试验组1的TGF-β、IL-17、IL-6水平均高于试验组2，试验组2高于试验组3，试验组3高于对照组，P<0.05；试验组1的IFN-γ水平低于试验组2，试验组2低于试验组3，试验组3低于对照组，P<0.05，见表1。

表1 阴道灌洗液炎症因子4组比较

2.2 高危型HPV负荷量4组比较

试验组1的 高危型HPV负荷量高于试验组2，试验组2高于试验组3，试验组3高于对照组，P<0.05，见表2。

表2 高危型HPV负荷量4组比较

2.3 阴道灌洗液炎症因子与高危型HPV负荷量相关性

TGF-β、IL-17、IL-6水平与高危型HPV负荷量呈正相关性，与IFN-γ水平呈负相关性，P<0.05，见表3。

表3 阴道灌洗液炎症因子与高危型HPV负荷量相关性

3 讨 论

大量研究证实：HPV持续性感染是引发宫颈癌的重要因素，多见于育龄期女性，将近99%的宫颈癌患者HPV检测结果是阳性[5-6]。宫颈癌患者普遍存在阴道排液、排血、白带异常等症状，如果得不到有效、及时的治疗，会造成癌细胞扩散，增加病死率[7]。在感染初期HPV以游离形式存在，不会引起细胞高级别病变，但在持续性HPV感染患者机体中，宿主DNA会结合HPV DNA，转录产生E6/E7 mRNA[8-9]。有研究表明：在清除HPV感染中细胞免疫发挥着极为重要的作用[10]。大部分HPV感染的患者，一般都有足够的免疫细胞对抗HPV，但对于部分宫颈癌患者而言，却存在免疫逃逸现象[11]。T细胞在肿瘤免疫应答中发挥着免疫监视、免疫调节等作用。正常人群机体T细胞处于动态平衡状态，已达到维持免疫平衡的作用[11]。但宫颈局部炎症反应会造成免疫抑制，有助于HPV持续性感染，促进宫颈癌发生、发展[12]。

本研究显示：试验组1的TGF-β、IL-17、IL-6水平均高于试验组2，试验组2高于试验组3，试验组3高于对照组，P<0.05；试验组1IFN-γ水平低于试验组2，试验组2低于试验组3，试验组3低于对照组，P<0.05。表明HPV感染越严重的患者，阴道灌洗液中炎症因子含量越高。分析如下：TGF-β属于生长因子，与恶性肿瘤的发生、发展联系密切，具有调控机体细胞转换、侵袭、迁移、增殖等作用。IFN-γ可以干扰病毒蛋白组分、基因转录，将人体病毒清除，宫颈癌患者机体IFN-γ浓度以低表达为主，IFN-γ浓度降低，意味着患者免疫力、抵抗力降低，更容易受到HPV侵袭。IL-17属于特征性细胞因子，可促进中性粒细胞活化、聚集，引发级联炎症反应。IL-6属于Th2细胞相关因子，由多种细胞产生，可促进B细胞、T细胞增殖、分化，在早期炎症反应中IL-6浓度会明显增高。本研究显示：试验组1的高危型HPV负荷量高于试验组2，试验组2高于试验组3，试验组3高于对照组，P<0.05。表明宫颈癌患者机体高危型HPV负荷量明显高于单纯宫颈上皮瘤病变及健康人群。本研究显示：TGF-β、IL-17、IL-6水平与高危型HPV负荷量呈正相关性，与IFN-γ水平呈负相关性，P<0.05。表明高危型HPV持续性感染患者阴道灌洗液炎症因子与高危型HPV负荷量存在一定的相关性，HPV感染会诱导免疫功能损伤，而炎症反应又会导致机体更容易被HPV侵袭[13-14]。由此可知，及时纠正高危型HPV持续性感染患者宫颈微环境炎症反应，为临床预防、治疗宫颈癌提供了新思路。

综上所述，高危型HPV持续性感染患者阴道灌洗液中TGF-β、IL-17、IL-6水平与高危型HPV负荷量呈正相关性，与IFN-γ水平呈负相关性，因此通过阴道灌洗液炎症因子检测，可评估HPV感染程度。