浅黄色金针菇工厂化生产菌株的杂交选育

景雪梅 王 雷 刘 晖 程调娟 赵娟龙 刘 亮 袁 斌 陶 军

（天水众兴菌业科技股份有限公司，甘肃 天水 741000）

杂交育种是一种经典育种方法，可以获得具有新农艺性状特征的杂交菌株，达到改变色泽、改善菇形、缩短育种周期等育种目标[1]。金针菇（Flammulina velutipes）是一种美味食用菌，是当今市场上走俏的天然保健食品之一，有“抗癌益智菇”的佳誉[2]。

金针菇分黄色和白色两种，野生菌株为黄色，白色为变异株。黄色金针菇生长速度快，抗逆性强，菇体呈深黄色，基部褐色，品相较差，但菌香味浓，口感优于白色金针菇[3]。白色金针菇出菇整齐，性状稳定，转化率高，多为工厂化生产。本试验选择白色和黄色金针菇作亲本进行杂交，以期获得农艺性状优良、口感佳，且适合工厂化栽培的浅黄色全新金针菇菌株。

1 材料与方法

1.1 供试材料

杂交亲本：黄色金针菇菌株Q100，具有柄粗、耐贮藏、生长周期短、抗病性强的特点；白色金针菇菌株QFC，为工厂化栽培，具有高产、菇形整齐、性状稳定的特点。以上菌种均为众兴菌业公司保存。

母种培养基：日本寒天培养基，称取培养基39 g，蒸馏水1 000 mL。

摇瓶配方：豆粕2 g，白砂糖12.5 g，KH2PO40.4 g，MgSO40.4 g，水640 mL。

栽培配方：玉米芯34.34%、米糠31.26%、麸皮7.05%、棉籽壳6.27%、大豆皮5.34%、啤酒糟6.63%、甜菜渣3.15%、轻质碳酸钙1%、豆渣3.05%、贝壳粉1.91%，含水量65%～67%，灭菌前pH 6.5～7.0，灭菌后pH 6.3～6.4。

1.2 选育方法

1.2.1 孢子收集与保藏

挑选农艺性状优良且未开伞的七八分成熟的亲本金针菇子实体，除去表面杂质并消毒，取未开伞、圆润、肉厚的菇帽，将菇帽子实层朝下粘在平皿上，以封口膜封口后常温放置2天左右，去掉菇帽后再封口，置于4 ℃冰箱保存[4]。

1.2.2 多孢杂交

将收集的亲本孢子各自制成孢子悬液，两者混合后稀释至3×104个/mL（血球计数板法）。取60 μL涂布于PDA平板，在18 ℃下暗培养12～15天，直至平板上肉眼可见大片密集菌落后，用接种针挑选有拮抗现象的小菌丝块转接于PDA平板上，继续培养5～6天。在菌落外缘挑取菌丝制片镜检，选有锁状联合且长势良好的杂交菌株，经斜面培养后于4 ℃下保存备用[5，6]。

1.2.3 出菇筛选试验

（1）初筛。将1.2.2节得到的杂交菌株进行出菇试验，培养料按栽培配方进行配制，干拌均匀后加水搅拌60 min，含水量控制在65%～67%。采用装瓶机装入1 500 mL的聚丙烯栽培瓶，每瓶湿料重1 060 g。高压灭菌后，采用液体菌种接种，每菌株接种16瓶。菌丝培养至满瓶后，移入育菇房进行工厂化出菇管理[7，8]，观察记录出菇整齐度、子实体形态特征等，并统计产量，筛选出农艺性状较好的菌株进入二次栽培试验。

（2）二次筛选。对初筛得到的优势杂交菌株进行二次栽培筛选，配方、拌料、装瓶等方法同初筛试验。每菌株接种3筐，每筐16瓶。待菌丝长满栽培瓶后，用自动搔菌机搔菌，搔菌后移入育菇房行出菇管理，观察记录出菇整齐度、子实体形态特征等，并统计产量，计算生物学效率。筛选出优良菌株，作为与亲本作对比试验的参试菌株。

1.2.4 杂交菌株与亲本的对比试验

（1）拮抗试验。将筛选得到的杂交菌株菌丝体及亲本的菌丝体按“品”字形接入日本寒天平板培养基[9]。观察并记录杂交菌株与亲本交界处的菌丝生长情况。

（2）菌丝生长速度测定。用接种针分别将杂交菌株和亲本的菌丝体划分为4 mm×4 mm×3 mm大小的菌种块，接种到日本寒天培养基上，放入18 ℃恒温培养箱培养。第6天测量菌落半径，计算菌丝生长速度[10]。每个菌株设3次重复。

（3）出菇试验。按栽培配方制料，灭菌后待料温冷却到19 ℃以下时，采用自动接种机在无菌条件下接种，每菌株接种10筐，每筐16瓶。接种后置于恒温恒湿培养室内，14～17.5 ℃暗培养22天。待菌丝长满栽培瓶后，采用自动搔菌机搔菌，之后移入育菇房进行出菇管理。每筐随机抽取2瓶，测定产量、生物学效率和子实体性状等指标。

2 结果与分析

2.1 杂交菌株的出菇筛选试验结果

对多孢杂交获得的78个杂交菌株进行镜检，选取具有锁状联合且长势良好的杂交菌株24个，进入初次出菇筛选试验。

2.1.1 初筛结果

由表1可知，各杂交菌株之间的产量、生物学性状差异显著，经过初筛，选出菇帽颜色淡黄、菇柄硬挺、产量超过360 g的优势菌株8个，产量从高到低依次为：ZX105 ＞ ZX112 ＞ ZX108 ＞ ZX111 ＞ZX124 ＞ ZX107 ＞ZX117 ＞ ZX119。其中，除ZX108和ZX111，ZX117和ZX119之间的产量差异不显著外，其余6个杂交菌株之间均有显著性差异。

表1 杂交菌株第一次栽培出菇的子实体产量和生长表现

ZX101、ZX103、ZX104、ZX106、ZX110、ZX118、ZX122、ZX123等8个菌株因出芽少或未出芽，ZX113因出芽过多过粗，均予以淘汰，未对其子实体生长状况进行观察统计。

2.1.2 二次筛选结果

对初筛选出的8个优势杂交菌株进行二次栽培出菇试验，获得优良菌株ZX112，作为后续参试菌株。从表2可知，8个优势杂交菌株的产量以ZX105为高，但其有脱蕾现象；菌株ZX112产量居次，为443.13 g，与其余7个菌株均有显著性差异。ZX112表现出芽量适中，生物学效率124%～133%；子实体生长表现较好，菇体紧实，较硬挺，边菇少，菇帽呈淡黄色偏白，肉厚，有质感，直径0.3～0.8 cm；菇柄基部呈淡黄色，上部为淡黄偏白，高15～17. 5 cm，直径0.3～0.4 cm。

表2 8个优势杂交菌株的出菇产量及子实体的生长表现

2.2 杂交菌株与亲本对比试验结果

2.2.1 拮抗试验结果

拮抗试验是一种快速检测菌株间亲缘关系的方法。对杂交菌株ZX112和两亲本Q100、QFC进行拮抗试验的结果显示，3个菌株之间菌丝尖端互不融合，均能形成明显的沟状拮抗线（图1）。表明杂交菌株ZX112是不同于两亲本的菌株。

图1 杂交菌株ZX112与两亲本的拮抗比较

2.2.2 杂交菌株和亲本的菌丝生长表现

从表3可以看出，杂交菌株ZX112的菌丝平均生长速度介于两个亲本之间，与两亲本均有显著差异；菌丝长势略弱于白色亲本，与黄色亲本相近，表现为气生菌丝较少。3个菌株均无粉孢子。

表3 优良杂交菌株与两亲本的菌丝生长表现

2.2.3 杂交菌株和亲本的子实体生长表现

为进一步比较杂交菌株ZX112与两亲本之间的子实体农艺性状差异，进行3次重复瓶栽试验，综合统计出芽情况及现蕾时间（从进入育菇房到开始现蕾的时间）、采收时间（从进入育菇房到开始采收的时间）、采收期（从开始采收到采收结束的时间）等指标的结果如下。

黄色亲本Q100的菇蕾少，生长初期粗壮，呈黄褐色，幼蕾期生长速度较快。白色亲本QFC的幼蕾整齐，呈白色，菇柄较细，生长速度较慢。杂交菌株ZX112幼蕾期表现良好，遗传了双亲的优良性状，幼菇菇柄粗且挺拔，颜色略浅于黄色亲本Q100（图2）。

图2 杂交菌株ZX112与两亲本出芽情况比较（入育菇房10天时）

杂交菌株ZX112和黄色亲本Q100的现蕾时间同步，均为4天，比白色亲本QFC早1天。从采收时间看，杂交菌株ZX112最先开始采收，分别比黄色亲本和白色亲本提早1天和3天。杂交菌株ZX112和亲本Q100的采收期一致，均为2天，其子实体瓶间发育速度的差异比白色亲本QFC小，同步性较好。

从子实体农艺性状看，亲本QFC是工厂化主栽品种，其菇体雪白、现蕾整齐，菇柄粗细均匀、基部无绒毛、根部不粘连，菇帽呈小球状内卷不易开伞，产量高（530 g/瓶）。而亲本Q100呈黄褐色，菇柄粗，直径为2～4 mm，菇帽呈钟盖形，易开伞，易有水帽，菌丝吃料能力强，生长速度快（菌丝培养期22天、出菇期25天），是传统袋栽的主要品种，工厂化栽培条件下易吐黄水，产量偏低（430.50 g/瓶）。杂交菌株ZX112遗传了双亲的优良性状，表现菇形好，菇柄粗、挺拔，基部呈黄色、上部淡黄偏白，菌肉厚实，菇帽呈淡黄色，略内卷，不易开伞，单瓶产量达446.0 g，与两个亲本的产量均达显著性差异。

3 结论与讨论

本试验通过黄色金针菇和白色金针菇的多孢杂交，获得浅黄色杂交菌株。对杂交所得的菌株进行初步筛选的结果表明，多孢杂交后的菌株大部分菌丝稀薄，活力较弱；而长势较好的杂交菌株菌丝较白、密，生长速度快于两亲本。复筛发现杂交菌株子实体颜色均为浅黄色，在出芽阶段由于湿度不均匀，部分杂交菌株出现吐黄水及轻微脱蕾现象，但脱蕾对后期的整体菇形影响不大。

经过初筛和复筛试验，选出子实体农艺性状较好、产量较高的杂交菌株ZX112，其与两亲本的比较试验发现，在母种培养阶段，杂交菌株ZX112的菌丝形态与黄色亲本较为接近，比白色亲本气生菌丝少，但菌丝长速更快；在栽培阶段，杂交菌株生长快、采收早，优于2个亲本菌株。从农艺性状及产量看，杂交菌株ZX112的产量稍高于黄色亲本，低于白色亲本，但菇形、菇体紧实度均优于黄色亲本，更接近于白色亲本；其色泽为浅黄，菇形整齐，菇柄粗壮，生长周期短，较适合于工厂化栽培及市场推广。

表4 杂交菌株与亲本的子实体性状及产量比较

图3 杂交菌株ZX112与两亲本子实体农艺性状比较