细胞DNA 倍体分析检测对提高宫颈癌筛查准确率的效果分析

王勇伟 陈剑 阙晓华

宫颈癌在临床中比较常见。该疾病的好发年龄段为50～55 岁女性群体。应用行之有效的癌前筛查方式,能够尽早发现宫颈癌前病变以及宫颈癌疾病。其针对于宫颈癌疾病的二级预防来讲,具有相当重要的现实意义。虽然说宫颈细胞学检查为诊断宫颈癌以及癌前病变的首选方法,但不容忽视的是,这种检查手段会受到基层医院病理质量等诸多条件的限制,因而有着比较高的误诊、漏诊率。宫颈细胞学阳性人乳头瘤病毒(HPV)分流能够在一定程度上降低疾病的漏诊率。但这种检查所花费用比较高,难以作为疾病普查手段。另外值得说明的是,这种检查方法针对于虽HPV 结果为阴性、但存在宫颈病变患者的漏诊风险几率上升。有研究表明：可以把 DNA 倍体分析用于诊断宫颈癌疾病。这种方法也能够有效判别宫颈癌恶性程度水平和具体疾病发展状态。但具体而言,迄今为止针对于宫颈癌筛查的有关研究还比较少。另外相关研究也没有把细胞DNA 倍体分析视为宫颈癌筛查的首选方式。相关研究证实［1］,DNA 倍体异常细胞数目改变情况和宫颈病变程度水平有着极大的关联性。实施细胞DNA 倍体分析能够以全面节约经费的基础之上,弥补既往手段筛查宫颈癌前病变漏诊率高的不足之处。结合实际情况,本文全面探讨细胞DNA 倍体分析联合 TCT 检查针对于提升宫颈癌筛查准确率的临床效果,现作出如下汇报。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2018年1月12 日～2021年6月30 日松阳县人民医院内7000 例进行宫颈癌筛查的女性为研究对象,年龄16～90 岁,平均年龄(44.28±1.24)岁。所有受试者均接受TCT 检查以及motic 宫颈细胞DNA 倍体分析检查。本实验经本院医学伦理委员会批准,同意实施。相关精神符合《赫尔辛基宣言》中的有关内容。纳入标准：自愿参加相关检查项目者；知情同意者；临床资料完整者。排除标准：拒绝参加实验调查者；妊娠哺乳期妇女；精神疾患；临床资料缺失者。

1.2 方法

1.2.1 宫颈DNA 倍体分析和结果判定标准 所有受试者取膀胱截石位接受检查。工作人员应用无菌棉签插入到患者阴道内,收集宫颈分泌物。并应用宫颈拭子在受试者的宫颈位置以顺时针方向旋转共计5 圈,用于收集宫颈脱落细胞。开展 TCT 检查以及 DNA 倍体分析。

收集完毕宫颈脱落细胞样本之后,将其放入到离心机内,以2000 r/min 的速度离心处理5 min,后去掉上清液以及黏液。再次悬浮下层细胞。完成上述工作以后,制备好细胞薄片。应用福尔根染色法完成分片以及染色工作。使用DNA 倍体定量分析系统,针对于细胞薄片开展扫描。具体参照物为细胞薄片中正常细胞。系统会依照所收集到的细胞染色体分布情况、形态、局部特定特征等诸多参数,自动的对于受检细胞进行计数以及分类。应用DNA 指数代表细胞内的DNA 含量水平。如果 DNA 指数在0.75～1.25,则判定为正常细胞；若DNA 指数在1.25～2.50,则判定为增生细胞或者疑似病变；如果DNA 指数＞2.50,则判定其为病变细胞。

开展宫颈DNA 倍体分析确定宫颈癌的具体标准：①正常者：样本细胞薄片之内主要为正常细胞、未发现病变细胞,并且增生细胞以及疑似病变细胞比例＜5%；②可疑者：样本内共计观察到2 个以下病变细胞,或者受试者的增生细胞以及疑似病变细胞比例达到5%～10%；③阳性案例。

样本内观察到3 个以上病变细胞,或者正常细胞以及疑似病变细胞比例＞10%。本实验中将可疑受试者以及正常者判定为 DNA 倍体结果阴性；针对于所有DNA 指数＞2.50 的病变细胞样本,均指派工作年限高的病理科医生反复性确认,如果最终认定其确实存在病变,将该结果视为阳性。

1.2.2 TCT 检查和结果判定标准 针对于宫颈脱落细胞的TCT 结果具体判定标准为：依照最新出版的《国际标准巴氏分级系统》完成相关判定工作。

1.3 观察指标 观察宫颈DNA 倍体分析及TCT 结果,比较宫颈 DNA 倍体分析、TCT 单独诊断与联合诊断的敏感度与特异度。

1.4 统计学方法 采用SPSS21.0 统计学软件处理数据。计数资料以率(%)表示,采用χ2检验。P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 宫颈DNA 倍体分析及TCT 结果 在7000 例受试者中,经活检操作显示：阳性84 例,阴性6916 例；阳性中CINⅠ42 例,CINⅡ20 例,CINⅢ22 例。DNA 倍体分析显示：阳性609 例,阴性6391 例。TCT 检查显示：阳性543 例,阴性6457 例。阳性中LSIL 137 例、HSIL 43 例、ASC-US 304 例、ASC-H 59 例。

2.2 宫颈 DNA 倍体分析、TCT 单独诊断与联合诊断的效果比较 联合诊断的敏感度与特异度均高于DNA倍体分析、TCT 单独诊断,差异有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1 宫颈 DNA 倍体分析、TCT 单独诊断与联合诊断的效果比较(%)

3 讨论

在正常情况下,人体细胞会经过有丝分裂过程维持相对恒定的DNA 倍体含量水平,共计23 对染色体。当细胞受到某些致癌因素影响以后,染色体的基因将会发生突变。就此引发染色体数目以及结构异常,出现 DNA 异倍体细胞［2］。从本质上来看,癌变指的是癌细胞自身的增长机制异常,拥有无限增殖能力。而染色体复制为细胞增殖本质,经过合成核酸的方式,用以满足细胞自身生长需求,具体会表现为DNA 的合成速率增快,含量激增,引发DNA 大批量堆积,继而出现了非整倍体细胞以及异倍体。由此能够看出,细胞核DNA 变化能够被视为反映肿瘤细胞增殖能力的重要生物学指标。当前国外已有很多应用DNA 定量分析系统开展宫颈癌和癌前病变的诊断案例。早在2005年,美国学者于权威医学期刊中所发表的文章就明确指出：肿瘤发生的重要原因为非整倍体出现,而肿瘤的出现则为非整倍体自我催化所产生的后果。当前诸多肿瘤病理研究工作证实：肿瘤的恶性程度和细胞异位体之间存在极大关联性。应用细胞DNA 定量分析技术能够有效检测细胞内的DNA 含量水平,用以分析其内部染色体倍体改变情况［3］,可帮助医生有效了解细胞的恶变程度。

从细胞DNA 定量分析技术的基本原理来看,这种技术能够对人体细胞核内的DNA 水平或者染色体倍数进行预测。通过此法全面判定细胞是否发生了病理改变。其为一类病理学经由既往形态描述朝向定量分析发展而来的产物［4］。在癌细胞和正常细胞增殖生长过程中,细胞核中的DNA 结构和含量都会发生一定改变［5］。在正常情况下,人类组织内细胞染色体共计23 对,其也被称之为二倍体。将正常细胞含量视为参照物后,把需要测定的每个目标细胞DNA 含量和正常DNA 含量加以对比,能够取得DNA 值。倘若该值为1,则代表其属于正常细胞；如果 DNA 值为2,则代表该细胞处于分裂期；如果 DNA 值在1～2,则代表细胞正处于染色体复制期内。DNA 的含量水平异常上升,则代表机体存在异变可能。由此能够看出：积极测定细胞核的DNA 含量水平,能够被视为判断机体细胞正常与否和癌细胞的重要指标［6］。

随着当前我国医学技术的进展,TCT 于制片以及取材方面有了很大进步。这也在一定程度上提升了对于宫颈癌前病变以及宫颈癌的诊断有效率［7］。但不容忽视的是,因为从事阅片工作的人员工作年限存在差异,进而引发TCT 检查结果可重复性不佳。通过该项检查所出具的结果仍具有一定的假阴性和假阳性率。对样本实施细胞DNA 倍体定量分析测定 DNA 含量水平,能够在极大程度上弥补单纯TCT 检查的不足。使用以上两种方法完成筛查工作,能够在极大程度上提升宫颈癌和癌前病变的诊断有效率［8,9］。

相关文献指出［5］,在没有发生病变的情况下,人体的宫颈细胞会停滞在静止期内。而在病理条件影响下,宫颈细胞会表现出异常增殖的现象［10］。其能够在细胞核中合成,导致大批量核酸染色体片段丢失或者增多,出现基因重组的情况,就此引发细胞核中的DNA 含量改变。以此为基础,进一步引起 DNA 数量改变,生成非整倍体的肿瘤细胞株。另有文献表明［11,12］,宫颈DNA 倍体非正常细胞数目和CIN、宫颈癌发生发展存在极大关联性。开展此项检查对于尽早诊断宫颈癌疾病来讲意义重大。

TCT 检查能够令宫颈涂片的平整度更高,同时也能够有效规避炎性碎片、宫颈黏液以及血细胞的影响,就此减少 TCT 结果的假阴性率,当前已然被广泛应用于筛查宫颈病变。本实验内,将宫颈活组织病理学检查结果视为诊断疾病的金标准,全面分析TCT、宫颈DNA 倍体分析和两类方法联合检查宫颈病变的价值,结果表明：联合诊断的敏感度与特异度均高于DNA 倍体分析、TCT 单独诊断,差异有统计学意义(P＜0.05)。结果表明两类方式联合检查能够在极大程度上降低疾病误诊、漏诊率。

总之,应用TCT 联合宫颈DNA 倍体分析联合筛查宫颈癌有着良好的价值,该法值得进一步在临床内推广以及应用。