不同剂型蒙药暖宫七味的镇痛药效学研究*

韩运祺，肖云峰，王娜，田志杰

1.内蒙古医科大学，内蒙古 呼和浩特 010107； 2.内蒙古大唐药业，内蒙古 阿拉善盟 750306

痛经(primary dysmenorrhea)是女性经期或行经前后出现的周期性下腹疼痛，或痛引腰骶，可伴有恶心、呕吐、冷汗淋漓、手足厥冷等症状，甚至剧痛晕厥[1]。临床上，将痛经分为原发性(primary dysmenorrhea，PD)痛经和继发性(secondary dysmenorrhea，SD)痛经两种[2]，影响世界上50%的女性，其中，10%的患者症状严重，是影响妇女正常工作和生活质量的常见原因[3-4]。暖宫七味散现收载于卫生部药品标准蒙药分册，用于心、肾脏“赫依”病，气滞腰痛，小腹冷痛，月经不调，白带过多等，具有调经养血，暖宫止带的功效。本实验旨在研究比较暖宫七味散和暖宫七味胶囊对实验性痛经模型的镇痛作用，并初步探讨其机制。

蒙药暖宫七味又名“苏格木勒-7”由白豆蔻、天冬、手掌参、沉香、肉豆蔻、黄精、丁香七味蒙药材组成[5]，常用于治疗主因“赫依”引起的血功能失调，气血功能受阻所致疾病“巴达干”“希拉乌苏”凝滞型痛经，蒙医临床多用于经前、经期小腹冷痛，月经量少，色暗有块，畏寒便溏，舌苔白腻，脉沉紧[6]。其中，黄精补气，天冬养阴，肉豆蔻、白豆蔻固涩、温中，丁香、沉香祛寒镇痛，手掌参益肾健脾，理气和血，诸药合用，主治失血、带下等症[7]，暖宫七味的临床使用效果良好，但缺少实验研究基础，鉴于此，本实验旨在研究比较不同剂型的暖宫七味与0.2%盐酸哌替啶为阳性药的醋酸所致疼痛模型的镇痛作用，为暖宫七味的临床使用提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 实验动物SPF级雌性，昆明小鼠(以下简称KM小鼠)，6～8周龄，80只，体质量18～22 g，由内蒙古医科大学实验动物中心提供，动物生产许可证编号：SCXK(蒙)2020-0001，每5只饲养于1个饲养盒中，以北京科澳协力饲料有限公司提供的SPF级大小鼠维持饲料喂食，饲养期间自由摄水，并控制饲养环境室温为19～25 ℃、湿度为40%～60%。本实验通过内蒙古医科大学实验动物伦理委员会批准，批号YKD202102086。

清洁级，雌性日本大耳白兔6只，体质量 1.5～2 kg，由内蒙古医科大学实验动物中心提供，动物生产许可证编号：SCXK(蒙)2020-0001，独立饲养，自由摄食摄水，饲养环境室温为(23±2) ℃，相对湿度50%～60%。

1.2 实验药物及试剂暖宫七味散(内蒙古大唐药业股份有限公司，批号：19664004)；暖宫七味胶囊(内蒙古大唐药业股份有限公司，批号：20191105)；盐酸哌替啶注射液(湖北宜药集团有限责任公司生产，批号：171109)；冰醋酸(天津市津东天正精细化学试剂厂，批号：20181124)；羧甲基纤维素钠(以下简称CMC-Na，国药集团化学试剂有限公司，批号：20150026)；氯化钠(天津市鼎盛鑫化工有限公司，批号：20190901)；氯化钾(以下简称KCl，天津市鼎盛鑫化工有限公司，批号：20190311)；硫酸镁(以下简称MgSO4·7H2O，上海埃彼化学试剂有限公司，批号：F20161013)；磷酸二氢钠(以下简称NaH2PO4·2H2O，国药集团化学试剂有限公司，批号：20200529)；碳酸氢钠(以下简称NaHCO3，天津市鼎盛鑫化工有限公司，批号：20190609)；氯化钙(以下简称CaCl2，天津市风船化学试剂科技有限公司，批号：20200612)；葡萄糖(无锡市亚泰联合化工有限公司，批号：20180901)。

1.3 实验仪器智能热板仪(济南益延科技发展有限公司，型号：YLS-6B)；生物机能实验系统(成都泰盟软件有限公司，型号：BL-420F)；电子天平(奥豪斯仪器上海有限公司，型号：AR224CN)；数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司，型号：KQ-250DE)。

1.4 实验方法

1.4.1 实验分组取雌性KM小鼠80只，随机分为空白组、阳性药组、暖宫七味散低剂量组、暖宫七味散中剂量组、暖宫七味散高剂量组、暖宫七味胶囊低剂量组、暖宫七味胶囊中剂量组、暖宫七味胶囊高剂量组，每组10只。

日本大耳白兔6只，标示为暖宫七味散低剂量组、暖宫七味散中剂量组、暖宫七味散高剂量组、暖宫七味胶囊低剂量组、暖宫七味胶囊中剂量组、暖宫七味胶囊高剂量组。

1.4.2 台式液制备取NaCl 8 g、KCl 0.2 g、MgSO4·7H2O 0.26 g、NaH2PO4·2H2O 0.065 g、NaHCO31 g、CaCl20.2 g、葡萄糖 1 g，先将CaCl2用蒸馏水溶解完全，再加入其余6种物质溶解，转移至1 000 mL量瓶中，蒸馏水定容。

1.4.3 离体兔肠实验方法

1.4.3.1 离体兔肠药物处理方法称取0.42 g暖宫七味散及暖宫七味胶囊于10 mL蒸馏水中作为低剂量备用，称取1.68 g暖宫七味散及暖宫七味胶囊于10 mL蒸馏水中作为高剂量备用，将准备好的溶液于37 ℃、40 kHz超声仪器中，超声30 min，上层清液过滤纸，提取各组药物有效成分。

灰色模型预测的优点是利用较少的数据，就可以得到较为理想的预测结果，在信息贫乏、数据少时，相对于其他预测方法有其独到之处。灰色预测模型有很多，可以统一表达为GM(h，n)。通常情况下，在建立灰色模型进行预测时，较适合的模型应为单个变量模型，即GM(1，1)模型。该模型是一个变量、一阶微分的数列预测模型，预测起来较简单有效，应用领域比较广泛［2］。

1.4.3.2 离体兔肠动物处理方法参照兔离体肠平滑肌的实验方法[8-10]，采用木棍敲击日本大耳白兔后脑部位导致其死亡，立即剖开腹腔，找到胃后，剪取离胃幽门较近的一段十二指肠，放入预先处理的冷冻的台氏液培养皿中，轻轻剥离肠系膜，用台氏液将肠管的内容物冲洗干净，将肠管剪成约 2.0 cm 小段，放回冷冻台氏液中作为标本备用。取一小段标本一端穿线固定于L型通气钩上，另一端连接到肌张力传感器上，与BL-420F生物机能实验系统连接，然后将标本悬吊于盛有台氏液 (37 ℃±0.5 ℃，通氧)的离体器官浴槽中，通过肌张力传感器、生物信号处理系统进行平滑肌张力检测，调整肠肌力，观察正常肠肌活动，待肠段自发性舒缩稳定后，描记肠管正常运动曲线作为给药前平均张力。

实验时，用1 mL注射器吸取已经配置好的提取物，每次给药0.2 mL，台式液对照组加入等体积的台氏液，记录曲线后，立即用新鲜台氏液冲洗2～3次，待肠段舒缩恢复正常后才进行下一次给药，无法恢复正常舒缩的肠段弃去，观察并记录给药前后的曲线变化值。

1.5 热板实验方法将小鼠随机分为空白组、阳性药组、暖宫七味散剂低剂量组(0.78 g·kg-1)、暖宫七味散剂中剂量组(1.56 g·kg-1)、暖宫七味散剂高剂量组(2.18 g·kg-1)及暖宫七味胶囊剂低剂量组(0.78 g·kg-1)、暖宫七味胶囊剂中剂量组(1.56 g·kg-1)、暖宫七味胶囊剂高剂量组(2.18 g·kg-1)，空白组和阳性药组给予同体积羧甲基纤维素钠，其余各组给予相应药物灌胃15 d，末次给药30 min后，空白组腹腔注射生理盐水 0.1 mL·g-1，阳性药组腹腔注射质量浓度0.2%的盐酸哌替啶溶液0.01 mL·g-1，30 min后分别将小鼠置于热板仪(以小鼠第5次舔爪时间为标准)，记录小鼠疼痛阈值时间[11]。

1.6 醋酸扭体法将小鼠随机分为空白组、阳性药组、暖宫七味散低剂量组(0.78 g·kg-1)、暖宫七味散中剂量组(1.56 g·kg-1)、暖宫七味散高剂量组(2.18 g·kg-1)及暖宫七味胶囊低剂量组(0.78 g·kg-1)、暖宫七味胶囊中剂量组(1.56 g·kg-1)、暖宫七味胶囊高剂量组(2.18 g·kg-1)，空白组和阳性药组给予同体积羧甲基纤维素钠，其余各组给予相应药物灌胃15 d，末次给药30 min后，空白组腹腔注射质量浓度0.6%醋酸溶液0.2 mL复制小鼠疼痛模型，记录从给药后至小鼠出现扭体反应的时间。阳性药组腹腔注射质量浓度0.2%的盐酸哌替啶溶液0.2 mL，给药10 min后，腹腔注射0.2 mL质量浓度0.6%醋酸溶液制造疼痛模型，记录从给药后至小鼠出现扭体反应的时间。暖宫七味散及暖宫七味胶囊组给药后，腹腔注射质量浓度0.6%醋酸溶液0.2 mL复制疼痛模型，记录从给药后至小鼠出现扭体反应的时间[12]。

2 结果

2.1 暖宫七味散各剂量对离体兔肠平滑肌的影响与给药前比较，低剂量的暖宫七味散提取物后，平滑肌收缩明显变化，其峰型稳定平缓；与给药前峰值比较，给予高剂量暖宫七味散提取物后，峰形不稳，波动较大，对平滑肌收缩有作用，但作用不明显，见图1、图2。

图1 暖宫七味散低剂量对离体兔肠平滑肌的影响

图2 暖宫七味散高剂量对离体兔肠平滑肌的影响

图3 暖宫七味胶囊低剂量对离体兔肠平滑肌的影响

图4 暖宫七味胶囊高剂量对离体兔肠平滑肌的影响

2.3 暖宫七味散各剂量疼痛阈值结果比较具体结果见表1。

表1 暖宫七味散各剂量疼痛阈值结果比较

2.4 暖宫七味胶囊各剂量疼痛阈值结果比较具体结果见表2。

表2 暖宫七味胶囊各剂量疼痛阈值结果比较

2.5 暖宫七味散各剂量醋酸扭体时间比较具体结果见表3。

表3 暖宫七味散各剂量醋酸扭体时间比较

2.6 暖宫七味胶囊各剂量醋酸扭体时间比较具体结果见表4。

表4 暖宫七味胶囊各剂量醋酸扭体时间比较

3 讨论

目前，西医治疗原发性痛经尚缺乏特效药物，多采用雌孕激素，如安宫黄体酮片等[13]。以往的研究表明，该类药物可有效抑制前列腺素释放，避免前列腺素刺激子宫平滑肌收缩而引起血管痉挛，从而达到缓解疼痛的目的[14]。目前，化学药物治疗原发性痛经的治疗效率不够理想，不良反应较大，部分患者易复发[15]。

近年来，蒙医蒙药学在原发性痛经治疗中取得了显著的进展，在蒙医蒙药学中，原发性痛经的病机主要为外邪入侵，月经不调，蒙古语名sa rin hir tegxgui，是指月经周期、经量、经色、经质等方面有所改变的一类病症[16]。蒙医理论认为，月经不调主要是由于巴达干、下清赫依功能失调，致使气血运行受阻，引起肾及三舍二器的疾病[17-18]。治疗原则以抑制赫依、活气血、散寒止痛、暖宫调经为原则[19-20]。蒙药暖宫七味是一味蒙医常用的治疗原发性痛经药，方中肉豆蔻可理气和中、补益肾阳；黄精、手掌参可补肾益气、调经止痛；丁香可温中降逆、补肾助阳；沉香可行气止痛；麦门冬可清心除烦、滋阴润肺。诸药合用，可调和气血、散寒止痛、暖宫调经[21]。有研究表明，蒙药暖宫七味丸具有抑制心、肾“赫依”病的作用，能达到治疗痛经的目的[22]。研究表明，暖宫七味散可通过提高患者血清中的前列腺素来促进血管扩张和平滑肌的舒展[23]，不利于酸性代谢物的产生及其引起的神经刺激产生，从而达到调节子宫微循环的目的。蒙医研究治疗痛经药物的药效学研究时，常采用一些筛选试验，常用的致痛方法有物理(热、电、机械)和化学(冰醋酸、缓激肽、甲醛溶液)刺激法[24]。

本实验中采用醋酸扭体法建立疼痛模型是将一定量的冰醋酸注入小鼠腹腔，刺激脏层和壁层腹膜，引起深部较大面积、较长时间的炎性疼痛，致使小鼠出现扭体反应[25]。双侧腹内凹陷、伸展后肢、扭动爬行、蠕行等说明疼痛模型建立成功。该实验方法是筛选镇痛药的一种较敏感、简单、重复性好的化学刺激致痛方法。因此，凡是能解决以上病理因素导致疼痛的药物均可起到一定的镇痛效果。有研究显示，醋酸介导的伤害性反应是注射醋酸后腹腔pH值降低而直接刺激伤害传入神经纤维和炎性递质合成共同作用所致，因此，可认为本实验模型与中医理论之外邪入侵留滞体内导致气血瘀滞不通而引起疼痛有相似之处[26]。蒙药暖宫七味散及暖宫七味胶囊均可影响离体兔肠平滑肌的收缩，提高小鼠疼痛阈值，且暖宫七味散松弛平滑肌作用优于暖宫七味胶囊；暖宫七味胶囊和暖宫七味散均能提高昆明种小鼠痛阈，延长小鼠的抗醋酸疼痛模型的时间，且暖宫七味散松弛镇痛作用优于暖宫七味胶囊。

综上所述，暖宫七味散及暖宫七味胶囊均能提高小鼠的疼痛阈值时间，影响离体兔肠平滑肌收缩情况，具有明显镇痛作用，且暖宫七味散镇痛作用优于暖宫七味胶囊。