口腔清洁护理用品 牙膏中叶绿素铜钠盐含量的测定 高效液相色谱法(QB/T 5638-2021)

前言

本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件由中国轻工业联合会提出。

本文件由全国口腔护理用品标准化技术委员会牙膏分技术委员会(SAC/TC492/SC1)归口。

本文件起草单位：广州质量监督检测研究院、福建爱洁丽日化有限公司、淮安纵横生物科技有限公司、杭州皎洁口腔保健用品有限公司、黑龙江省轻工科学研究院。

本文件主要起草人：王继才、夏泽敏、李鑫宇、熊小婷、梁文耀、汪毅、聂明霞、税钿、吴谦、谭建华、席绍峰、郭长虹、吴玉銮、陈万金、丁观军、张秀英、王兆鹏、丁恺、路崴。

本文件为首次发布。

1 范围

本文件描述了采用高效液相色谱法测定牙膏等口腔清洁护理用品中叶绿素铜钠盐的含量，包括原理、试剂、仪器和设备、分析步骤、结果计算、检出浓度和定量浓度、回收率和精密度，允许差。

本文件适用于采用高效液相色谱法测定牙膏等口腔清洁护理用品中叶绿素铜钠盐的含量。

2 规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法

3 术语与定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4 原理

试样经70%乙腈水溶液(体积分数)提取，离心过滤后，用高效液相色谱仪测定叶绿素铜钠盐，以保留时间和紫外光谱图定性，外标法定量。

5 试剂和材料

除另有规定外，本试验用水均为GB/T 6682中规定的一级水。

5.1 叶绿素铜钠盐对照品CAS No:11006-34-1，纯度≥98%。

5.2 乙腈：色谱纯。

5.3 乙酸：分析纯。

5.4 0.5%乙酸水溶液(体积分数)：准确量取5mL乙酸(5.3)至烧杯中，再加入995mL纯水，混匀。

5.5 70%乙腈水溶液(体积分数)：准确量取700mL乙腈(5.2)至烧杯中，再加入300mL纯水，混匀。

5.6 叶绿素铜钠盐标准储备溶液(1000μg/mL)：称取叶绿素铜钠盐对照品(5.1)约10mg(精确至0.01mg)于10mL容量瓶中，用70%乙腈水溶液(5.5)定容至刻度，混匀。

5.7 叶绿素铜钠盐标准工作溶液：用70%乙腈水溶液(5.5)将叶绿素铜钠盐标准储备溶液(5.6)分别配成一系列浓度为0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL的标准工作溶液。

5.8 石英砂： 25～150目。

5.9 微孔滤膜：0.45μm，材质为尼龙。

6 仪器和设备

6.1 高效液相色谱仪：配二极管阵列检测器。

6.2 分析天平：精度为0.1mg和0.01mg。

6.3 离心机：转速不低于10000r/min。

6.4 涡旋振荡器：震荡速度不低于1500r/min。

6.5 超声波清洗器：功率不低于250W。

7 分析步骤

7.1 试样处理

将牙膏试样挤去20mm后，称取约1g试样(精确至0.001g)置于50mL聚丙烯离心管中，加入约1g石英砂(5.8)，再准确加入70%乙腈水溶液(5.5)20mL，涡旋混匀后超声提取10min，然后取适量提取液以10000r/min离心5min，上清液经0.45μm滤膜(5.9)过滤，供高效液相色谱测定。

7.2 液相色谱参考条件

液相色谱参考条件如下：

a)色谱柱：C18柱(4.6mm×150mm，5μm)，或等效色谱柱；

b)流动相：乙腈(5.2)+0.5%乙酸水溶液(5.4)，梯度洗脱，洗脱程序见表1；

表1 梯度洗脱程序

c)流量：1mL/min；

d)检测波长：408nm；

e)柱温：30℃；

f)进样量：10μL。

7.3 测定

7.3.1 标准曲线绘制

分别将标准工作溶液(5.7)注入高效液相色谱仪，在7.2色谱条件下测定标准溶液，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。叶绿素铜钠盐高效液相色谱图参见附录A中的图A.1。

7.3.2 样品测定

将按(7.1)处理好的待测试样溶液注入高效液相色谱仪，在7.2的色谱条件下进行测定，高效液相色谱图参见附录A中的图A.2。根据保留时间和紫外吸收光谱图定性，叶绿素铜钠盐3个特征峰(峰1：Cu chlorin e6、峰2：Cu chlorin p6和峰3：Cu isochlorin e4)的峰面积加和后采用外标法定量。叶绿素铜钠盐3个特征峰对应的紫外吸收光谱图分别见附录A中的图A.3、A.4和A.5。

试样溶液中叶绿素铜钠盐3个特征峰的响应值之和应在标准曲线的线性范围内，超过线性范围则应稀释后再进行分析。

8 结果计算

试样中叶绿素铜钠盐的含量X按公式(1)计算：

(1)

式中：X——试样中叶绿素铜钠盐的含量，单位为毫克每千克(mg/kg)；

c——试样溶液中叶绿素铜钠盐浓度，单位为微克每毫升(μg/mL)；

V——定容体积，单位为毫升(mL)；

f——稀释倍数，不稀释时为1；

m——试样质量，单位为克(g)。

9 检出浓度和定量浓度

叶绿素铜钠盐的检出限为4mg/kg； 定量限为10mg/kg。

10 回收率和精密度

在添加浓度20mg/kg～200mg/kg的浓度范围内，方法的回收率在91.4%～102.9%之内，相对标准偏差小于3.0%。

11 允许差

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

附录A

(资料性)

参考液相色谱图及紫外吸收光谱图

叶绿素铜钠盐标准溶液及阳性样品高效液相色谱图见(图A.1)和(图A.2),紫外吸收光谱图见(图A.3)、(图A.4)和(图A.5)。

标引序号说明:1-Cu chlorin e6；2-Cu chlorin p6；3-Cu isochlorin e4

标引序号说明:1-Cu chlorin e6；2-Cu chlorin p6；3-Cu isochlorin e4

图A.3 峰1(Cu chlorin e6)紫外吸收光谱图

图A.4 峰2(Cu chlorin p6)紫外吸收光谱图

图A.5 峰3(Cu isochlorin e4)紫外吸收光谱图