血清miR-210、miR-378、miR-499水平与AMI患者术后左心功能和MACE发生情况的关系

王 娟，颜永进，陆 齐

1.南通大学医学院，江苏南通 226019；2.江苏省海安市人民医院心内科，江苏海安 226600；3.南通大学附属医院心内科，江苏南通226001

急性心肌梗死(AMI)是临床上较为常见的冠状动脉急性、持续性缺血缺氧的心肌坏死性疾病，其主要表现为胸骨后疼痛，又以过度劳累、寒冷以及心理波动较强状态下发生为主[1]。而在诸多因素的影响下，AMI患者左心室的形态以及大小均会发生显著改变，这种改变在临床上被称为左心室重构(LVR)，随着LVR的不断加剧，势必会造成患者不良心血管事件(MACE)发生风险的显著升高[2]。所以在临床对AMI的治疗中，通过有效指标预测患者的LVR及MACE发生风险对改善和判断患者的预后有积极的意义。微小核糖核酸主要存在于真核细胞中，对于上游的基因表达以及下游蛋白的翻译具有显著的意义[3]，所以检测患者微小核糖核酸在患者病情的预测中具有重要的意义[4]。微小核糖核酸-210(miR-210)在缺血以及缺氧的状态下，受到缺氧诱导因子的影响，其水平呈现显著上升趋势，通过对机体miR-210水平的检测，对于机体组织缺氧状态的预测有重要意义[5]。血清微小核糖核酸-378(miR-378)在动脉粥样硬化疾病中呈现显著上升的趋势[6]。血清微小核糖核酸-499(miR-499)主要在心肌细胞中表达，血清miR-499可通过对血管内皮功能的损伤作用以及对血栓形成的促进作用进一步影响患者的预后[7]。本研究主要通过分析血清miR-210、miR-378、miR-499水平与AMI患者术后左心功能和MACE发生情况的关系，为AMI的临床诊断以及预后评价提供科学依据。

1 资料与方法

1.1一般资料 本研究采取前瞻性研究，将2018年1月至2019年1月在海安市人民医院行PCI治疗的120例AMI患者作为研究对象。所有患者中男53例，女67例；年龄52～74岁，平均(65.26±5.19)岁；体质量指数(BMI)平均(24.11±2.03)kg/m2；前壁心肌梗死46例，下壁或下壁正后壁心肌梗死41例，侧壁或高侧壁心肌梗死33例；心功能Killip分级[5]：Ⅰ期49例，Ⅱ期50例，Ⅲ期21例；术后3个月内发生心肌梗死、室速、室颤等MACE 29例(MACE组)，非MACE 91例(非MACE组)；根据超声检测结果，与治疗前相比，治疗后3周患者的左心室舒张末期容积增加超过20%则认定为LVR，LVR组44例，非LVR组76例。MACE组与非MACE组、LVR组与非LVR组患者的一般资料间差异均无统计学意义(P>0.05)，见表1、2。所有患者均签署知情同意书，本研究经海安市人民医院伦理委员会审核通过。

纳入标准：(1)患者均符合AMI的诊断标准[8]；(2)所有手术患者均符合PCI手术治疗指征。排除标准：(1)陈旧性心肌梗死再发心肌梗死患者；(2)结缔组织病患者；(3)瓣膜病变患者；(4)肝肾功能不全患者；(5)活动性出血患者。

表1 MACE组与非MACE组患者的一般资料比较

1.2方法 取所有研究对象外周静脉血4 mL，加入氯仿，3 500 r/min离心15 min，取血清，加入等体积的异丙醇，以Trizol试剂进行总RNA提取，以PCR进行扩增。miR-210上游引物序列为5′-TACATCTGGCTACTGGGTGTCGTATC-3′，下游引物序列为5′-TCGCAGGGTCCGAGGTATTC-3′；miR-378上游引物序列为5′-CCGCTCGAGCCCTCCCC CA AAC-3′，下游引物序列为5′-GAATGCGGCCGCCTGGGAGTGGTAAAAGGGGAGGAT-3′；miR-499上游引物序列为5′-ACACTCCAGCTGGGTGGATTTTTGG-3′， 下游引物序列为5′-CTCAACTGGTGTCGTGGA-3′。以5SrRNA作为内参基因，使用2-ΔΔCt计算血清miR-210、miR-378、miR-499的相对表达量。检测试剂由上海吉马制药技术有限公司提供，检测过程严格按照试剂说明书进行操作。

表2 LVR组与非LVR组患者的一般资料比较

1.3观察指标 (1)分别对MACE组与非MACE组患者术后血清miR-210、miR-378、miR-499水平进行比较。(2)分别对LVR组与非LVR组患者术后血清miR-210、miR-378、miR-499水平进行比较。(3)分析血清miR-210、miR-378、miR-499单项及联合检测对MACE以及LVR的诊断效能。

2 结 果

2.1MACE组与非MACE组患者的血清miR-210、miR-378、miR-499水平比较 MACE组患者术后血清miR-210、miR-378、miR-499水平均明显高于非MACE组(P<0.001)，见表3。

表3 MACE组与非MACE组患者术后血清miR-210、 miR-378、miR-499水平比较

2.2LVR组与非LVR组患者的血清miR-210、miR-378、miR-499水平比较 LVR组患者术后miR-210、miR-378、miR-499水平均明显高于非LVR组(P<0.001)，见表4。

2.3血清miR-210、miR-378、miR-499单项及联合检测对MACE的诊断效能 术后血清miR-210、miR-378、miR-499联合检测诊断MACE的曲线下面积(AUC)显著高于各单项检测的AUC(P<0.05)。术后血清miR-210、miR-378、miR-499检测对MACE的诊断临界值分别为1.71、4.10、4.89。见图1和表5。

表4 LVR组与非LVR组患者的术后血清miR-210、miR-378、miR-499水平比较

图1 血清miR-210、miR-378、miR-499单项及联合检测诊断MACE的ROC曲线

2.4血清miR-210、miR-378、miR-499单项及联合检测对LVR的诊断效能 术后血清miR-210、miR-378、miR-499联合检测诊断LVR的AUC显著高于各单项检测的AUC(P<0.05)。术后血清miR-210、miR-378、miR-499检测对LVR的诊断临界值分别为1.82、4.82、5.02。见表6和图2。

表5 血清miR-210、miR-378、miR-499单项及联合检测对MACE的诊断效能分析

表6 血清miR-210、miR-378、miR-499单项及联合检测对LVR的诊断效能分析

图2 血清miR-210、miR-378、miR-499单项及联合检测诊断LVR的ROC曲线

3 讨 论

心肌梗死是临床较为凶险的心脏疾病之一，其发病机制主要是由于心肌细胞的缺血或者缺氧造成大面积心肌细胞的损伤或梗死[9]。而心肌细胞一旦发生梗死，其恢复情况较差，对于患者的预后具有负面影响。LVR的主要原因是心肌细胞的凋亡以及神经内分泌系统的激活，进一步造成心肌梗死患者的炎症细胞因子以及相关信号转导通路异常激活[10]。而在心肌梗死进展过程中，微小核糖核酸主要通过对基因转录因子的表达调控参与心肌细胞以及血管平滑肌的传导。近年来的研究显示，在心肌梗死的进展过程中，较高水平的微小核糖核酸在一定程度上造成患者心肌细胞的凋亡，进而造成患者的LVR，严重影响患者的预后[11]。

在本研究中，MACE组以及LVR组的血清miR-210、miR-378、miR-499水平均明显高于非MACE组以及非LVR组。本研究分析认为，在心肌细胞缺氧以及缺血状态下，miR-210水平显著升高，造成心肌细胞的数量显著下降，病灶部位的心脏发生显著改变，进而升高了心脏发生心力衰竭的风险[12]。在以往的研究中，已经证实心力衰竭患者miR-210水平显著高于健康者，AMI合并心力衰竭患者的miR-210水平显著高于单纯性心肌梗死患者[13]。陈谦等[14]在对AMI患者的疾病进展研究中，发现患者的miR-378水平呈现显著升高趋势，与本研究结论一致。这是因为在缺血及缺氧状态下，患者的miR-378转录水平显著升高，造成血清miR-378水平呈现显著升高趋势[15]。羊子伦等[16]在对心肌梗死患者的分析中发现，发生心室重构的患者miR-499水平显著高于非心室重构患者，与本研究结果一致。这是由于miR-499主要表达于患者的心肌细胞中，随着心肌细胞的显著凋亡，患者miR-499水平呈现显著的升高趋势，进一步加剧了患者心室结构的变化。同时本研究结果显示，联合检测血清miR-210、miR-378、miR-499对MACE以及LVR的诊断效能显著高于各指标单独检测，并且血清miR-210、miR-378、miR-499的临界值对于患者术后MACE以及LVR的诊断具有一定的指导意义。但是由于本研究纳入的样本量较小，对于本研究结论在临床的推广应用有一定的局限性，有待在日后的大样本研究中进行验证。

综上所述，联合检测血清miR-210、miR-378、miR-499水平对判断AMI患者术后左心功能和MACE发生具有指导意义，可为AMI的临床诊断以及预后评价提供科学依据。