血清高三酰甘油对机采血小板保存期间活化损伤的影响研究*

谢金晶，蒋靓，高薇，李维洁，王玲玲，汤龙海

(1 苏州大学附属第一医院江苏省临床免疫研究所，苏州 215007；2 江苏省苏州市中心血站)

血小板捐献者的血脂能够影响机采血小板的活化聚集，血清三酰甘油(triglycerides,TG)水平升高易导致炎症反应，甚至促进动脉粥样硬化的形成[1-2]，导致临床输注患者出现不良反应。血小板体外活化的研究对血小板功能及心血管疾病的研究具有重要意义。因此，本研究分析不同血清TG 水平对机采血小板在不同保存时间的活性损伤，旨在探讨高水平TG对机采血小板保存期间活性聚集的作用，为临床上的血小板输注提供指导意见。

1 资料与方法

1.1 一般资料 纳入2021 年5—7 月苏州市中心血站无偿捐献机采血小板供者131 名，均为女性，年龄25～40 岁。纳入标准：符合国家规定的血小板捐献者体检标准；采前外周静脉血血小板达(150～449)×109/L；2 次的采集间隔时间≥14 d；采集前72 h 内未服用阿司匹林类药物。使用自动生化分析仪对血小板捐献者进行临床常规TG 测定(酶法)，根据血清TG水平分组：正常组(＜1.70 mmoL/L) 90 例、临界性高组(1.70～2.25 mmoL/L)21 例和升高组(＞2.25 mmoL/L)20 例。

1.2 检测方法 采用滤白法机采血小板，利用MCS+血细胞分离机和994E 耗材(美国血液技术公司)，选择LDPLP 程序进行血小板采集。血小板采集设定量为≥2.5×1011/袋；血小板容量设定为250～300 mL；同时进行血小板质控检测，质量符合机采血小板国家质量标准。利用机采血小板的留样袋，留取血小板10 mL/人，置于(22±2) ℃水平震荡的血小板保存箱内保存，分别于第1、2、3、4、5 天时，取出部分血小板使用小留样袋或EP 管分装4 袋，进行流式细胞仪检测。用磷酸缓冲盐溶液(HYCLONE，美国，#SH30256.01)调整浓度为(1～3)×109/L 的血小板悬液，具体步骤：同型对照组加入磷酸盐缓冲液各20 μL；测定管加P 选择素(P-selectin,CD62p)-PE(Biolegend，美国，304905)、血小板颗粒膜蛋白(platelet granule membrane protein,CD63)-PE(Biolegend，美国，#353004)各20 μL；取上述血小板悬液20 μL 分别加入同型对照管和测定管，轻轻混匀，室温下避光孵育15 min；加入1 mL 4%多聚甲醛(biosharp，中国，#bl539a)混匀，上机检测。

1.3 观察指标 3 组分别于保存第1、2、3、4、5 天进行血小板计数，使用流式细胞术检测血小板表面CD62p和CD63 的表达水平，比较不同血清TG 水平下的血小板活化水平[3]。

1.4 统计学方法 所有数据使用EXCEL 软件和SPSS 26.0 进行处理，血小板的检测数据使用中位数表示；两组间的比较采用非参数检验中的Wilcoxon 检验，两组以上数据间比较采用Friedman 检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

血清TG 正常组和临界性高组血小板在不同保存时间下的CD62p 和CD63 的表达水平无明显变化(P＞0.05)；升高组血小板在不同保存时间下CD62p和CD63 的表达水平明显高于正常组(P＜0.05)，见表1 和图1。

表1 3 组在不同保存时间下血小板活性的比较%

图1 体外保存条件下各时间点血小板表面CD62p 和CD63 的表达

3 讨 论

目前用于临床输注的血小板，在22 ℃、60 次/min振荡保存的条件下可以体外保存5 d，尽管在第5 天时血小板的活化水平有所升高，但仍能控制在较低水平。随着科技的进步，机采血小板逐渐普及，但血小板的活化问题仍是目前亟待解决的难题[4]。将机采血小板留存实验样本，通过贝克曼库尔特AU 生化分析系统分析血小板捐献者TG 水平，流式细胞术检测血小板活化表面标志物CD62P、CD63 的表达，分析血小板活化与TG 水平的相关性[5]。CD62P 是颗粒膜糖蛋白，血小板的活化后其表达明显上升，是检测血小板活化的金标准[6]。静止血小板质膜上的溶酶体膜蛋白CD63 表达较低，但在溶酶体发生释放反应后，CD63 在血小板质膜上的表达升高，因此，如果血小板质膜上检测到CD63 的表达升高，则表明血小板活化[7]。本研究设置不同保存时间下，血小板活化能力的变化结果表明，在5 d 保存期间内，血小板的活化水平受到血小板捐献者血清TG 水平的影响，血清TG 水平处于正常和临界性高血小板捐献者的机采血小板，能在一定程度上处于静止状态，维持其黏附结合能力，减少血源性疾病的传播；然而，血清TG 水平较高的血小板捐献者的血小板在保存期间活化水平较高，临床输注的意义不大。探究血清TG对机采血小板活化水平的影响，能减少不必要的医疗资源浪费，对于临床患者急救输注具有重要意义。

高脂血症是临床上常见的代谢性疾病，主要是由于机体内TG 及血浆胆固醇水平不稳定，导致脂肪代谢及转运过程出现异常[5-7]。随着人们生活水平的提高以及久坐不动等不良生活习惯，高脂血症的发病率正在逐年上升[8-10]。本研究发现血小板捐献者血清TG水平较高，具有潜在的高脂血症发病风险，在现有阶段可以通过健康教育的方式，向血小板捐献者宣传高脂血症的危害，倡导人们合理饮食，加强健康锻炼。

另外，血脂异常是心、脑血管疾病的发病原因之一，患者体内的TG、总胆固醇水平以及血小板的活化程度对心、脑血管疾病的发生发展具有重要作用，对血脂异常的早预防和早治疗是减少心血管疾病发生的有效手段[11-13]。本研究表明，高TG 水平的血小板捐献者提供的血小板在保存期间内活化水平较高，对患者的炎症反应以及心血管疾病产生一定影响，应尽量避免用于临床输注。

综上所述，在血小板保存期内，机采血小板的活化水平受血小板捐献者血清TG 水平的影响，高TG水平明显影响血小板的活化，应尽可能使用血清TG水平正常的捐献者的血小板，进而提高输注效率，且TG 的水平有助于临床对高脂血症及其并发症的诊断、治疗、疗效观察及预后判断。