外周血单个核细胞TMEVPG1、NRON的表达与精神分裂症患者症状和认知功能的关系

祁 娜，白田妹，徐天朝

0 引 言

精神分裂症是临床上常见的重性精神障碍，患者可能存在严重的认知功能损伤[1]。我国精神分裂症12月患病率和终生患病率分别为0.6%和0.7%[2]。长链非编码RNA(long non-coding RNA，lncRNA)是一段经RNA域转录、长度>200个核苷酸的RNA片段，在表观遗传学调控和细胞周期调控中起到重要作用[3]。lncRNA在精神分裂症中的作用近年来受到广泛关注。既往研究证实，lncRNA在精神分裂症早期诊断、病情及疗效评价中有重要价值[4-5]。lncRNA与精神分裂患者认知功能 的关系既往少有报道。精神分裂症患者认知功能损伤与炎症损伤密切相关[6]，而lncRNA又与炎症损伤的发生和发展有关[3]，因此我们推测lncRNA与精神分裂症患者的认知功能有关。lncRNA TMEVPG1由位于干扰素基因附近的基因编码，可影响干扰素γ的表达水平，进而介导免疫炎症[7]。lncRNA NRON已被证实与造血和免疫密切相关[8]。TMEVPG1和 NRON已证实在精神分裂症患者中高表达，并且与血清炎症因子白细胞介素6的表达呈正相关[9]，但是两者在精神分裂症中的临床价值既往少有报道。本研究采用荧光定量PCR检测首发精神分裂症患者外周血单个核细胞中TMEVPG1、NRON的表达水平，用MATRICS 公认认知成套测验(MATRICS consensus cognitive battery，MCCB)评价认知功能，分析两者关系，旨在为理解精神分裂症患者的认知功能障碍提供新思路。

1 资料与方法

1.1 研究对象选择2016年6月至2018年6月本院门诊收治的68例精神分裂症患者(精神分裂症组)，全血标本冻存于-80 ℃冰箱。纳入标准：①首发精神分裂症患者，符合美国精神障碍诊断与统计手册(第五版)的诊断[10]；②未服用抗精神病药、抗抑郁药和精神活性药物等；③可配合完成MCCB测验。排除标准：①急慢性感染性疾病；②精神发育迟滞；③脑器质性疾病；④内分泌或免疫系统疾病。同期来自本院体检中心的50例健康人作为对照组。纳入标准：①无精神疾病或精神疾病家族史；②可配合完成MCCB测验；③无重大躯体疾病。本研究经医院伦理委员会批准[批准号：伦审K(2015)12号]，所有受试者签署知情同意书。

1.2 检测方法样本检测于2019年1-9月完成。用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞，Ficoll分离液购于华雅再生医学生物工程技术有限公司，货号为17-5442-02。用Trizol法提取细胞总RNA，随后反转录为cDNA。总RNA提取试剂盒和反转录试剂盒均购于上海联迈生物工程有限公司，货号分别为LM18-75400和BC4075。用SYBR Select Master Mix试剂盒进行荧光定量PCR，试剂盒购于上海联迈生物工程有限公司，货号为LM3812A。TMEVPG1和 NRON引物均由苏州泓迅生物科技股份有限公司设计并提供，TMEVPG1引物序列：上游5′- CCCAAGCTTGCGTTCTTTTCGAGGTCGGC-3′，下游5′- CCGGAATTCTGACGGTAGTTTCCCAAGTT-3′；NRON引物序列：上游5′-AGUUUUGCAUAGUUGCACUCAC-3′；下游5′-GCTCACTGCAACCTCCTCCTCC-3’。 内参β-actin：上游 5′-TGGAATCCTGTGGCATCCATGAAAC-3′；下游5′- ACGCAGCTCAGTAACAGTCCG-3′。反应条件为：50 ℃ 120 s；95 ℃ 120 s；95 ℃ 15 s；60 ℃ 60 s，共40个循环。用2-△△Ct法计算TMEVPG1和 NRON相对表达量。

1.3 临床评估

1.3.1 精神分裂症的症状严重程度用阳性与阴性症状量表(Positive and Negative Syndrome Scale，PANSS)评价精神分裂症的症状严重程度，评分包括阳性分量表7项(妄想、概念紊乱、幻觉、兴奋、夸大、猜疑/被害、敌对)、阴性分量表7项(情感迟钝、情感退缩、交流障碍、退缩、抽象思维困难、交谈缺乏自发性和流畅性、刻板思维)、精神病理分量表16项(焦虑、自罪感和紧张等)，分值越高症状越重。该量表标准化Cronbach α值为0.8707，信效度较好[11]。

图1 TMEVPG1、NRON单独以及联合诊断精神分裂症的ROC曲线

1.3.2 认知功能用MCCB对认知功能进行评价，该系统用于精神分裂症患者认知功能评估有较好的敏感性，与功能评定和临床评定量表之间具有较高的一致性[12]。MCCB共包含9个分测验，评估7个认知维度。①信息处理加工速度：连线测验、符号编码测验、语义流畅测验；②注意/警觉：持续操作测验；③工作记忆：空间广度测验；④言语学习：霍普金斯词语学习测验；⑤视觉学习：空间记忆测验；⑥推理/问题解决：迷宫测验；⑦社会认知：情绪管理测验。将评分的粗分转化成标准T分(均数为50，标准差为10)后进行分析。

2 结 果

2.1 一般资料比较2组性别、年龄和受教育年限等一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，有可比性，见表1。

2.2 精神分裂症患者外周血单个核细胞TMEVPG1、NRON的表达水平及其诊断价值精神分裂症组单个核细胞TMEVPG1、NRON的相对表达量分别为(4.80±1.12)和(3.14±1.24)，对照组分别为(2.06±0.89)和(1.67±0.73)，组间比较差异均有统计学意义(P<0.01)。TMEVPG1、NRON诊断精神分裂症的AUC分别为0.801和0.719，当截断值为4.15、2.94时，约登指数最大(分别为0.539和0.541)，此时灵敏度分别为80.56%和72.95%，特异度分别为73.33%和81.10%，两者联合检测可将AUC提高至0.854，见图1。

表1 入组受试者一般资料比较

2.3 精神分裂症的症状严重程度和认知功能精神分裂症患者PANSS量表阳性症状评分为(25.60±3.08)分，阴性症状评分为(23.14±3.41)分，精神病理症状评分为(40.03±4.81)分，总分为(89.13±12.14)分。MCCB测验评分结果见表2。与对照组比较，精神分裂症患者信息处理加工速度、注意警觉性、工作记忆、言语学习、视觉学习、推理问题解决和社会认知均较差(P<0.01)。

表2 入组受试者MCCB测验结果比较分)

2.4 TMEVPG1、NRON与精神分裂症患者症状严重程度的关系相关性分析结果显示，TMEVPG1和NRON水平均与PANSS量表阴性症状评分和总分呈正相关(P<0.05)，见表3。

表3 TMEVPG1、NRON与精神分裂症患者症状严重程度的关系

2.5 TMEVPG1、NRON与精神分裂症患者认知功能的关系相关性分析结果显示，TMEVPG1与精神分裂症患者信息处理加工速度和工作记忆呈负相关(P<0.05)，NRON水平与注意警觉性呈负相关(P<0.05)，见表4。

表4 TMEVPG1、NRON与精神分裂症患者认知功能的关系

3 讨 论

精神分裂症严重影响了患者的生活质量[13]。随着全基因组关联研究的进展，近年来精神分裂症分子遗传学基础的信息激增。越来越多研究显示，lncRNA参与了精神分裂症的发生和发展[5,14-15]。lncRNA多位于细胞核，在哺乳动物大脑和基因组中高表达[16]。脑组织和外周血白细胞的基因表达有共同调节通路，脑组织中高表达的lncRNA在外周血中也有明显表达[17]。通过检测外周血单个核细胞lncRNA表达水平可以反映脑组织水平变化[17]。本研究采用荧光定量PCR检测了外周血单个核细胞TMEVPG1、NRON的表达，发现精神分裂症患者TMEVPG1、NRON表达水平明显高于健康人。本研究结果显示，TMEVPG1、NRON表达水平与精神分裂症患者病情严重程度和认知功能有关。

lncRNA与精神分裂症的发生和发展有关，其机制可能涉及以下几个方面：①调控与精神分裂症相关的基因[18]，另外lncRNA异常甲基化会增加精神分裂症发病风险[19]；②通过介导免疫炎症反应促进精神分裂症的发生和发展[9]；③影响大脑结构(如杏仁核和海马)和神经突触可塑性[20]。总之，lncRNA在精神分裂症中的作用机制目前尚未明确，值得深入探究。本研究检测的TMEVPG1、NRON可能是通过影响免疫炎症参与精神分裂的发生[9]。TMEVPG1可以增强CD4 T淋巴细胞活性，提高干扰素γ水平，参与免疫炎症性损伤[7]。NRON已被证实可通过介导免疫炎症，参与某些风湿性疾病的进展[8]。本研究发现，精神分裂症患者外周血单个核细胞TMEVPG1、NRON呈高表达水平，这与既往报道一致[9]。目前精神分裂症主要依靠症状学进行诊断，缺乏有效的生物学标志物。本研究发现，TMEVPG1、NRON以及两者联合诊断精神分裂症的AUC分别为0.801、0.719、0.854，提示诊断价值较高。lncRNA诊断精神分裂症的实用性和有效性值得未来深入研究。

免疫炎症损伤与精神分裂症中阳性症状维度、阴性症状维度、认知症状维度密切相关，但是与阳性症状维度关系不大[21]。本研究显示，TMEVPG1和NRON水平均与PANSS量表阴性症状评分和总分呈正相关，而与阳性症状无关，这在一定程度上印证TMEVPG1和NRON可能是通过影响免疫炎症而发挥作用的。精神分裂症患者认知功能损伤的研究一直是临床研究重点，免疫炎症损伤在认知功能中的作用近年来引起广泛重视，炎症损伤可能通过影响五羟色胺水平、神经营养因子和突触可塑性等影响认知功能[22]。本研究发现，TMEVPG1与精神分裂症患者信息处理加工速度和工作记忆呈负相关，NRON水平与注意警觉性呈负相关，提示不同lncRNA涉及的认知维度可能不同，这可能与其作用机制不同和精神分裂症病理机制复杂有关。

本研究的局限性为：①本研究以免疫炎症损伤为出发点，选择TMEVPG1和NRON进行研究，但是未直接检测患者炎症损伤程度；②未分析TMEVPG1和NRON不同病程阶段的表达水平变化；③未对患者进行随访，TMEVPG1和NRON与治疗应答、预后的关系需要未来进一步分析。

综上所述，外周血单个核细胞TMEVPG1、NRON的表达与精神分裂症患者的阴性症状及认知功能有关。