CBX7蛋白在宫颈癌中的表达及其临床意义

哈提米汗·买买提，姑丽克孜·买买提热夏提，李俞霆，周常慧，李 榕

(新疆医科大学 公共卫生学院，新疆维吾尔自治区 乌鲁木齐 830000)

宫颈癌(cervical cancer，CC)是直接影响妇女身心健康的恶性肿瘤。近年来，尽管CC疫苗(人乳头状瘤病毒疫苗)的上市一定程度上降低了CC的发生，但女性CC的发病率仍居高不下， 且呈现出逐年年轻化的趋势。CC的发病机制仅从人类乳头状瘤病毒(human papilloma virus,HPV)感染的角度难以完全解释[1]。虽然CC在很大程度上可以通过检测，预防或者通过治疗癌前病变来治愈。但是CC仍被认为是全世界女性因癌死亡的主要原因之一[2-3]。目前，战略性消除CC是世界卫生组织提出的公共卫生问题[4]。随着恶性肿瘤的基因治疗逐渐成为肿瘤界的研究热点[5]，宫颈癌相关基因的探究和诊断、治疗宫颈癌提供新的研究方向迫在眉睫。因此，深入探究CC新的肿瘤标志物和预后的相关因子以及治疗靶点将可能为预测及治疗CC提供新的机制和策略。

色素框同源物7(chromobox homolog 7,CBX7)基因属于多梳基因(polycomb groub,PCG)家族的成员，参与体内多种生物调节过程，还参与细胞增殖和癌进展的调节[6]。目前，在宫颈癌的研究领域中关于CBX7基因表达的研究较少，因此，本研究拟探讨CBX7蛋白在宫颈癌组织中的表达与宫颈癌患者临床病理特征及预后的关系，探寻新的宫颈癌肿瘤标志物为预测宫颈癌患者预后提供重要借鉴。

1 资料与方法

1.1 资料

1.1.1 研究对象: 回顾性收集从2013年至2020年在新疆医科大学第一附属医院就诊的宫颈癌患者，按照纳入和排除标准选择71例患者并获取宫颈癌组织标本。本次研究中患者年龄范围23～75岁，平均年龄(49.9±10.3)岁。随访84个月，生存期平均(41.6±16.6)月。本次研究所有组织标本的获取都经过患者或家属签署知情同意，同时都经过新疆医科大学道德伦理委员会的批准(审批号：20170220-01)。本次研究对象纳入标准：1)经妇科检查，影像学检查和宫颈病理检查初次确诊为宫颈癌的患者；2)行手术切除宫颈癌组织之后组织病理学检查确诊为宫颈癌的患者；3)未患有其他妇科疾病和肿瘤的患者；4)术前已完善临床病理相关检查并在知情同意书上已自愿签字的患者；5)能够积极配合随访的患者。排除标准：1)术前已接受放、化疗等其他治疗手段，并未完善临床病理相关检查者；2)本身其他系统有严重疾病者；3)精神状态异常者。

1.1.2 临床资料： 从本医院电子病历系统调取符合纳入标准的71例宫颈癌患者相关的临床病理资料信息，主要是包括年龄、组织分型、临床分期、组织分化、肿瘤大小、淋巴转移、脉管侵袭、生育和绝经情况等资料。

1.1.3 随访资料： 临床资料齐全的71例宫颈癌患者的生存资料采用医院电子随访系统和打电话联系本人或者家属来了解宫颈癌术后患者的生存状态、身体恢复情况。随访截至时间为2020年7月31日。

1.2 方法

免疫组化(immunohistochemistry,IHC)检测蛋白:免疫组织化学法检测人宫颈癌组织CBX7蛋白的表达情况。主要试剂包括通用二步法试剂盒(抗兔)；山羊血清和DAB 显色试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司)；兔抗人CBX7 抗体(ab123492，Abcam公司)。

本研究PBS取代第一抗体作为阴性对照。按以下步骤进行：石蜡切片脱蜡，水化，抗原修复，去除内源性过氧化物酶，室温下血清封闭30 min，加一抗孵育过夜，CBX7抗体稀释比例为1∶200，加二抗室温孵育2 h，PBS液洗3遍。新鲜配置的DAB显色液显色3 min，自来水终止显色。苏木精复染1.5 min，返蓝，脱水，透明，晾干后用中性树胶封片，然后在显微镜下观察宫颈癌组织切片CBX7蛋白的表达情况。CBX7蛋白主要表达在细胞核中，细胞质也有少量的表达，阳性表达是胞核和胞质出现棕褐色，阴性表达是细胞核染成蓝色，其余部分也没有棕褐色。在光学显微镜高倍视野(×100)随机选取5个视野，采用定性分析判定表达水平，评价指标为根据每一个显微镜视野的阳性染色面积≤25%视为阴性表达，25%～50%视为低表达，≥50%视为高表达[7]。最终采用双盲法请两位病理专家独立阅片，并对染色结果进行评估，对于专家评估差异较大的切片再评估进行讨论后确定。

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 宫颈癌组织标本中CBX7的不同表达水平

有42例(59.2%)阴性表达的宫颈癌组织标本染成蓝色；19例(26.8%)低表达宫颈癌组织标本染成淡棕色，10例(14.0%)高表达的宫颈癌组织标本染成棕褐色(图1)。

2.2 宫颈癌组织标本中CBX7的表达及临床病理特征的关系

根据CBX7的表达水平将患者分为阴性表达、低表达和高表达水平组，结果发现，CBX7表达水平在不同临床分期、淋巴转移和脉管侵袭等临床病理特征上均有差异(P<0.05)(表1)。

A.negative expression；B.low expression；C.high expression图1 宫颈癌组织标本中CBX7的不同表达水平Fig 1 Different expression levels of CBX7 in cervical cancer tissue specimens(scale bar=100 μm)

表1 宫颈癌组织标本中CBX7的表达及临床病理特征的关系Table 1 Expression of CBX7 in cervical cancer tissues and its clinicopathological characteristics[n(%)]

2.3 宫颈癌组织标本中CBX7表达水平与患者的生存的关系

CBX7阴性表达的宫颈癌患者的生存率为18/42(42.9%)，而CBX7低表达水平的宫颈癌患者的生存率为6/19(31.6%),CBX7过表达水平的宫颈癌患者的生存率为6/10(60.0%)。从71例患者的生存曲线可以看出，随着时间的延长，患者总生存率逐渐下降(图2A)，与CBX7阴性和低表达组患者相比，CBX7高表达的宫颈癌患者的3年、5年生存率均明显提高(Log-rank test=6.27，P<0.044,图2B)。

A.survival curve; B.survival analysis of patients with cervical cancer with different expression levels of CBX7; Cum.cumulative图2 71例宫颈癌患者的生存曲线Fig 2 Survival curve of 71 patients with cervical cancer

2.4 宫颈癌组织标本中CBX7蛋白的表达与宫颈癌患者预后的关系

手术后大概84个月的时间里，71例宫颈癌患者中，30例(42.3%)生存，22例(31.0%)死于宫颈癌，19例(27.7%)因其他原因死亡。不同CBX7表达量的患者生存率间有差异(P<0.05)(表2)。

表2 单因素生存分析Table 2 Univariate survival analysis

CBX7高表达与低表达组间无差异,但是CBX7高表达与阴性表达组间有差异(P<0.05)。说明宫颈癌组织中CBX7表达可能是一个影响宫颈癌患者生存的预后预判因素，CBX7阴性表达可能会更不利于患者的预后(HR=0.276，95%CI=0.088～0.872，P<0.05)(表3)。

3 讨论

多项体内和体外的实验研究证明，宫颈癌的发生发展中有不同的癌基因和抑癌基因扮演者不同的角色。更深入探讨相关蛋白的表达有助于进一步证明宫颈癌的发病机制，同时可以提高临床分子诊断的准确性，有利于筛查和改善患者的预后[8-9]。近年来不断有研究发现，CBX7基因在卵巢癌、乳腺癌等多种恶性肿瘤中表达不足或缺失是肿瘤形成、生长、转移及预后紧密相关，CBX7可通过负向调控PTEN/Akt信号通路抑制胰腺肿瘤的发生发展，并与正常胰腺组织相比， CBX7在胰腺导管腺癌中的表达显著下调[7]。基于此，CBX7可认为是一种新的抑癌基因[10-11]，更有理由假设CBX7在宫颈癌当中有可能作为一种抑癌基因。

表3 多因素COX回归分析Table 3 Multivariate Cox regression analysis

本研究采用免疫组化检测宫颈癌组织中CBX7的表达水平，同时跟踪随访进行生存分析来探讨宫颈癌组织CBX7的表达水平与患者临床信息及预后的关系。本研究发现CBX7蛋白在宫颈癌组织中阴性表达率较高，而且CBX7的不同表达水平在宫颈癌患者不同的临床分期、淋巴转移和脉管侵袭等几项临床病理特征上有差异，然而，CBX7高表达的宫颈癌患者总生存率高于低表达或阴性表达的患者。其他的研究人员在胰腺癌[12]和乳腺癌[13]等几种恶性肿瘤中有关CBX7蛋白的研究中也得到了相似的研究结果，提示宫颈癌中CBX7蛋白的表达可能会下调,而且CBX7表达量的下调可能与患者不良预后有关。因此，宫颈癌组织中CBX7蛋白的阴性表达可能不利于患者预后。

综上所述，CBX7蛋白在宫颈癌组织中的表达水平与患者的不同临床病理特征及预后有关。本研究从组织学水平初步探讨了CBX7蛋白在宫颈癌组织中的表达与患者临床病理特征及其预后的相关性，推测CBX7蛋白在宫颈癌中起到抑癌作用。然而，本次研究随访时间过长，且样本来源较为局限，后期需缩短随访时间，扩大患者覆盖范围，进一步验证实验结果。此外，CBX7蛋白在宫颈癌的发病发展机制中的影响尚不够明确，有待进行更深入的分子生物学研究。