血清膜结合黏蛋白2与前列腺特异性抗原水平对乳腺癌诊断的临床意义

刘慧敏，邵 华，姚壮凯，孙 岩

连云港市第二人民医院甲乳外科，江苏 连云港 222000

膜结合黏蛋白2（MUC2）是一种分泌性黏蛋白，在器官如胰腺、乳腺和前列腺的黏液癌中出现，Dhanisha 等［1］提出，血清黏蛋白水平升高可作为疾病诊断和预后的潜在标志物。前列腺特异性抗原（PSA）目前作为特异性肿瘤标记物用于诊断早期前列腺癌，研究显示PSA 同样存在于女性卵巢、乳腺等依靠激素调节的组织中，它在乳腺癌患者血清内异常表达［2］，本研究通过检测乳腺癌患者血清中MUC-2及PSA的浓度水平，旨在探讨联合检测两者作为乳腺癌患者早期诊断及筛查指标的可行性。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2017 年6 月—2019 年6 月于连云港市第二人民医院确诊为乳腺癌的96 例患者作为试验组，同时选取92 例乳腺良性疾病患者作为对照组，同时段选取93例体检健康女性作为正常组，试验组年龄28～60 岁，所有患者术前穿刺病理证实为乳腺浸润性癌，术前均未接受任何新辅助放化疗，内分泌治疗及靶向治疗等，其中I期35 例，Ⅱ期47例，Ⅲ期及以上共14 例。对照组92 例患者均为乳腺良性疾病，包括乳腺纤维瘤，乳腺中重度增生，乳腺导管扩张等，排除急慢性乳腺炎患者。正常组88 例年龄22～65 岁，均为样本医院体检健康正常人，入选标准为体检前一个月内无明显感染史，均无自身免疫疾病病史等。

1.2 检测方法

采用双抗体夹心法测定血清MUC2 和PSA 水平，静脉穿刺从三组人群中提取血液样本，并在室温下离心，离心后收集血清并立即在80 ℃冷冻直至析出。微滴度板分别预先涂上针对MUC2 和PSA 的抗体。三组人群用两者特异性的生物素偶联抗体加入到孔中。微滴板含有苯二烯，亲和素偶联到辣根过氧化物酶（HRP），分别加入到每孔中孵育。加入四甲基联苯胺（TMB） 底物溶液后，含有MUC2、PSA、生物素偶联抗体和酶偶联亲和素的孔出现颜色变化。采用全自动酶标仪测定标本血清中的MUC2 和PSA 浓度的吸光度（OD 值），确定血清中PSA 和MUC2 的浓度。

1.3 统计学方法

采用SPSS 19.0 软件进行统计学分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，采用单因素方差分析进行计量资料的组间比较，采用ROC 曲线评估PSA 和MUC2 在乳腺癌中的诊断价值，比较对乳腺癌诊断的敏感性和特异性，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组人群血清PSA和MUC2的检测结果

本研究显示试验组血清PSA、MUC2 的表达水平均高于对照组和正常组，差异有统计学意义（P＜0.05）。对照组和正常组血清中两者的表达水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 三组人群血清PSA和MUC2的检测结果（±s）

表1 三组人群血清PSA和MUC2的检测结果（±s）

组别试验组（n=96）对照组（n=92）正常组（n=93）P值PSA（ng/mL）0.267±0.068 0.149±0.017 0.135±0.024＜0.05 MUC2（μ/mL）65.66±4.15 23.88±6.22 23.12±3.67＜0.05

2.2 血清PSA和MUC2对女性乳腺癌诊断的ROC曲线及诊断价值分析。

计算Youden 指数=灵敏度+特异度-1，以Youden 指数最大切点为最佳临界点，确定PSA 和MUC2 诊断乳腺癌的最佳临界值，并计算曲线下面积（AUC），PSA 对乳腺癌诊断的ROC 曲线下面积约为0.80，诊断临界值为1.79，敏感度64.3%，特异度68.2%（图1），MUC2 对乳腺癌的ROC 曲线下面积约为0.90,诊断临界值为1.95，敏感度83.3%，特异度70.2%（图2）。

图1 乳腺癌患者轿清PSA的ROC曲线

图2 乳腺癌患者血清MUC2的ROC曲线

3 讨论

膜结合蛋白作为细胞表面受体，参与各种信号转导途径，研究表明黏蛋白在癌症中的高分泌状态是由于其独特的糖基化模式，作为多种生长因子和细胞因子的结合平台通过几个信号级联通路从而促进恶性细胞的增殖和转移［3］。在乳腺导管腺癌中，膜结合蛋白（MUC1、MUC3、MUC4） 和分泌黏液蛋白（MUC2、MUC5AC、MUC5B、MUC6）均上调。一些研究揭示了黏蛋白的一些独特作用，包括在整个乳腺癌进展过程中调节肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移相关，Rakha等［4］报告了MUC2表达与ER状态呈显著负相关，Patel等［5］发现，MUC2的表达阴性与组织学高分化分级相关，然而目前极少有研究报道MUC2 在乳腺癌患者血清中的表达水平，我们研究发现乳腺癌患者血清中的MUC2 表达水平明显高于乳腺良性疾病和正常人，而对照组和正常组之间差异均不明显，这也符合MUC2 在乳腺癌组织中高表达的生物学特性，提示肿瘤细胞可能通过分泌黏蛋白穿透血管壁参与血液流通来促进肿瘤细胞的扩散及转移。

PSA 作为KLKs 家族成员主要由前列腺合成，在性激素相关恶性肿瘤（前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌、睾丸癌）的发生发展中起着刺激细胞生长及促血管形成，降解细胞基层的作用，广泛用于前列腺癌的术前诊断及术后检测。Toru Hanamura 等［2］报道称乳腺癌患者的PSA 水平高于健康对照组，且乳腺癌患者术后血清PSA 水平低于术前检测水平，提示血清中同样可以检测出自乳腺癌组织中PSA，本研究同样发现乳腺癌患者血清PSA 水平稍高于对照组及正常组，但其敏感性及特异性均低于MUC2 组，ROC 曲线下面积可以反映诊断实验的准确度大小，一般认为AUC值在0.5～0.7时准确度较低,0.7～0.9时处于中等，大于0.9以上表明准确度高，本实验MUC2 （AUC）值为0.90，PSA（AUC）为0.80，说明MUC2 用于诊断乳腺癌的准确度较PSA 高，PSA 作为早期乳腺癌的血清筛查指标研究价值有待进一步深入探讨。

本研究的局限性在于这是一个单指标观察性研究，MUC家族的其他黏蛋白水平并未被评估，此外分开检测血清中的总PSA（T-PSA）和游离PSA（F-PSA）的浓度更能提高本次试验的检测效能，我们没有考虑术前新辅助治疗如（放化疗、激素治疗或靶向治疗等）及穿刺活检等创伤操作的影响，这些因素可能会影响试验结果，进一步扩大样本量联合检测MUC2 和PSA 的血清研究对两者作为乳腺癌的早期诊断及筛查指标更有说服力。