羌白消痛胶囊有效成分的提取及鉴别

2022-05-27薛涛田海王吉东岳勇铭赵越超黄浩宇黄乐冉

牡丹江师范学院学报（自然科学版） 2022年2期

薛涛田海王吉东岳勇铭赵越超黄浩宇黄乐冉

摘要：探索羌白消痛胶囊脂溶性成分的最佳提取工艺，鉴别制剂中羌活、白芷、三七 3味药材.采用正交设计实验，以总皂香豆素的含量为考核指标，优选羌活等药材脂溶性成分的提取工艺;采用薄层色谱法（TLC）对制剂中羌活、白芷、三七进行鉴别.研究结果表明，最佳醇提工艺为：8倍量70%乙醇提取一次，时间为1 h.醇提工艺设计合理，重现性好，适合于工业化生产;鉴别方法专属性强，可用于羌白消痛胶囊的质量控制.

关键词：总香豆素; 回流提取;含量测定;薄层鉴别

[中圖分类号]R284.1/R282.5 [文献标志码]A

中药复方制剂因为所含成分复杂，各成分之间可能存在相互影响，给复方制剂的质量评价带来一定困难，鉴别其有效成分是中药质量检测的依据.实验室中常用的提取脂溶性成分的方法有渗漉法、浸渍法、索氏提取法、加热回流提取法等，合理的选用提取方法对整个实验有很重要的意义.羌白消痛方为一经验处方，经多年临床验证，药效明确.处方由八味中药组成，其中羌活性温，味辛、苦，具有散寒、祛风、除湿、止痛之功效，具有明显的消痛、抗炎、改善血液循环及保护肝脏的作用[1];白芷性温，气芳香，味辛，微苦，具有散风除湿、通窍止痛、消肿排脓的作用，临床广泛应用于感冒头痛、眉棱骨痛、鼻塞、鼻渊、牙痛、白带、疮疡肿痛等病症，有较好的疗效[1-2];两药共用，同为君药.羌活、白芷中均含有香豆素类成分，为羌活、白芷发挥消痛作用的主要活性成分.[1-2]本实验采用紫外-可见分光光计法，以异欧前胡素为指标物质，测定药材脂溶性提取物种中香豆素的含量，建立其含量分析方法，确定最佳提取工艺;选用乙醇加热回流提取法提取，方便省时.

1 材料与试剂

羌活、白芷、蛇床子、三七、白术（安徽沪谯中药饮片厂）;三氯甲烷、乙酸乙酯、冰醋酸、正己烷、甲醇等均为分析纯（北京化工厂）;异欧前胡素（国家标准物质研究中心，100620）.

2 紫外-可见分光光度计法测定总香豆素含量

标准品溶液的制备取干燥至恒重的异欧前胡素对照品2 mg，精密称定，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得.

供试品溶液的制备取干燥至恒重的干燥粉末约0.05 g，精密称定，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，精密量取1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得.[3-4]

最大吸收波长的测定配制欧前胡素标准品溶液.按《中国药典》2015年版四部“紫外-可见分光光度法”操作，以甲醇为空白，在200～500 nm波长进行扫描.[4]对照品溶液在301 nm波长处有最大吸收峰，《中国药典》2015版规定的检测波长为300 nm，综合扫描结果，确定测定波长为300 nm.

线性关系考察分别精密量取对照品欧前胡素溶液0.3，0.4，0.5，0.6，0.7 mL，置10 mL容量瓶中，用甲醇定容，以相应试剂作为空白溶液，在波长300 nm处测其吸光度，以总香豆素的含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，进行线性回归，得回归方程为Y=52.808X-0.017 6，r=0.999 8，表明总香豆素含量在0.040 6～0.121 8 mg范围呈良好线性关系.

方法学考察依次进行精密度实验、重复性实验和加样回收实验，各实验RSD值均小于2.0%，回收实验的平均回收率为101.2%，表明分析方法适用于提取物中总香豆素含量测定.制备好的供试品溶液在室温条件下放置，75 min内溶液中总香豆素的含量几乎不变，表明供试品溶液至少在75 min以内稳定.

3 药材脂溶性成分提取工艺筛选

药材吸醇量测定按处方比例称取药材共100 g，加入浓度为70%的乙醇1 000 mL，浸泡过夜，滤过，称量滤液体积，计算吸醇量.分别考察三批药材吸醇量，药材平均吸醇量为58 mL.

正交实验设计因素水平见表1.以乙醇浓度、加醇量、提取时间、提取次数为考察因素，采用四因素三水平正交设计，以总香豆素含量为考核指标进行实验.按处方比例取醇提药材100g，共9份，按因素水平表（表1）的设计条件进行乙醇回流提取，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩干燥成干膏[4-6]，正交实验表见表2，方差分析见表3.结果显示，以欧前胡素含量为考核指标，影响工艺因素大小的次序依次是B>A>D>C，B因素为主要影响因素，A，C，D因素影响较小;加醇量的影响具有显著性差异（P<0.05），所以选择最佳提取工艺为A1B2C1D1，即用8倍量70%乙醇提取一次，时间为1 h.

验证实验取药材1 000 g，共三份，按所确定的最佳提取工艺，加8倍量70%乙醇提取一次，时间为1 h，滤过，减压浓缩，测定，总香豆素的含量为9.12 mg/g.验证结果表明，按该工艺提取，产物中香豆素含量较稳定.

4 鉴别实验

4.1 胶囊剂中白芷的鉴别

取本品内容物粉末适量，加甲醇30 mL，超声处理20 min，滤过，滤液浓缩至2 mL作为供试品溶液.另取白芷对照药材，同法制成对照药材溶液.再取处方中缺白芷的其他药材，按“胶囊剂制法”制成阴性对照品及对照品溶液.[4-7]

按照《中国药典》2015年版第四部“0502薄层色谱法”实验，吸取上述三种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以氯仿∶甲醇∶水（7∶3∶1）作为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254 nm）下检视，结果见图1.图1结果表明，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显示相同颜色斑点，阴性无干扰.

4.2 胶囊剂中羌活的鉴别

取本品内容物粉末适量，加甲醇25 mL，加热回流30 min，滤过，挥干溶剂，残渣加甲醇1 mL溶解，作为供试品溶液.取羌活对照药材，同法制成对照药材溶液.取处方中除羌活的其他药材，按“胶囊剂制法”制成阴性对照品并制成阴性对照品溶液.[7-10]202721CF-2710-420B-86C7-1BA5BC2CE632

照《中国药典》2015年版第四部“0502薄层色谱法”实验，吸取上述三种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷∶乙酸乙酯（4∶1）作为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视，结果见图2.图2结果表明，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显示相同颜色斑点，阴性无干扰.

4.3 胶囊剂中三七的鉴别

取本品内容物粉末适量，加乙醇25 mL，超声处理30 min，滤过，挥干溶剂，加水15 mL使溶解，加水饱和正丁醇萃取2次，每次15 mL，挥干溶剂，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液.取三七对照药材，同法制成对照药材溶液.取处方中除三七的其他药材，按“胶囊剂制法”制成阴性对照品并制成阴性对照品溶液.[11-12]

照《中国药典》2015年版第四部“0502薄层色谱法”实验，吸取上述三种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲酸（20∶4∶0.5）作为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，置日光灯下检视，结果见图3.图3的结果表明，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显示相同颜色斑点，阴性无干扰.

5 结果与讨论

羌白消痛胶囊有效成分提取的最佳醇提工艺为：药材加8倍量70%乙醇提取一次，时间为1 h.该方法稳定可行，适合工业生产;TLC法鉴别出白芷、羌活、三七三味药材，阴性无干扰，重现性好，可以列入质量标准正文.

参考文献

[1]王珍.羌活的质量评价及药效学研究[D].北京：北京中医药大学，2012.

[2]吴媛媛，蒋桂华，马逾英，等.白芷的药理作用研究进展[J].时珍国医国药，2009，20（3）：625-627.

[3]何丹，杨林，张景勍.超高效液相色谱法测定九味羌活颗粒中欧前胡素和异欧前胡素的含量[J].中国医院药学杂志，2013，24（9）：2053-2055.

[4]国家药典委员会.中国药典[S].北京：中国医药科技出版社，2015.

[5]蒋丹，张晓军，郝婧玮.紫草素提取工艺研究[J].牡丹江师范学院学报：自然科学版，2016（01）：59-60.

[6]林伟鑫，姚曦，李勇，等.三七总皂苷提取、大孔树脂纯化工艺研究[J].食品与药品，2015，17（3）：156-161.

[7]王洪珍，張炜煜.益髓通经缓释颗粒的质量控制[J].中国医院药学杂质，2013，33（16）：1361-1364.

[8]朱美晓，陈燕，易进海等.羌活药材薄层色谱鉴别与含量测定[J].时珍国医国药，2011，22（1）：116-117.

[9]申睿，郭琪.抗炎止痛口服液的薄层色谱鉴别研究[J].解放军医药杂志，2013，25（8）：94-96.