血清与脑脊液miR-132、NSE、α2M水平在老年急性脑梗死后血管性痴呆中的变化及临床意义

闫秀娟,李 博,李宝柱,刘京锋,张 烜

血管性痴呆(VD)是一种继发于脑血管病的痴呆性疾病，主要是由于脑组织缺氧缺血性坏死造成认知功能损伤，早期准确诊断、评估病情程度是延缓病情进展的关键。近年来，临床研究证实，血清和脑脊液细胞因子的表达与VD密切相关[1]。因此寻找血清与脑脊液相关标志物对VD早期防治至关重要。微小RNA-132(miR-132)参与神经元分化、成熟及功能形成[2]。神经元特异性烯醇化酶(NSE)是中枢神经损伤的敏感性、特异性标志物，与神经元损伤程度密切相关[3]。另有研究表明，系统炎症在AD病理生理改变过程中发挥重要作用[4]。α2巨球蛋白(α2M)能在机体复杂炎症环境中保留免疫调节特性，发挥炎症保护作用[5]。本研究分析三者血清与脑脊液水平在老年急性脑梗死后VD患者中的变化及临床意义。

1 资料与方法

1.1临床资料 选取我院2019年4月—2021年6月收治的老年急性脑梗死156例，将VD 78例作为VD组，将无VD 78例作为无VD组。纳入标准：均有急性脑梗死病史，头颅CT/MRI检查证实有脑梗死病灶；于脑梗死发病3个月后评估认知功能，VD组Hachinski缺血量表评分≥7分，且符合《神经病学》中VD相关诊断标准[6]；患者及家属均签署知情同意书。排除标准：拒绝参加本研究者；急性脑梗死发病前伴有各种原因所致认知损害、精神疾病者；合并恶性肿瘤、药物或乙醇滥用史、甲状腺疾病者；合并严重心、肝、肺、肾功能不全者。2组年龄、性别、脑梗死病程等比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究经我院伦理委员会审批通过。

1.2方法

1.2.1血清、脑脊液miR-132、NSE、α2M检测方法：入组患者于急性脑梗死发病3个月后入院复查时采集清晨空腹静脉血3 ml，并行腰椎穿刺取脑脊液3.5 ml，均于4 ℃条件下离心，3500 r/min，15 min，取上清液，保存于-80 ℃恒温冰箱内待检。采用酶联免疫吸附试验检测血清、脑脊液NSE、α2M水平。采用实时定量PCR法检测血清、脑脊液miR-132水平，参照miRNA试剂盒步骤提取血清、脑脊液中的miRNA，采用反转录试剂盒将RNA反转录为cDNA，置于-80 ℃冷冻保存，引物序列由广州锐博公司设计合成，利用CFX manager 3.0软件进行Cq值分析,按照2-ΔΔCq法测定基因相对定量表达。

1.2.2VD病情程度判定标准:以简易智力状态检测量表(MMSE)作为判定依据，该量表满分30分，0～9分为重度认知功能障碍；10～20分为中度认知功能障碍；21～26分为轻度认知功能障碍；27～30分为正常。VD组轻度认知功能障碍22例，中度认知功能障碍31例，重度认知功能障碍25例。

1.3观察指标 ①2组血清、脑脊液miR-132、NSE、α2M水平。②血清、脑脊液miR-132、NSE、α2M水平相关性。③血清、脑脊液miR-132、NSE、α2M对VD发生的相对危险度预测价值。④VD组不同病情程度患者血清、脑脊液miR-132、NSE、α2M水平。⑤血清、脑脊液miR-132、NSE、α2M水平与VD病情程度的关系。⑥血清、脑脊液miR-132、NSE、α2M水平对VD病情程度的鉴别价值。

2 结果

2.1血清、脑脊液miR-132、NSE、α2M水平 VD组血清、脑脊液miR-132、NSE、α2M水平高于无VD组(P<0.05)。见表1。

表1 急性脑梗死后有无血管性痴呆两组血清、脑脊液miR-132、NSE、α2M水平比较

2.2血清、脑脊液miR-132、NSE、α2M水平相关性 Perason相关性分析显示，血清miR-132、α2M与NSE呈正相关(r=0.675、0.628，P<0.01)，miR-132与α2M呈正相关(r=0.562,P<0.01);脑脊液miR-132、α2M与NSE呈正相关(r=0.711、0.664，P<0.01)，miR-132与α2M呈正相关(r=0.609,P<0.01)。

2.3血清、脑脊液miR-132、NSE、α2M对VD发生的相对危险度预测价值 以两组血清、脑脊液miR-132、NSE、α2M平均值为界分为低水平与高水平。高水平血清、脑脊液miR-132、NSE及α2M患者发生VD的相对危险度高于低水平患者(P<0.05，P<0.01)。见表2。

表2 血清、脑脊液miR-132、NSE、α2M对血管性痴呆发生相对危险度的预测价值

2.4VD组不同病情程度患者血清、脑脊液miR-132、NSE、α2M水平 重度患者血清、脑脊液miR-132、NSE、α2M水平高于中度及轻度患者，且中度患者高于轻度患者(P<0.05)。见表3。

表3 急性脑梗死后血管性痴呆不同病情程度患者血清、脑脊液miR-132、NSE、α2M水平比较

2.5血清、脑脊液miR-132、NSE、α2M水平与VD病情程度的关系 Spearman相关性分析，血清miR-132、NSE、α2M水平与VD病情程度呈正相关(r=0.739、0.753、0.830，P<0.05)；脑脊液miR-132、NSE、α2M水平与VD病情程度呈正相关(r=0.746、0.795、0.736，P<0.05)。

2.6血清、脑脊液miR-132、NSE、α2M水平对VD病情程度的鉴别价值 血清、脑脊液miR-132、NSE、α2M水平鉴别VD病情程度的曲线下面积均>0.7。见图1、2。

3 讨论

VD是急性脑梗死后常见的并发症之一。据统计，约有15%急性脑梗死患者会并发VD，需及早采取可靠的诊治措施[7]。目前，临床上针对VD的诊断主要依赖神经影像学和神经心理学，缺乏相关有效的血液与脑脊液生化指标，故积极探索VD血清与脑脊液标志物成为临床研究热点。

miR-132能够调控多种蛋白表达，还具有调节突触形态结构和功能作用，参与突触可塑性、记忆、学习等多种神经和认知形成过程[8]。本研究证实，VD组血清、脑脊液miR-132水平高于无VD组，且会增加VD发生危险度。推测原因，miR-132作为一种重要的活动依赖性认知调节因子，必须保持在一定范围内表达才可确保正常的学习和记忆能力，其异常表达会导致认知功能受损[9]。刘欣等[10]研究报道，缺血性脑卒中后认知功能障碍患者血清miR-132水平呈下降趋势，本研究结果与其不一致，可能与纳入研究对象病情及个体差异性等原因有关。此外，本研究还显示，血清、脑脊液miR-132水平与VD病情程度呈正相关，且对病情程度具有良好评估价值，提示临床可将其应用于VD早期诊断和病情评估中，为制定防治措施提供依据。

图1 血清、脑脊液miR-132、NSE、α2M水平对轻度和中度血管性痴呆的鉴别诊断价值

图2 血清、脑脊液miR-132、NSE、α2M水平对中度和重度血管性痴呆的鉴别诊断价值

NSE在神经内分泌细胞、大脑神经元细胞质糖酵解途径中发挥关键作用，在中枢神经系统损伤后大量表达[11]。本研究结果显示，VD组血清、脑脊液NSE水平高于无VD组，与李元英[12]报道结果一致，且本研究发现其血清、脑脊液水平升高会增加VD发生的危险度。考虑原因为，当中枢神经系统遭到损伤，神经细胞膜完整性被破坏，NSE便会经由受损的血脑屏障进入血液与脑脊液中，从而导致其在血液与脑脊液中的含量急剧增加，进而促进VD发生发展。本研究还表明，血清、脑脊液NSE水平与VD病情程度呈正相关，单独鉴别VD病情程度的价值良好，可作为临床诊断与评估病情程度的血清和脑脊液标志物。

既往研究发现，α2M在神经退行性疾病中发挥重要作用[13]。本研究结果表明，血清、脑脊液α2M在VD患者中呈高表达，增加VD发生风险，且与VD病情程度呈正相关，与张冲等[14]报道一致。有研究显示，α2M可能结合白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6参与痴呆病理改变过程[15]。ROC曲线分析，血清、脑脊液α2M对VD病情程度判定有较好的价值。本研究还发现，血清、脑脊液miR-132、NSE、α2M水平之间均有相关性，提示miR-132、NSE、α2M在VD发生发展过程中可能存在共同作用，但本研究未详细探讨具体作用机制，三者的联合检测价值也有待进一步验证。

综上，血清与脑脊液miR-132、NSE、α2M在老年急性脑梗死后VD中呈异常表达，会增加VD发生危险度，且与病情程度密切相关，可作为临床判定病情程度的重要辅助指标。