1例颅内损伤患者B（A）亚型鉴定 及临床紧急输血探讨

周国栋 史丽莉 屈英晓

作者单位：017000 内蒙古自治区鄂尔多斯，鄂尔多斯市中心医院输血科（周国栋、屈英晓）

210042 江苏南京，江苏省血液中心（史丽莉）

ABO血型系统是人类最早发现的血型系统，与临床治疗失血患者时进行红细胞输注关系最为密切。同时ABO血型变异也是临床实验室最常遇到的疑难问题［1］。B（A）亚型是罕见的ABO血型，但在亚洲人群中发生率较高，基因突变频率又以ABO*BA.04基因最高［2-3］。B（A）亚型的形成机制为B等位基因在正常B基因序列基础上发生单碱基突变，变异的B基因编码产物除了具有B糖基转移酶活性，还具有少量A糖基转移酶活性［4］。因此在实际临床检验工作中，B（A）亚型存在漏检和误检的可能性，后期供血和输血也存在安全隐患。本研究通过报告1例颅内损伤手术患者的血型鉴定和紧急输血配血过程，探讨B（A）亚型在基层医院患者紧急输血时分析原因，明确鉴定思路，从而有助于制定抢救和配血方案，现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 病例资料 患者男性，65岁，因外伤导致颅内损伤，于2021年8月26日10：08至鄂尔多斯市中心医院急诊科就诊入院，诊断为创伤性颅内血肿、蛛网膜下腔出血、硬膜下血肿、脑积水、贫血。患者病情危重，需行急诊开颅手术清除血肿、探查血管和三脑室底造瘘。术前紧急备血，患者既往无输血史，无移植配型史，玻片法初步鉴定血型为AB型RhD阳性。

1.2 仪器与试剂 抗-A、抗-B血清（批号：20200319） 由上海血液生物医药有限公司提供，抗-D血清（批号：20200713）由北京金豪生物医药有限责任公司提供，ABO标准红细胞（批号：202108020）、抗体筛选细胞（批号：202108008）、抗-H血清（批号：20201127）均由江阴力博有限责任公司提供，所有试剂均在有效期内使用；戴安娜WADiana 8XT全自动血型/配血分析仪及微柱凝胶卡均由西班牙戴安娜有限责任公司提供，KA-2200离心机为日本久保田公司生产。

1.3 检测方法 采用微柱凝胶法检测患者血型及筛查不规则抗体，采用试管法复核正反定型血型，并增加抗-H及人源抗-A血清试验。采用凝聚胺法和微柱凝胶法进行交叉配血。所有操作均严格按照《输血技术操作规程》输血科部分及厂家试剂说明书进行。

1.4 伦理学 本文符合医学伦理学标准，并经本院伦理批准（审批号：20211229）。

2 结果

2.1 ABO血型鉴定 采用微柱凝胶法进行血型初检，结果可见正定型为AB型RhD阳性，反定型为 B型，不规则抗体筛查呈阴性。采用试管法复查，患者血型为正定型A弱B强，反定型反应格局与B型一致，但H抗原反应性较B型明显增强，与人源抗-A血清在室温下不发生反应。将患者红细胞洗涤3次后，采用试管法复检血型，反应格局不变，初步判定为B（A）亚型，排除A2B亚型可能。见表1～2。

2.2 交叉配血 分别采用凝聚胺法和微柱凝胶法将患者血样与O型和B型少白悬浮红细胞、B型和AB型血浆分别进行交叉配血。结果见表3。

表11 例颅内损伤患者采用微柱凝胶法与试管法进行血型初检和不规则抗体筛查结果

表21 例颅内损伤患者B（A）亚型、A2B亚型血型试验格局

表31 例颅内损伤患者采用凝聚胺法和微柱凝胶法交叉配血结果

2.3 分子生物学血型确证 通过分析明确鉴定思路，采用血清学方法检测排除A2B亚型的可能，初步认为患者血型为B（A）亚型，随后与患者家属积极沟通，采集血液样本送至江苏省血液中心，进行血型基因测序，Exon 6、7外显子直接进行测序分析，所得结果如下：c.261del/G（图1），297A/G（纯合变异），526C/G（图2），640A/G、646T/A、657C/T（图3），681G/A、703G/A、771C/T、796C/A、803G/C（图4），829G/A、930G/A，分析基因型为ABO*BA.04/O.01.02。本科室为保障该患者后续用血及时安全，专门为其制定了特殊血型报告单。

图1 ABO基因第6外显子261del/G

图2 ABO基因第7外显子526C/G

图3 ABO基因第7外显子部分序列

图4 ABO基因第7外显子部分序列

2.4 手术中用血及疗效观察 该患者手术中输注B型少白悬浮红细胞4 U，无输血不良反应，后期追踪提示输注有效。

3 讨论

人体血型系统存在不同类型，在实际临床工作中如需对患者进行同种异体输血，可能导致多种抗原物质进入受血者体内，从而产生相应抗体，造成输血不良反应或输血无效［5-6］。输血科日常工作中采用的血型初筛方法主要为玻片法和试管法，ABO亚型具有遗传基础和明确的血清学特点，通常可通过正反定型不符发现ABO亚型，其中试管法所得正定型凝集强度和状态是重要的判断信息［7］，B（A）亚型的产生是由于B基因发生突变导致红细胞表面有少量A抗原表达，一般血清中也存在针对弱A抗原的抗体［8］。进行血型鉴定时，须严格执行ABO正反定型不符的判定标准，试管法正定型≥3+，反定型≥2+，正反定型价差不超过2+，遇到采用微柱凝胶法检测ABO血型正反定型不符时，须用试管法进行复核，必要时送上级实验室进行分子生物学扩增测序确证，保证临床输血的安全性。

B（A）亚型在血清中存在能与A1红细胞反应的抗-A抗体，试管法和微柱凝胶法检测结果与A1红细胞反应均呈强阳性，反定型反应格局与B型一致，正定型反应格局为A弱B强，H抗原反应性较B型明显增强，与人源抗-A血清在室温下不反应，将患者红细胞洗涤3次后，试管法复检血型反应格局不变，这些都有助于B（A）亚型与A亚B型和CisAB型的区分［9-11］。为明确B（A）亚型红细胞表面A抗原的血清学特点，特别将与其反应的单克隆抗-A抗体用倍比稀释的方法进行效价稀释，结果显示在单克隆抗A抗体效价≥512时，才发生抗原-抗体反应，这与马会敏等［1］关于6例B（A）亚型患者血清学特点的研究结果基本一致，进一步证实了B（A）亚型红细胞弱A抗原与人源性抗-A血清不发生反应的原因可能是由于两者的低效价表达。同时在临床实践中发现，仅依靠血清学方法区分ABO亚型仍然存在很高的漏检和误检风险，只有将分子生物学和遗传学方法紧密结合，才能更有力地解决疑难血型鉴定问题，通过基因测序和直系家系调查，解释引起疑难血清学现象的原因和机制［12］。

对于外伤引起的急救失血患者，输血不仅可以提升血容量和组织氧合，还能降低酸中毒和稀释性凝血病的发生概率［13］，出血是外伤患者在受伤后短时间内发生可预防性死亡的常见原因［14］。对ABO血型正反定型不符的患者，除符合条件者可采用自体输血外，应遵循同型或相容性输血原则，B（A）亚型在血清学和遗传学上属于B亚型，输血原则适用于输注O型洗涤红细胞或AB型血浆和AB型血小板。但在实际工作中发现，由于血源紧张和洗涤红细胞制备过程繁琐，不易在短时间内获取，上述原则在基层医院急救输血时并不适用。本文报告1例颅内损伤手术患者的急救输血过程，制定特殊的抢救配血方案，在通过血清学鉴别方法初步判定血型为B（A）亚型后，迅速采用凝聚胺法和微柱凝胶法分别与O型和B型少白红细胞、B型和AB型血浆进行紧急交叉配血，在患者与B型少白红细胞主次侧及B型血浆次侧均相合，未发生凝集溶血时，给予患者配合性输注。虽然其安全性机制尚未明确，但对于外伤急救患者，优先维持生命体征尤为重要。

本例患者与B型红细胞和B型血浆未发生凝集反应的原因可能是：① B（A）亚型A抗原表达弱，与供血者血浆中的人源性低效价表达的抗-A抗体未达到最适反应比例、发生反应的可能性很小；② B（A）亚型中表达的A抗原为冷抗原，在室温环境下与抗-A抗体不发生凝集反应［1］；③ B（A） 亚型中表达的A抗原与供血者血浆中绝大多数抗-A抗体无特异性结合位点［15］。

在临床急诊抢救输血过程中，尤其是针对外伤急救患者，遇到疑难血型和交叉配血不合时应积极有效地与临床医师及患者家属沟通，询问病史和家族史，通过分析，明确鉴定思路，制定合理的急救输血配血方案，保证临床输血的及时性与安全性，后期可通过分子生物学方法和遗传学方法进行ABO血型基因测序和直系家系调查进行确证分析，追溯其准确性和更确切的阐述其原理机制。

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