藿夏口服液对免疫功能低下小鼠的影响研究

2022-05-16谢旭华谢仕源杨斌

生物化工 2022年2期

谢旭华，谢仕源，杨斌

（广西医科大学，广西南宁 530021）

藿夏口服液来源于民间验方，主要成分为淫羊藿、夏枯草等中药的提取物。壮医主要用于治疗痰凝瘀血阻滞之癌症[1]。夏枯草味辛，性寒，常用于软坚散结、消肿、抗肿瘤等；淫羊藿味甘，性温和，活性成分效果拔群，尤其是淫羊藿苷成分应用于抗肿瘤的研究获得突破性进展。本课题组前期对藿夏口服液进行研究，发现其具有提高免疫低下小鼠免疫力的作用[2]。本研究拟通过注射环磷酰胺建立免疫抑制模型，研究藿夏口服液对免疫抑制小鼠免疫功能的影响，为后续的研究提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物

SPF级昆明种小鼠，体重18～22 g，雌雄各半，健康状况良好，由广西医科大学实验动物中心提供，实验动物使用许可证号：SYXK桂2020-0004。

1.2 试剂与仪器

藿夏口服液，批号：200602，某生物技术有限公司提供；盐酸左旋咪唑片，批号：200202，仁和堂药业有限公司；注射用环磷酰胺，批号：9E310A，德国Baxter Oncology GmbH；10%绵羊红细胞，批号：20210128，北京百奥莱博科技有限公司；ELISA试剂盒，江苏晶美生物科技有限公司。

ACB-4A1细胞培养超净工作台，新加坡Esco科技有限公司；BioTek Synergy H1酶标仪，美国Molecular Devices公司。

1.3 实验方法

1.3.1 建模与给药

48只健康SPF级昆明种小鼠适应性饲养2天，随机分成空白组、模型组、左旋咪唑组（剂量为25 mg/kg）、藿夏口服液高剂量组（生药量浓度3.6 g/kg）、中剂量组（生药量浓度1.8 g/kg）、低剂量组（生药量浓度0.9 g/kg）。在实验第1、4、7天腹腔注射给药，空白组腹腔注射10 mL/kg生理盐水，其余每组以50 mg/kg环磷酰胺腹腔注射给药，建立环磷酰胺致免疫功能低下小鼠模型；之后除空白组外，各组均腹腔注射环磷酰胺（30 mg/kg)，每周一次，维持免疫抑制模型。实验第8天开始，每天固定时间灌胃给药1次，连续给药14天，空白组和模型组灌胃0.2 mL生理盐水，其余各组按剂量体积灌胃给药。

1.3.2 称重法测定小鼠免疫器官指数

末次给药1 h后采集小鼠体重；颈椎脱臼法处死小鼠，收集肝脏、脾脏和胸腺并分别准确称重，计算免疫器官指数。计算公式如（1）所示：

1.3.3 ELISA法测定免疫蛋白和细胞因子水平

各实验组眼眶取血，低温高速离心取血浆。根据相应的ELISA试剂盒说明书进行小鼠血浆IgA、IgG、IgM和细胞因子IL-2、IL-6、IFN-γ含量测定。

1.4 统计学分析

采用SPSS 22.0进行统计分析，结果均以±s表示。多组间比较采用单因素方差分析，两组间比较采用t检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果与分析

2.1 小鼠免疫器官指数测定结果

免疫功能低下是导致疾病发生的关键因素之一，免疫增强剂可明显促进免疫器官的生长发育，保障免疫功能的正常发挥[3]。脾脏、胸腺、肝脏指数可以在一定程度上反映试剂对免疫低下小鼠的影响，因此常用脏器指数来评价机体免疫功能的强弱[4-5]。

如图1所示，与空白组比较，各组肝脏指数和脾脏指数均显著升高；与模型组对比，左旋咪唑组、藿夏口服液低剂量组、中剂量组肝脏指数和脾脏指数均有所降低（P＜0.05）。实验结果说明，藿夏口服液低、中剂量对免疫低下小鼠的免疫功能有一定的改进作用。

图1 藿夏口服液对免疫低下小鼠免疫器官指数的影响

2.2 小鼠血浆免疫球蛋白及细胞因子水平测定

淋巴细胞反映机体特异性免疫功能，淋巴细胞所产生和分泌的免疫球蛋白及血清细胞因子，能维持细胞功能的正常作用，并对细胞间的互相影响有重要意义[6]。细胞因子也是免疫应答的重要参与者，IL-2不仅能够激活淋巴细胞和NK细胞，同时能调节细胞毒性。IL-6是活化的T细胞和成纤维细胞产生的淋巴因子，可诱导免疫细胞的增殖、分化，使B细胞前体成为产生抗体的细胞，增强NK细胞的裂解功能，对机体免疫有重要调节作用。IFN-γ具有较强的免疫调控作用，可促进NK细胞活性，介导细胞免疫的效应过程。

免疫球蛋白是一种蛋白质，具有抗体活性，有IgA、IgD、IgE、IgG和IgM五大类（按化学结构和抗原性差异分类）。IgA可介导吞噬作用，是抵抗微生物和抗原进入体内的第一道防线，同时也是机体黏膜免疫防御系统的重要成分。IgG是血清中最丰富的抗体，占抗体总量的70%～75%，是机体抗感染免疫的主力。IgG可中和细菌毒素的毒性，使有害物质解毒。IgM是体内最大的抗体，也称为巨球蛋白，具有杀菌、激活补体、免疫调理等生物免疫活性，在机体抗感染免疫早期发挥先锋作用。

如图2和图3所示，与空白组比较，模型组IgA、IgG、IgM、IL-2、IL-6浓度显著降低（P＜0.05或P＜0.01）；与模型组相比，左旋咪唑组、藿夏口服液低剂量组、中剂量组小鼠IgG、IgM含量水平显著提高（P＜0.01），藿夏口服液高剂量组IgA、IL-2、IL-6、IFN-γ含量显著提高（P＜0.05或P＜0.01）。实验结果说明，藿夏口服液对免疫低下小鼠血浆免疫球蛋白及细胞因子水平具有明显的改善作用。