大庆地区生牛乳中霉菌毒素含量调查

杜新宇，符欣灵，唐贺尧，顾芷嫣，杨 宇，陈媛媛

黑龙江八一农垦大学，黑龙江大庆 163319

霉菌毒素是农作物在生长、收获和贮存期间，由生长在作物上的真菌产生。霉菌毒素通过饲料或铺草进入动物养殖生产系统。极少量的霉菌毒素就能引起畜禽肝脏、肠道损伤出血、呕吐、腹泻等中毒症状,导致动物采食量减少、体重下降、生长缓慢等生理变化，急性中毒死亡率高，妊娠母牛大量流产，产死胎。研究表明,当奶牛摄入浓度为1～10 µg/mL的黄曲霉毒素B1（AFB1）时,其体内的瘤胃微生物只能代谢降解不到10%的AFB1,其余90%没有被瘤胃微生物代谢的AFB1可在肝脏中经羟基化转化为毒性较低的AFM1代谢生成的黄曲霉毒素M1(AFM1)不仅可以与体内的葡萄糖酸结合,也可以通过全身循环系统代谢到尿和乳中。牛奶中OTA含量为5.0～84.1 ng/(kg·d)时对婴幼儿来说可能会造成伤害，OTA含量为2 730 ng/L时会对成年人健康造成威胁。关于大庆地区以往生牛乳中霉菌毒素水平的调查方面还存在着空白。本研究以通过国际上公认的高效液相色谱法对大庆地区小型养殖户生牛乳为研究对象，旨在明确生牛乳霉菌的污染情况与鉴定生乳污染乳霉菌毒素的主要种类。

1 材料和方法

1.1 实验动物

在大庆周边4个小型规模化牧场随机选取40头1～6胎次，产后42～525 d奶牛作为试验动物。对奶牛生牛乳中的霉菌毒素及其含量进行测定。

1.2 试验动物的饲料配方（营养成分）

实验选取大庆市某牛场，奶牛饲喂全混合日粮，组成为：进口苜蓿0.5 kg，国产燕麦草0.8 kg，全棉籽0 kg，玉米粉2.5 kg，大豆皮3 kg，南瓜籽0 kg，小麦秸1.5 kg，甜菜颗粒粕1 kg，喷浆玉米皮0 kg，玉米胚芽粕1 kg，啤酒糟8 kg，裹包苜蓿6.5 kg，豆粕1 kg，高产浓缩3.185 kg，泌乳宝1 kg，玉米青贮18 kg，糖蜜1 kg，水2.5 kg，压片玉米3.574 kg。

1.3 奶牛基本信息

指标平均值 (±标准差) (N=40)泌乳天数/d 229.83±122.02采食量/kg 26.90+1.34年龄 4.63±1.6胎次 3.13±1.39体况评分 3.13±0.40日产奶量kg/d 40.58± 11.55年产奶量/kg 11 653.46±1 821.83

1.4 试验仪器及试剂

高效液相色谱仪、40份生牛乳、离心机。

1.5 样品收集与处理

取5 g生牛乳样品加入10 mL ACN中，涡旋震荡2 min,超声提取15 min,吸取牛奶样品，牛奶10 000 r/min离心5 min，吸取有机相，过0.22 µm的有机膜，上机。

1.6 样品的检测

检测项目：黄曲霉毒素M1（AFM1）,黄曲霉毒素B1（AFB1）,赭曲霉毒素B（OTB），赭曲霉毒素A(OTA),HT-2毒素。

1.7 数据分析

将得到的数据利用SPSS 22.0软件对独立样本进行单因素方差分析，将得到的结果进行统计分析。结果用“平均值±标准差”表示，阈值P设为0.05。相关分析采用Pearson相关系数法。

2 试验结果

2.1 牛奶中霉菌毒素的检测结果

由表1可知，大庆地区的生牛乳中的AFB1、AFM1、DON、T-2、ZEA、OTA均有不同程度的检出。其中DON、T-2、ZEA的检出率最高为50%，但其含量并未超出我国规定的最高限量标准。其次是TOA检出率达到42.5%。

表1 大庆地区规模化牧场牛奶中霉菌毒素检出率

2.2 霉菌毒素的相关性检验结果

2.2.1 AFB1与各体况相关性

表2 AFB1与各体况相关性

2.2.2 AFM1与各体况相关性

表3 AFM1与各体况相关性

2.2.3 DON与各体况相关性

表4 DON与各体况相关性

2.2.4 T-2与各体况相关性

表5 T-2与各体况相关性

2.2.5 ZEA与各体况相关性

表6 ZEA与各体况相关性

2.2.6 OTA与各体况相关性

表7 OTA与各体况相关性

研究表明：AFM1对奶牛泌乳量影响最大，可明显降低奶牛泌乳量,影响奶牛生产性能。AFM1可以增加奶牛乳房炎的发病概率和减少奶牛的日常泌乳量，而且容易引起奶牛的采食量下降，同时导致奶牛体细胞数上升以及免疫机能的抑制，奶产量的下降会随着日粮中毒素的增加而愈发严重。随着奶牛采食含有黄曲霉毒素的饲料，奶牛体内的黄曲霉毒素含量增加，从而使得牛奶的损失量增加，并且牛奶中也可能含有M1形式的黄曲霉毒素。大庆地区生小型规模化牧场生牛乳中霉菌毒素含量较其他地区霉菌毒素含量低，但仍有进一步改善的空间。

大庆地区奶牛饲料和牛奶中的霉菌毒素污染程度均较低,DON、T-2、ZEA的检出率最高为50%，但其含量并未超出我国规定的最高限量标准。其次是TOA检出率达到42.5%，并未超过国家标准。但仍有少量样品的黄曲霉毒素含量超过欧盟标准。牧场1、牧场2牛奶中检测出的霉菌种类较牧场3、牧场4多，但每种毒素含量与牧场3、牧场4含量相比较低。我们可以通过改善饲料储存环境，提高检测水平,规范操作等措施降低牛奶中霉菌毒素的含量,同时也可以鼓励散户通过多种方式与规模厂合作,以减小牛奶感染霉菌毒素的风险。